廣西地方標(biāo)準(zhǔn)豬藍(lán)耳病病毒美洲型經(jīng)典株、變異株以及歐洲型毒株的檢測多重反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)法征求意見稿編制說明-文庫吧資料
2024-09-02 18:55本頁面
【正文】 nstriptase (5 U/181。L） 181。L1 mmol/181。（3）反轉(zhuǎn)錄在冰浴條件下，在 PCR反應(yīng)管中按下表用量分別加入各成分：試劑名稱用量終濃度10 RT Buffer1 181。L的Buffer RWB加入到Spin column中；12 000 rpm離心1 min，棄濾液；12 000 rpm離心Spin column 2 min；將Spin mL的離心管上，在Spin column膜的中央處加入 50 181。將Spin column安置于Colletion Tube上，溶液移至Spin column中（ mL收集管上），12 000 rpm離心2 min，棄濾液；將 500 181。L的Carrier RNA，充分混勻，置56℃水浴鍋溫浴10 min；向上述裂解液中加入200 181。L Buffer VGB，20 181。（2）待檢樣品總RNA提取取待檢樣品上清200 181。以10 000 g離心5 min，收集上清，用于總RNA抽提，或置 20 ℃保存?zhèn)溆?。?）樣品來源廣西動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心 2013 年至 2015 年從廣西各地采集的203份疑似 PRRS 病豬的肺臟、脾臟、淋巴結(jié)等組織。 AMNsp2F和AMNsp2R引物對擴(kuò)增美洲型經(jīng)典株時(shí)長度為338 bp, 擴(kuò)增美洲型變異株時(shí)長度為248 bp。（2）設(shè)備普通 PCR 儀；核酸蛋白分析儀。標(biāo)準(zhǔn)編寫主要內(nèi)容包括樣品采集、處理、多重 RTPCR 操作過程以及結(jié)果的判定，適用于 PRRSV 的檢測。四、標(biāo)準(zhǔn)主要內(nèi)容及依據(jù)本標(biāo)準(zhǔn)是動(dòng)物疫病防控推薦性地方標(biāo)準(zhǔn)，編寫重點(diǎn)是疫病的檢測。本標(biāo)準(zhǔn)通過持續(xù)查新，確保內(nèi)容不與已有的國家、農(nóng)業(yè)行業(yè)和地方標(biāo)準(zhǔn)相重復(fù)或矛盾。適用性原則：本標(biāo)準(zhǔn)集國內(nèi)外PRRSV RTPCR檢測技術(shù)的成功經(jīng)驗(yàn)，并經(jīng)實(shí)驗(yàn)室和臨床驗(yàn)證，完全按照要求編寫，內(nèi)容全面，形式規(guī)范，可操作性和實(shí)用性強(qiáng)。先進(jìn)性原則：以國內(nèi)外相關(guān)文獻(xiàn)資料為參考，力求反映最新的科技成果；以國內(nèi)同類標(biāo)準(zhǔn)的編寫方法為基礎(chǔ)，對本標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行規(guī)范、充實(shí)和創(chuàng)新，使之具有先進(jìn)性。李 軍：負(fù)責(zé)標(biāo)準(zhǔn)稿審核。韋建華：負(fù)責(zé)臨床驗(yàn)證。王海清：負(fù)責(zé)盲樣檢測。張步嫻：負(fù)責(zé)比對試驗(yàn)。具體分工如下：施開創(chuàng)：主持人，全面負(fù)責(zé)標(biāo)準(zhǔn)起草、修改、審定。至2015年7月31日已完成標(biāo)準(zhǔn)初稿的編寫。鑒于國內(nèi)沒有檢測PRRSV美洲型經(jīng)典株、美洲型變異株以及歐洲型毒株的多重RTPCR的國家、農(nóng)業(yè)行業(yè)及地方標(biāo)準(zhǔn)，課題組開展了相關(guān)資料的收集整理工作，確定標(biāo)準(zhǔn)編寫目標(biāo)和依據(jù)，同時(shí)起草制訂廣西地方標(biāo)準(zhǔn)項(xiàng)目建議書，積極開展標(biāo)準(zhǔn)的申報(bào)。二、工作概況從2014年1月開始，我單位承擔(dān)了廣西農(nóng)業(yè)科技成果轉(zhuǎn)化項(xiàng)目《高致病性豬藍(lán)耳病快速診斷及免疫防控技術(shù)應(yīng)用示范》。但能夠同時(shí)檢測和區(qū)分PRRSV 美洲型經(jīng)典株、變異株以及歐洲型毒株的多重RTPCR迄今尚無國家、農(nóng)業(yè)行業(yè)或地方標(biāo)準(zhǔn)，因此，制定一個(gè)同時(shí)檢測并區(qū)分這三種毒株的地方標(biāo)準(zhǔn)十分必要。項(xiàng)目來源 本地方標(biāo)準(zhǔn)為自治區(qū)質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局下達(dá)給廣西壯族自治區(qū)動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心承擔(dān)的2015年第二批廣西地方標(biāo)準(zhǔn)制定（修訂）計(jì)劃項(xiàng)目（桂質(zhì)監(jiān)函 [2015] 183號），編號20150257。2014年以來，我單位在完成廣西農(nóng)業(yè)科技成果轉(zhuǎn)化項(xiàng)目《高致病性豬藍(lán)耳病快速診斷及免疫防控技術(shù)應(yīng)用示范》（編號：桂科轉(zhuǎn)1412500422，主持人：施開創(chuàng)）的過程中，根據(jù)我區(qū)重大動(dòng)物疫病監(jiān)測、檢測的需要，針對 PRRSV 病毒的基因序列設(shè)計(jì)了 3 對特異性引物，建立了同時(shí)檢測美洲型及歐洲型 PRRSV 的多重 RTPCR 檢測方法， 并應(yīng)
高考資料相關(guān)推薦
鄂ICP備17016276號-1