基因工程藥物之干擾素的制備流程課件-文庫(kù)吧資料
2025-01-06 20:30本頁(yè)面
【正文】 準(zhǔn)為國(guó)際單位。 ? 透析除鹽：調(diào)整溶液 pH ，電導(dǎo)值， 10 ku超濾膜， M緩沖液。 (2) 沉淀與疏水層析 ? 等電點(diǎn)沉淀（ 1）：磷酸調(diào)節(jié)至 ，沉淀雜蛋白，離心收集上清液。 ? 檢查 : 緩沖液的 pH值和電導(dǎo)值。 3. 干擾素純化工藝過(guò)程 ? 溶解粗干擾素 ? 沉淀與疏水層析 陰離子交換層析與濃縮 陽(yáng)離子交換層析與濃縮 凝膠過(guò)濾層析 ? 無(wú)菌過(guò)濾分裝 (1) 溶解粗干擾素 ? 配制純化緩沖液： 超純水， ， μm濾器和 10 ku超濾系統(tǒng)，百級(jí)層流下收集。 （ 4）初級(jí)分離 ? 鹽析 : 硫酸銨， 2℃ ～ 10℃ ，攪勻 ,靜置過(guò)夜。 ? 加凝聚劑醋酸鈣溶液 : 2℃ ～ 10℃ ,攪拌 15min，對(duì)菌體碎片、 DNA等進(jìn)行沉淀。 ? 破碎菌體： 2厘米以下的碎塊 ? 攪拌：加裂解緩沖液， 2℃ ～ 10℃ ， 2hr ? 凍融 : 細(xì)胞完全破裂，釋放干擾素。每保存 3個(gè)月，檢查一次活性。進(jìn)行干擾素含量、菌體蛋白含量、菌體干燥失重、質(zhì)粒結(jié)構(gòu)一致性、質(zhì)粒穩(wěn)定性等項(xiàng)目的檢測(cè)?；蛘邔l(fā)酵液轉(zhuǎn)入收集罐中，加入冰塊使溫度迅速降至 10℃ 以下。同時(shí)進(jìn)行發(fā)酵液雜菌檢查，當(dāng) OD值達(dá) 177。級(jí)聯(lián)調(diào)節(jié)通氣量和攪拌轉(zhuǎn)速，控制溶解氧 30%，培養(yǎng) 4小時(shí)。 2小時(shí)后，進(jìn)行吸光值測(cè)定和發(fā)酵液雜菌檢查。 干擾素的發(fā)酵工藝過(guò)程 啟開(kāi)種子 制備種子液 發(fā)酵培養(yǎng) 粗提 精提 半成品制備 半成品檢定 分裝 凍干 成品檢定 成品包裝 ? 1．菌種培養(yǎng) ?。?70℃ 下保存的甘油管菌種（工作種子批），于室溫下融化。 ，導(dǎo)入受體細(xì)胞，篩選 三、重組體引入宿主細(xì)胞 將 cDNA克隆到含有四環(huán)素、氨芐青霉素抗性基因的質(zhì)粒中，轉(zhuǎn)化到大腸桿菌，重組的載體 DNA 分子在一定條件下轉(zhuǎn)化入大腸桿菌，形成攜帶質(zhì)粒的菌株。 ? 免疫調(diào)節(jié)活性 —— 治療慢性肉芽腫瘤（ rhuIFNγ） ? 多發(fā)性硬化癥 rhuIFNβ 2 基因工程大腸桿菌發(fā)酵生產(chǎn)工藝 干擾素生產(chǎn)工藝路線 上市產(chǎn)品：重組人干擾素 rhuIFN 1986， rhuIFNα2a， rhuIFNα2b；
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