db51t1210-20xx馬鈴薯x病毒檢驗(yàn)鑒定技術(shù)規(guī)程doc-文庫(kù)吧資料
2025-07-21 11:32本頁(yè)面
【正文】 X病毒 potato virus X，簡(jiǎn)稱PVX，又稱馬鈴薯潛隱病毒或馬鈴薯輕花葉病毒，是馬鈴薯X病毒屬的模式成員病毒粒體線形，長(zhǎng)480 nm～580 nm，其寄主范圍廣，病毒稀釋限點(diǎn)100000～1000000倍，鈍化溫度68 ℃～75 ℃，體外存活期1年以上?！?RTPCR在陰性對(duì)照無(wú)擴(kuò)增條帶，且陽(yáng)性對(duì)照出現(xiàn)625bp目標(biāo)條帶的前提下，樣品RTPCR產(chǎn)物電泳結(jié)果在625bp處出現(xiàn)目標(biāo)條帶，判定為陽(yáng)性反應(yīng)，即樣品帶PVX；否則判定為陰性反應(yīng)，即樣品不帶PVX。如采用認(rèn)可的試劑盒，按說(shuō)明操作。如采用認(rèn)可的試劑盒，按說(shuō)明操作?！?種薯（塊莖）取樣按GB155692009 。6 儀器及用具儀器及用具包括：——聚乙烯微量滴定板 根據(jù)樣品數(shù)量選用40孔和96孔兩種規(guī)格；——移液器 2 μL～10 μL、10 μL～50 μL、10 μL～200 μL、200 μL～1000 μL和1 mL～5 mL五種規(guī)格及配套吸頭；——天平 1/100 g，1/1000 g；——培養(yǎng)箱；——臺(tái)式高速離心機(jī)；——酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀；——水平電泳儀；——凝膠成像系統(tǒng)；——PCR擴(kuò)增儀；——EP管；——研缽 內(nèi)徑60 mm～80 mm；——剪刀；——冰箱；——超低溫冰箱；——過(guò)濾柱 CS過(guò)濾柱，CR吸附柱?！?RTPCR檢驗(yàn)試劑RTPCR檢驗(yàn)試劑包括：——莫洛尼鼠白血病病毒反轉(zhuǎn)錄酶（MMLV） 100 U/μl；——1 TAE 緩沖液 40mM TrisHCl， 20mM NaAc， 2mM EDTA()；——5 RT 緩沖液（5x RT Buffer）50 mM TisHCl ，100 mM NaCl， mM EDTA，10 mM DTT，% NP40，50%甘油；——10 PCR 緩沖液 100 mM TrisHCl ()， 500 mM KCl；——MgCl2 25 mM；——RNA酶抑制劑（RNasin） 10 U/μl；——RT增強(qiáng)劑（RT Ehancer）；——無(wú)水乙醇（CH3CH2OH）；——RL裂解液；——去蛋白液；——Taq酶 U/μl；——dNTP Mixture 10 mM；——漂洗液；——雙蒸水（ddH2O）；——2巰基乙醇（MCE）C2H6OS；——液氮 （N2）；——引物 PVX上游引物（P1）堿基序列: 5＇ACAGGCCACAGGGTCAACTAC3＇，PVX下游引物（P2）堿基序列：5＇CATCTAGGCTGGCAAAGTCGT3＇，用雙蒸水稀釋至20 μM；——100bp DNA ladder (≤1500 bp)；—
環(huán)評(píng)公示相關(guān)推薦
鄂ICP備17016276號(hào)-1