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Ettayebi, M.。4） 建立快速檢測方法監(jiān)控人和動物致病性支原體大環(huán)內(nèi)酯類耐藥性的發(fā)生和發(fā)展。2） 深入開展支原體臨床株的大環(huán)內(nèi)酯類耐藥性研究，獲得支原體臨床株核糖體RNA及核蛋白的耐藥突變位點及突變發(fā)生頻率，確定突變與耐藥表型的關(guān)系。紅霉素、螺旋霉素、泰樂菌素、吉他霉素等大環(huán)內(nèi)酯類藥物大量廣泛用于防治食品動物支原體感染（如豬氣喘病、雞慢性呼吸道病等）而引起動物源支原體耐藥性，造成藥物療效下降甚至失效，嚴重影響了支原體感染的有效防治，但至今對動物源支原體大環(huán)內(nèi)酯類耐藥性的機制研究仍十分有限。至今未發(fā)現(xiàn)支原體內(nèi)存在甲基轉(zhuǎn)移酶編碼基因（43，58）。三、 支原體大環(huán)內(nèi)酯類耐藥性尚需深入研究的問題已有研究表明，細菌可通過藥物主動外排、藥物修飾失活、）藥物靶位改變、產(chǎn)生抗性肽等四種途徑對大環(huán)內(nèi)酯類藥物耐藥（57）。Takahashi等（56）體外誘導(dǎo)雞毒支原體對泰樂菌素的耐藥性，經(jīng)10次傳代誘導(dǎo)獲得的菌株對泰樂菌素的最小抑菌濃度僅比原始菌株提高8倍，與Zanella等和GautierBouchardon等的研究結(jié)果存在差異。衣阿華支原體比雞毒支原體及滑液支原體更易誘導(dǎo)出大環(huán)內(nèi)酯類耐藥性，提示大環(huán)內(nèi)酯類抗生素耐藥性的誘導(dǎo)速度快慢受支原體種類及藥物性質(zhì)的影響。結(jié)果3種支原體在紅霉素及泰樂菌素作用下經(jīng)26代后即可誘導(dǎo)出高水平耐藥性。誘導(dǎo)耐藥株對多種大環(huán)內(nèi)酯類抗生素存在不完全交叉耐藥性，泰樂菌素誘導(dǎo)耐藥株對紅霉素、螺旋霉素交叉耐藥，而紅霉素及螺旋霉素誘導(dǎo)耐藥株對泰樂菌素僅敏感性有所降低，不存在交叉耐藥性。結(jié)果不同藥物之間的誘導(dǎo)耐藥性的難易程度存在較大差異。Kiser 等（54）最早開展大環(huán)內(nèi)酯類抗生素體外誘導(dǎo)雞毒支原體耐藥性研究，發(fā)現(xiàn)雞毒支原體極易對紅霉素產(chǎn)生耐藥性。推測兩株臨床分離的人型支原體雖然僅一個操縱子等位基因發(fā)生突變，但雜合型等位基因也足以帶來菌株的大環(huán)內(nèi)酯類耐藥表型，其中23S rRNA V域A2059G替換突變可造成菌株的十六元環(huán)內(nèi)酯類藥物耐藥表型，而C2611U突變可能與菌株的林可胺類耐藥性顯著提高有關(guān)。MHb1對十六元環(huán)內(nèi)酯類（交沙霉素、螺旋霉素、麥迪霉素、泰樂菌素）、替利霉素、林可胺類藥物（林可霉素和克林霉素）均高水平耐藥， MHb2對十六元環(huán)內(nèi)酯類和替利霉素高水平耐藥而對林可胺類藥物僅中度耐藥，兩菌株對奎奴普丁達福普丁和原始霉素仍敏感。23S rRNA基因克隆測序表明，兩個突變子的2062位（大腸桿菌序號）分別發(fā)生了A2062G和A2062T點突變，推測兩個點突變與菌株的耐藥表型有關(guān)。Furneri等（53）在體外用交沙霉素誘導(dǎo)人型支原體PG21株的耐藥性，并研究其耐藥分子機理。Matsuoka等（52）檢測了日本2000 2003年臨床分離的13株大環(huán)內(nèi)酯耐藥肺炎支原體（12株高水平耐藥M，1株低水平耐藥）23S rRNA V域和 II 域，以及核蛋白L4 和 L22編碼基因的耐藥突變，結(jié)果10株在2063位發(fā)生了A→G 替換突變（對應(yīng)大腸桿菌2058位），1株發(fā)生了A→C突變；1株在2064位（對應(yīng)大腸桿菌2059位）發(fā)生了A→G替換突變；低水平耐藥株在2617 位（對應(yīng)大腸桿菌2611位）發(fā)生了C→G 顛換；23S rRNA II 域，以及核蛋白L4 和 L22編碼基因核苷酸中未發(fā)生突變。有趣的是，1株對紅霉素、羅紅霉素和克拉霉素低水平耐藥的肺炎支原體不存在2063位和2064位點突變，可能存在其它耐藥機制。Okazaki等（51）將從臨床分離的141株肺炎支原體敏感株在含紅霉素的培養(yǎng)基中傳代培養(yǎng)?？