非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳(native-page)的分類-文庫(kù)吧資料
2024-08-31 17:14本頁(yè)面
【正文】 中不含考馬斯染料，%的洋地黃皂苷加入到凝膠中。由此看來，CNPAGE除了獲得未染色的蛋白以外在分析膜蛋白中沒有什么優(yōu)勢(shì)了。既然CNPAGE中沒有帶電荷的染料，蛋白在電場(chǎng)中的遷移完全取決于這個(gè)蛋白的固有電荷。線粒體ATP合酶中的具有酶活性的低聚物可以用CNPAGE檢出，但BNPAGE無(wú)法檢出。然而CNPAGE在考馬斯染料分析天然混合物干擾進(jìn)一步分析時(shí)存在著優(yōu)勢(shì)。遷移距離決定于蛋白的固有電荷和凝膠孔徑大小。然而，這種方法最大的應(yīng)用還是研究蛋白質(zhì)蛋白質(zhì)相互作用，特別是和質(zhì)譜聯(lián)用。并且在分離膜蛋白的過程中，由于帶有負(fù)電荷，而不會(huì)引起蛋白聚合，與酸性染料的結(jié)合，膜蛋白也由疏水性變成親水性，溶解性大大提高。在Blue native PAGE過程中，最重要的化合物就是考馬斯亮藍(lán)，除了增溶作用以外，蛋白質(zhì)表面結(jié)合了大量的考馬斯亮藍(lán)染料而帶上負(fù)電荷，這會(huì)導(dǎo)致即使堿性蛋白在 。這種方法的缺點(diǎn)是：考馬斯亮藍(lán)與蛋白的結(jié)合起到了去垢劑的作用，可能導(dǎo)致復(fù)合物的分離；并對(duì)化學(xué)發(fā)光或蛋白質(zhì)輔基的熒光或熒光染料的標(biāo)記具有潛在的猝滅作用。1. Blue Native PAGEBlue Native PAGE是最古老的NativePAGE技術(shù)。蛋白的每個(gè)條帶可以消化后做肽鏈指紋圖譜或重新測(cè)序。然后可以用其它分離方法如SDSPAGE或等電聚焦做進(jìn)一步分離。非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳(NativePAGE)的分類有三種常用的非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳方法：blue native（BN
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