劉寧_dna重組技術(shù)的基本工具-文庫吧資料
2025-02-12 09:11本頁面
【正文】 金芽孢桿菌的抗蟲基因，還有植物的抗病（抗病毒、抗細(xì)菌）基因、種子貯藏蛋白的基因，以及人的胰島素基因、干擾素基因等。 。 標(biāo)記基因 ，便于進(jìn)行 篩選 。 ? 作為運(yùn)載體必須具備哪些條件？ 復(fù)制并穩(wěn)定地保存 。 質(zhì)粒的存在與否對宿主細(xì)胞生存沒有決定性作用，但復(fù)制只能在宿主細(xì)胞內(nèi)成。 最常用的質(zhì)粒是 大腸桿菌的質(zhì)粒 。 最常用運(yùn)載體 —— 質(zhì)粒 實(shí)際上 在基因工程操作中，真正被用作載體的質(zhì)粒，都是在天然質(zhì)粒的基礎(chǔ)上進(jìn)行過人工改造的。 有標(biāo)記基因的存在，可用含青霉素的培養(yǎng)基鑒別。 4）必須是 安全 的 ，對受體細(xì)胞 無害 。 2）具多個 限制酶切點(diǎn) ，以 便與外源基因連接 。coliDNA連接酶 T4DNA連接酶 大腸桿菌 T4噬菌體 恢復(fù)磷 酸二酯 鍵 只能連接 黏性末端 能連接 黏性末端 和 平末端 (效率較低 ) 閱讀課本第 5頁 “分子縫合針” ——DNA連接酶 的相關(guān)內(nèi)容，填寫下表 自主學(xué)習(xí) DNA連接酶 DNA聚合酶 相同點(diǎn) 作用實(shí)質(zhì) 化學(xué)本質(zhì) 不 同 點(diǎn) 模板 作用對象 作用結(jié)果 用途 都能催化形成 磷酸二酯鍵 都是蛋白質(zhì) 不需要 需要 形成完整的重組 DNA分子 形成 DNA的一條鏈 基因工程 DNA復(fù)制 DNA連接酶與 DNA聚合酶的比較 只能將 單個核苷酸 連接到已有的DNA片段上，形成磷酸二酯鍵 在 兩個 DNA片段之間 形成磷酸二酯鍵 不同點(diǎn)： 連接酶的作用是 ：將 DNA片段間 互補(bǔ)配對的兩個黏性末端連接起來，使之成為一個完整的 DNA分子。 是不是把兩者的黏性末端黏合起來，這樣就真的合成重組的 DNA分子了 ? 基因的針線： DNA連接酶 G A A T T C C T T A A G G A A T T C C T T A A G G C T T A A A A T T C G G C T T A A A A T T C G G C T T A A A A T T C G 用同種限制酶切割 ２、基因的針線 ── DNA連接酶 連接酶的作用是：將互補(bǔ)配對的兩個黏性末端連接起來，使之成為一個完整的 DNA分子。 DNA被限制酶切斷后有兩個反向互補(bǔ)的“黏性末端”。 你能推測限制酶存在于原核生物中的作用是什么嗎？ 尋根問底 限制酶就是細(xì)菌的一種防御性工具，當(dāng)外源DNA侵入時，會利用限制酶將外源 DNA切割掉，以保證自身的安全。 SmaI只能識別 CCCGGG序列， 并在 C和 G之間切開。 專一性 來 源： 作 用： 切斷兩個特定核苷酸之間的 磷酸二酯鍵 中軸線 在 G與 A之間切割 大腸桿菌的一種限制酶 (EcoRⅠ) 只能識 GAATTC 序列 ， 并在 G和 A之間切開。所以不同的生物 DNA可以嫁接 地球上的所有生物共用一套遺傳密碼，所以，一種生物的基因可以在另外一種生物體內(nèi)得以表達(dá) DNA重組技術(shù)的基本工具 ? 準(zhǔn)確切割 DNA的工具（“分子手術(shù)刀”） ——限制性內(nèi)切酶 ? DNA片段的連接工具（“分子縫合針”） ——DNA連接酶 ? 基因轉(zhuǎn)移工具（“分子運(yùn)輸車”） ——基因進(jìn)入受體細(xì)胞的載體 “分子手術(shù)刀” —— 限制性核酸內(nèi)切酶（簡稱限制酶） 即一種限制酶只能識別 一種特定的核苷酸序列 ，并且能在 特定 的切點(diǎn)上切割 DNA分子。 原理 ： 操作水平 ： 結(jié) 果 ： 基因重組 DNA分子水平 定向地改造生物的遺傳性狀，獲得人 類所需要的品種。這就要用到 定向改造生物 的新技術(shù) ——基因工程 又叫做 基因拼接技術(shù) 或 DNA重組技術(shù) 。通俗的說，就是按照人們的意愿，把一種生物的某種基因提取出來，加以修飾改造，然后放到另一種生物的細(xì)胞里， 定向 地改造生物的 遺傳性狀 。 基因工程： 思考 ： 為什么能把 一種生物 的基因 “嫁接 ”到 另一種生物 上并成功表達(dá)？ 大多數(shù)生物的遺傳物質(zhì)都是 DNA，且主要為雙螺旋結(jié)構(gòu)，即不同生物的 DNA分子基本結(jié)構(gòu)是相同的，都遵循堿基互補(bǔ)配對原則 。 特 點(diǎn) ： 存在原核生物 (主要是微生物 )體 內(nèi)。 舉例： 黏性末端 黏性末端 EcoRI限制酶的切割 被限制酶切開的 DNA兩條單鏈的切口，帶有幾個 伸出的核苷酸 ， 他們之間正
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