三種測序dna模板制備方法的比較-文庫吧資料
2024-09-04 05:53本頁面
【正文】 E, Carr IM, Hoffman CJ, et al. MethylViewer: putational analysis and editing for bisulfite sequencing and methyltransferase accessibility protocol for individual templates(MAPit) projects. Nucleic Acids Res. 2011。132:721723.Gao L, Lu H, Xu L, et al. An efficient strategy forsequencingbysynthesis. J Nanosci Nanotechnol. 2010。LX)2 結(jié)果 基因組 DNA 測序結(jié)果 方法一(96 管集合板法)的樣品測序率為 100%，方法二(96 孔 板法)的測序率為 %，方法三(PCR 產(chǎn)物法) 的測序率為 %；方法一和方法二之間比較 差異無顯著 性意義 (χ2= ， P=)；方法一和方法三之間比較差異無顯著性 意義(χ2=，P= )；方法二和方 法三之間比較差異無顯著性意義(χ2=， P= )。因為與傳統(tǒng)克 隆測序技術(shù)相比，利用PCR產(chǎn)物直接測序方法 顯然是簡單、快速的。而3種方法在基因組DNA測序時， 均能獲得較好的效果?？傮w 來講，基因組DNA測序效果優(yōu)于甲基化DNA測 序結(jié)果。因此，測序DNA 模板質(zhì)量的高低對測序反應(yīng)具有決定性作用。而 測序DNA模板的濃度、純度及模板自身的序列 結(jié)構(gòu)都與測序結(jié)果有直接的關(guān)系[2224]。然而，在DNA測序中也存在一些問題，比如DNA模板質(zhì)量、循環(huán)測序 反應(yīng)條件和變性凝膠電泳條件等，這些都可能 降低測序的效能，直接影響著結(jié)果的準確性及 重復(fù)性[1819]。近 年來，隨著一些研究新技術(shù)的不斷發(fā)展，使得 DNA測序技術(shù)也有了較快的更新，操作程序更 加優(yōu)化，成本更低，速度更快。DNA測序的經(jīng)典方 法為Sanger的雙脫氧終止法和Gilbert的化學(xué)裂 解法[13]。 新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院，1 分子生物學(xué)研究室，2 生物化學(xué)與分子 生物學(xué)教研室，河南省新鄉(xiāng)市453003；3MedicineUniversity ofUtah USA，SaltLake City841013討論秦川★，男，1968 年生，河南省新鄉(xiāng) 市人，漢族，碩士 講師，主要從事病 原分子生物學(xué)方 面的研究。法三之間比較差異有顯著性意義(χ2=，P= )。主要觀察指標：3 種方法的測序成功率。而獲取目的 DNA 的 3 種方法與一般的基因 組 DNA 制備方法相同。用 Promega GoTaq 酶進行擴增，并行 1%的瓊脂糖凝膠電泳進行驗 證。甲基化 DNA 準備：用甲基化試劑盒對提純的 DNA 進行甲基化處理。鋪入含氨芐青霉素的 LB 培養(yǎng)板，37 ℃過 夜生長，挑選藍色菌斑，用定位于目的片段外 圍不遠處的質(zhì)粒序列的一對引物進行 PCR 擴 增 ( 高保真擴增 ) 。2820萬方數(shù)據(jù). Box 1200, Shenyang 110004 秦川，等. 三種測序 DNA 模板制備方法的比較物，擴增后純化 PCR 產(chǎn)物后測序[89]。PCR 擴增驗證目的基因的存在。實驗擬通過測序 結(jié)果對3種測序DNA模板制備方法進行比較，旨 在獲得一種簡便、經(jīng)濟、高效的測序方法。其中DNA模板的質(zhì)量起著至 關(guān)重要的作用[35]。②循環(huán)測序反應(yīng)條件。基因克隆和PCR技 術(shù)使從染色體中分離特定DNA片段的難題迎刃 而解，快速高效的測序技術(shù)誕生[12]。Corresponding author: Liu Shiguo, Doctor, Professor, Laboratory of Molecular Biology, Xinxiang Medical University, Xinxiang453003, Henan Province, China lsg關(guān)鍵詞：基因組 DNA；甲基化 DNA；模板；DNA 測序doi:秦川，張俊河，Robert ，劉世國. 三種測序 DNA 模板制備方法的比較[J].中國組織工程研究，2012，16(15):28202822.[ ]Received: 20110925Accepted: 20111020時間及地點：于201008/201104在美國猶他州大學(xué)分子生物學(xué)實驗室完成。對于甲基化 DNA 測序效果，96 管集合板法優(yōu)于其他 2 種方法(P )。方法：分別采用 96 管集合板及 96 孔板提取質(zhì)粒，并且針對質(zhì)
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