基因工程制藥培訓(xùn)-文庫吧資料
2025-01-09 13:26本頁面
【正文】 應(yīng)用到這一領(lǐng)域，發(fā)現(xiàn)基因工程菌經(jīng)固定化后，質(zhì)粒的穩(wěn)定性大大提高，便于進(jìn)行連續(xù)培養(yǎng)，特別是對分泌型菌更為有利。 采用膜透析裝置是在發(fā)酵過程中用蠕動泵將發(fā)酵液抽出打入罐外的膜透析器的一側(cè)循環(huán)，其另一側(cè)通入透析液循環(huán)，在補(bǔ)料分批培養(yǎng)中，大量乙酸在透析器中透過半透膜，降低培養(yǎng)基中的乙酸濃度，并可通過在透析液中補(bǔ)充養(yǎng)分而維持較合適的基質(zhì)濃度，從而獲得高密度菌體。優(yōu)化這三個參數(shù)以保證在第一階段培養(yǎng)時質(zhì)粒穩(wěn)定，菌體進(jìn)入第二階段后可獲得最高表達(dá)水平或最大產(chǎn)率。為了解決這一問題，人們將工程菌的生長階段和基因表達(dá)階段分開，進(jìn)行兩階段連續(xù)培養(yǎng)。 連續(xù)培養(yǎng)可以為微生物提供恒定的生活環(huán)境，控制其比生長速率，為研究基因工程菌的發(fā)酵動力學(xué)、生理生化特性、環(huán)境因素對基因表達(dá)的影響等創(chuàng)造了良好的條件。 在分批培養(yǎng)中，為保持基因工程菌生長所需的良好微環(huán)境，延長其生長對數(shù)期，獲得高密度菌體，通常把溶氧控制和流加補(bǔ)料措施結(jié)合起來，根據(jù)基因工程菌的生長規(guī)律來調(diào)節(jié)補(bǔ)料的流加速率。連續(xù)培養(yǎng)則多用于動力學(xué)特性和穩(wěn)定性等研究。 基因克隆的載體質(zhì)粒 DNA分子都具有復(fù)制子、選擇性標(biāo)記、克隆位點 。 載體（ vector） 質(zhì)粒（ plasmid） 質(zhì)粒是生物細(xì)胞內(nèi)固有的、能獨立于寄主細(xì)胞染色體外而自主復(fù)制、并被穩(wěn)定遺傳的一類核酸分子 。不致病、使用安全，分泌能力強(qiáng)，可將表達(dá)產(chǎn)物直接分泌到培養(yǎng)液中， 具有一定的糖 基化 能力 真核細(xì)胞 （ 1）酵母 特點： ① 真核生物細(xì)胞，表達(dá)產(chǎn)物能糖基化； ② 基因組小，僅為大腸桿菌的 4倍； ③ 世代時間短，繁殖迅速； ④ 基因操作與原核生物相似； ⑤ 建立了有分泌功能的表達(dá)系統(tǒng)，將產(chǎn)物分泌出胞外，分離純化工藝相對簡單。羥基末端進(jìn)行同質(zhì)多聚物加尾 堿性磷酸酶 切除末端磷酸基 常用的方法 : cDNA克隆示意圖 DNA聚合酶 I mRNA 反轉(zhuǎn)錄酶 ssDNA dscDNA dscDNA 核酸酶 S1 序列已知；直接成本DNA合成儀 ?基因 的克隆與表達(dá) 一、宿主菌的選擇 宿主菌應(yīng)滿足以下要求： ① 具有高濃度、高產(chǎn)量、高產(chǎn)率； ② 能利用易得廉價原料； ③ 不致病、不產(chǎn)生內(nèi)毒素； ④ 發(fā)熱量低，需氧低，適當(dāng)?shù)陌l(fā)酵溫度和細(xì)胞形態(tài)； ⑤ 容易進(jìn)行代謝調(diào)控； ⑥ 方便重組 DNA操作 ； ⑦ 產(chǎn)物容易提取純化。常用于 cDNA第二鏈合成，雙鏈 DNA 3?末端標(biāo)記等 反轉(zhuǎn)錄酶 合成 cDNA 替代 DNA聚合酶 I進(jìn)行填補(bǔ)，標(biāo)記或 DNA序列分析 多聚核苷酸激酶 催化多聚核苷酸 5180。羥基末端之間形成磷酸二酯鍵，使 DNA切口封合或使兩個 DNA分子或片段連接 DNA聚合酶 Ⅰ 合成雙鏈 cDNA分子或片段連接 缺口平移制作高比活探針 DNA序列分析 填補(bǔ) 3180?；蚬こ?制藥簡介 張 義浜 20230520 生 物 技 術(shù)現(xiàn) 代 生 物 技 術(shù)現(xiàn) 代生 物技 術(shù)自 然更 新組 織 培 養(yǎng)與 提 取釀 造技 術(shù)人 工育 種基 因 工 程酶 工 程細(xì) 胞 工 程發(fā) 酵 工 程 早期部分基因工程產(chǎn)品的研制、開發(fā)、上市時間 產(chǎn)品 研制 國家 用途 上市 國家 人生長激素釋放抑制素 (S
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