小鼠胚胎干細胞培養(yǎng)-文庫吧資料
2025-06-28 21:03本頁面
【正文】 粘附在組織培養(yǎng)皿的表面。1個組織培養(yǎng)皿之中放置1個細菌培養(yǎng)皿，在進行第3步之前一天將胚狀體黏附在同樣規(guī)格的培養(yǎng)板上。棄去上清，將細胞重懸于新鮮培養(yǎng)基并接種在新的細菌培養(yǎng)皿中。3．用2mlEB培養(yǎng)基重懸細胞，吹打至少10次制成單細胞懸液4．一個15cm的細菌培養(yǎng)皿接種4～5106個細胞（1個完全融合的組織培養(yǎng)皿通常足以接種4個同樣規(guī)格的細菌培養(yǎng)皿）。體外分化方法第1步：ES培養(yǎng)基在LIF存在的條件下維持細胞培養(yǎng)第2步：EB培養(yǎng)基使用細菌培養(yǎng)皿去除LIF后胚狀體的形成需要4天。震蕩培養(yǎng)板確保溶液能夠覆蓋蓋玻片或培養(yǎng)孔。纖維結(jié)合蛋白，1μg/ml 1PBS混合。包被有多聚鳥氨酸/纖維結(jié)合蛋白的培養(yǎng)板（使用或不使用蓋玻片）包被液的準備多聚L賴氨酸，15μg/ml把75ml多聚L賴氨酸和425ml 1PBS混合。堿性rhFGF, （10μg/ml）纖維連接蛋白（250μg/ml ）層粘連蛋白（100μg/ml）PEST（P104U/ml S104μg/ml）腐胺（100μM）黃體酮（20μM）亞硒酸鈉300μM胰島素5mg/ml溶劑，貯存液，稀釋劑和儲存轉(zhuǎn)鐵蛋白50mg/ml貯存液*在第4步將bFGF加入N3培養(yǎng)基使終濃度為10ng/ml。堿性rhFGF, 10μg/ml纖維連接蛋白250μg/ml 層粘連蛋白100μg/mlPEST（P104U/ml S104μg/ml）腐胺（100μM）黃體酮（20μM）亞硒酸鈉300μM胰島素5mg/ml轉(zhuǎn)鐵蛋白50mg/mlDMEM（高糖） 貯存液分裝在15ml 離心管中，（稀釋為1，ITSFn ，N3 ），貯存在20℃。貯存于4℃。分裝在50ml 離心管中，（稀釋為2，每管42ml），貯存在20℃。時間線（總時間為27～34天）第2步；4＋1天第3步；4－10天第4步；4天 第5步；10－15天 體外向心肌細胞方向分化胚胎干細胞在體外去除LIF情況下會自然向心肌細胞方向分化，小鼠的R1系一般在第78天自然出現(xiàn)搏動的心肌細胞，與胚胎發(fā)育時間線是完全一致的。細胞全程培養(yǎng)在37℃，5％CO2，100％濕度條件下。體外分化胚胎干細胞在體內(nèi)外可以分化為各種類型的細胞。吹打以確保細胞被分散開（前面已經(jīng)
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