寺y定突變子23S rRNA基因II域和V域以及核蛋白 LL22 編碼基因核苷酸序列并與原菌株M129比較，結(jié)果在紅霉素A(Erythromycin A)、阿齊霉素（azithromycin）、交沙霉素(josamycin)、奎奴普丁達福普丁(quinupristindalfopristin)和替利霉素（telithromycin）突變子中， 23S rRNA II 域沒有發(fā)生突變，而V域發(fā)生了C2611A和A2062G（大腸桿菌序號）點突變；克林霉素(clindamycin)、替利霉素突變子在核蛋白L4中分別發(fā)生了H70R和H70L（肺炎支原體序號）單氨基酸突變；奎奴普丁達福普丁和原始霉素（pristinamycin）突變子在核蛋白L4的60位(肺炎支原體序號)插入了1個、2個或3個相連甘氨酸；替利霉素突變子在核蛋白L22發(fā)生了P112R和A114T(肺炎支原體序號)替換以及111IPRA114（肺炎支原體序號）缺失。在亞抑菌濃度（subinhibitory concentrations）下經(jīng)過23～50次傳代誘導(dǎo)獲得耐藥突變子。同時分析得出，A2064G點突變可引起比A2063G點突變對十六元環(huán)內(nèi)酯藥物更高水平的耐藥性。與其它大環(huán)內(nèi)酯類耐藥菌株的23S rRNA基因Ⅴ域核苷酸序列進行對比分析，確定A2063G和A2064G兩處點突變與菌株的耐藥表型密切相關(guān)。他們以紅霉素誘導(dǎo)肺炎支原體M129模式株的耐藥性，結(jié)果獲得M129ER1和M129ER2兩個突變子，對大環(huán)內(nèi)酯林可霉素B型鏈陽性菌素（MLSB）表現(xiàn)高水平耐藥，其中M129ER1對十四元環(huán)內(nèi)酯（紅霉素和竹桃霉素）、林可胺類（林可霉素和克林霉素）表現(xiàn)出比M129ER2更高耐藥水平，而M129ER2對十六元環(huán)內(nèi)酯(麥迪霉素、螺旋霉素和泰樂菌素)表現(xiàn)出比M129ER1更高耐藥水平。二、 支原體的誘導(dǎo)耐藥性1995年之前還沒有支原體對大環(huán)內(nèi)酯類耐藥的分子機制研究報道。因此也不排除細菌主動外排藥物造成胞內(nèi)藥物水平降低而耐藥的情況。23S rRNA Ⅱ域沒有23S rRNA Ⅴ域保守，因此，盡管人型支原體和發(fā)酵支原體在752位是腺嘌呤（A）而肺炎支原體是胞嘧啶（C），但卻難以將人型支原體、發(fā)酵支原體固有的大環(huán)內(nèi)酯類耐藥性與752位核苷聯(lián)系起來。放射標(biāo)記紅霉素開展積聚試驗和結(jié)合試驗，結(jié)果顯示，肺炎支原體細胞比人型支原體細胞有更高水平的紅霉素積蓄能力，人型支原體、發(fā)酵支原體的核糖體與紅霉素的親合力顯著低于肺炎支原本的核糖體，因此推測人型支原體和發(fā)酵支原體的固有耐藥表型可能由23S rRNAⅤ域的G2057A突變造成胞內(nèi)靶位藥物結(jié)合力降低所引起。 等（44）比較研究了人型支原體對十四、十五元環(huán)內(nèi)酯類藥物的固有耐藥性和肺炎支原體對大環(huán)內(nèi)酯類藥物的天然敏感性的遺傳基礎(chǔ)。紅霉素敏感肺炎支原體23S rRNA Ⅴ域的2057位（對應(yīng)大腸桿菌序號）為鳥嘌呤（G）（43），已觀察到大腸桿菌的23S rRNA 2057位發(fā)生G→A 替換突變可造成紅霉素耐藥但仍對十六元環(huán)內(nèi)酯和林可胺類藥物敏感(35)。Furneri等（49）對3株人型支原體（PG2CTPAF、CTMh1）進行研究。此外，絮狀支原體（M. flocculare）(48)對十四元環(huán)內(nèi)酯耐藥而對十六元環(huán)內(nèi)酯和林可胺類藥物敏感。人源支原體中，肺炎支原體（M. pneumoniae）（43）對所有MLSKs均敏感；人型支原體（M. hominis）（44）對十四、十五元環(huán)內(nèi)酯、酮內(nèi)酯 (telithromycin)、奎奴普?。≦uirupristin）耐藥而對十六元環(huán)內(nèi)酯（螺旋霉素、泰樂菌素除外）和林可胺類藥物敏感；發(fā)酵支原體（M. fermentans）（44）對十四、十五元環(huán)內(nèi)酯耐藥而對十六元環(huán)內(nèi)酯和林可胺類藥物敏感。 相信隨著更多核糖體及其藥物復(fù)合體晶體結(jié)構(gòu)的獲得及解析，會獲得更多的證據(jù)解答上述未明問題，全面闡明大環(huán)內(nèi)酯類藥物抗菌作用機制及細菌耐藥機制，指導(dǎo)新藥研制，指導(dǎo)臨