細(xì)胞工程第十一章、動物組織與胚胎工程-文庫吧資料
2024-09-24 21:53本頁面
【正文】 至－ 40℃ 或－ 70℃ ，再直接投入液氮中保存。 ? 現(xiàn)在，人們已經(jīng)使用玻璃化法冷凍胚胎獲得成功，在冷凍保存液中加入高濃度的冷凍保護(hù)劑，使溶液粘性增強(qiáng)，當(dāng)處于超低溫時，形成玻璃樣液體。在胚胎冷凍過程中，還需要在稍低于溶液冰點(diǎn)時，強(qiáng)行致冷，防止溶液過冷現(xiàn)象的發(fā)生，這種促使溶液結(jié)冰的方法稱為 誘發(fā)結(jié)晶或植冰（ seeding）。 防止冷凍損傷 ? 在冷凍液中，可以加入冷凍保護(hù)劑，如 DMSO、 丙二醇、乙二醇、丙三醇、蔗糖、聚乙烯吡咯烷酮等。 ? 當(dāng)緩慢降溫時，細(xì)胞內(nèi)的水，有足夠的時間完全滲到外面，從冰點(diǎn)緩慢降到細(xì)胞完全脫水，往往需要幾個小時或更長時間，細(xì)胞一直處于高濃度溶質(zhì)中。 冷凍過程中細(xì)胞受到的損害 ? 在冷凍過程中，細(xì)胞會受到兩方面的損害。一般說來，在－ 80℃ 以上時，細(xì)胞則逐漸失去活力，到－ 130℃ 以下，細(xì)胞內(nèi)的水分呈微細(xì)冰晶樣或玻璃樣結(jié)構(gòu)，細(xì)胞內(nèi)所有需要能量的反應(yīng)停止，細(xì)胞的活動也幾乎停止。 ? 由于低溫，可以抑制物質(zhì)代謝的速度和細(xì)胞分裂的速度，因之可以延長保存時間 。 ? 就卵母細(xì)胞而言，排卵或由卵泡取出后，受精能力有一定限度，所以保存時間長，即或能受精，也可能出現(xiàn)胚胎發(fā)育異常。 ? 例如，兔和小鼠的 4－ 6細(xì)胞胚胎，經(jīng)過 96小時在37℃ 保存，已經(jīng)發(fā)育到胚泡階段。 37℃ 保存法 ? 是指在 37℃ 下，短時間保存卵和胚胎。經(jīng)過短期培養(yǎng)后，將胚胎從輸卵管內(nèi)沖出 ，觀察發(fā)育情況。移植前，預(yù)先結(jié)扎輸卵管與子宮的接合部。當(dāng)瓊脂凝結(jié)后再將其壓出，胚胎就被封入圓柱形瓊脂小柱中，每個瓊脂小柱放 3－ 5枚胚胎，再把這個瓊脂小柱封入較大的％瓊脂圓柱內(nèi)。 異種動物體內(nèi)保存法 ? 又稱為 中間受體培養(yǎng)法 ，是指把一種動物的胚胎，移入另一種動物的輸卵管或子宮內(nèi)，短期保存后再取出的方法，但并不是所有的動物都能在另一種動物的輸卵管或子宮內(nèi)存活的。 ? 非冷凍保存是 1948年，由 等開創(chuàng)的，他們將兔 2細(xì)胞胚胎，在同種血清中 37℃ 保存 48小時，移植后產(chǎn)仔。 ? 胚胎鑒定：根據(jù)透明帶、胚胎細(xì)胞、發(fā)育階段及細(xì)胞在透明帶中的比例確定胚胎級別。 移胚 配種后 3天的供卵巢 供體羊胚胎收集 ? 收集到的沖洗液靜置，沖洗液分離。 其成分：氯化鈉 8g， 氯化鉀 2g，磷酸氫二鈉 ， 磷酸二氫鉀 ，氯化鈣 ， 氯化鎂 ， 丙酮酸鈉32mg， 葡萄糖 1g， 牛血清白蛋白 4g， 卡那霉素 25mg， 酚紅 5mg， 三蒸餾水1000ml。 ? 可優(yōu)秀種公畜不足時，可考慮首次采用本交，以后采用人工授精，也可以全部采用人工授精。 ? 必須用優(yōu)秀的種公畜進(jìn)行多次配種，一般隔 812小時進(jìn)行一次配種，直到發(fā)情結(jié)束。 ? 2） 孕激素處理法：抑制卵泡發(fā)育 – 牛：于處理的第一天 ， 注射雌二醇 2mg， 同時埋植孕酮或放置孕酮 （ 200mg)陰道海綿栓 ， 處理 9~12天 ， 取出埋植或陰道栓后 2~4天內(nèi)可發(fā)情 。 ?？稍谧⑸浜?60— 96小時內(nèi)發(fā)情 。 ? 2）在性周期第 16天，肌肉注射孕馬血清(PMSG) 2500IU， 在 2021天時靜脈注射絨毛膜促性腺激素 (HCG)2022IU； 或在性周期第 814天，肌肉注射孕馬血清 2022IU， 48h后用前列腺素 F2a 33mg， 一次肌肉注射。在首次注射促卵泡素 (FSH)后的 48h、 60h和 72h， 分別肌肉注射氯前列烯醇 。如斑馬胚胎移植給馬，蒙古馬胚胎移植給驢，白肢野牛移植給荷斯坦牛。 ? 在保護(hù)動物遺傳資源，提高家畜生產(chǎn)性能，挽救瀕臨滅絕的野生動物方面，胚胎移植技術(shù)越越來發(fā)揮出重要作用。 ? 80年代初，美、澳、新從歐洲引進(jìn)的大型肉牛品種均采用胚胎移植技術(shù)擴(kuò)繁。 ? 牛羊等低繁殖力家畜，從引進(jìn)到形成一個純種群體需要 78個世代， 1520年。但對優(yōu)秀母畜來說，受其產(chǎn)仔數(shù)和世代間隔的限制，尤其是牛羊等繁殖力較低的畜種更是如此。這個來自供體的胚胎能夠在受體的子宮著床，并繼續(xù)生長和發(fā)育，最后 產(chǎn)下供體的后代 。 第二節(jié)、胚胎工程 胚胎工程（ embryo engineering） 是指所有對配子和胚胎進(jìn)行人為地干預(yù)，使其環(huán)境因素、發(fā)育模式或局部組織功能，發(fā)生量和質(zhì)的變化的綜合技術(shù)。該產(chǎn)品應(yīng)用后 14天即開始形成新的血管。 這種產(chǎn)品是器官基因
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