【正文】 時(shí)，它的發(fā)酵培養(yǎng)基除供給充足的碳源物質(zhì)外，還應(yīng)該添加足夠的銨鹽或尿素等氮素化合物。工業(yè)發(fā)酵中培養(yǎng)基往往依據(jù)生產(chǎn)流程和作用分為：斜面培養(yǎng)基；種子培養(yǎng)基；發(fā)酵培養(yǎng)基發(fā)酵培養(yǎng)基的特點(diǎn)和要求是什么？（培養(yǎng)基設(shè)計(jì)）①提供必要的營(yíng)養(yǎng)成分：培養(yǎng)基成分必須滿足細(xì)胞生長(zhǎng)，代謝活動(dòng)和合成產(chǎn)物所需的基本要求；還要注意原料價(jià)格低廉，質(zhì)量穩(wěn)定，取材容易。大多數(shù)微生物都能在此培養(yǎng)基上生長(zhǎng)繁殖。 適于在實(shí)驗(yàn)室范圍作有關(guān)營(yíng)養(yǎng)、代謝、分類(lèi)鑒定、生物測(cè)定及選育菌種、遺傳分析等定量研究工作。②合成培養(yǎng)基：用化學(xué)成分和數(shù)量完全了解的物質(zhì)配制而成的。導(dǎo)致菌種衰退的原因有哪些？變異衰退； 分離現(xiàn)象； 自然衰老第五章 培養(yǎng)基的制備培養(yǎng)基及其分類(lèi)和組成？微生物的培養(yǎng)基根據(jù)生產(chǎn)用途主要分為哪幾類(lèi)？①天然培養(yǎng)基：是采用化學(xué)成分還不清楚或還不恒定的各種植物和動(dòng)物組織或微生物的浸出物、水解液等物質(zhì)(例如牛肉膏、酵母膏、麥芽汁、蛋白胨等)制成的。步驟：休眠孢子→母斜面活化→搖瓶種子或茄子瓶斜面或固體培養(yǎng)基孢子→一級(jí)種子罐→二級(jí)種子罐→發(fā)酵罐種子擴(kuò)培的目的：接種量的需要，菌種的馴化，縮短發(fā)酵時(shí)間、保證生產(chǎn)水平種子的要求：總量及濃度能滿足要求，生理狀況穩(wěn)定，個(gè)體與群體，活力強(qiáng)，移種至發(fā)酵后，能夠迅速生長(zhǎng)，無(wú)雜菌污染微生物發(fā)酵的種子應(yīng)具備哪些條件？①菌種細(xì)胞的生長(zhǎng)活力強(qiáng)，轉(zhuǎn)種至發(fā)酵罐后能迅速生長(zhǎng)，延遲期較短。擴(kuò)大培養(yǎng)時(shí)接種的時(shí)機(jī)選擇？什么是種子的擴(kuò)大培養(yǎng)？種子擴(kuò)大培養(yǎng)的目的、要求及一般步驟？種子擴(kuò)大培養(yǎng):種子擴(kuò)大培養(yǎng)是指將保存在砂土管、冷凍干燥管中處休眠狀態(tài)的生產(chǎn)菌種接入試管斜面活化后，再經(jīng)過(guò)扁瓶或搖瓶及種子罐逐級(jí)擴(kuò)大培養(yǎng),最終獲得一定數(shù)量和質(zhì)量的純種的過(guò)程。n 接種方式： 一級(jí)種子罐：火圈保護(hù)接種法和壓差法 ；二級(jí)種子罐：壓差法 ；發(fā)酵級(jí)數(shù)的確定n ①種子的性質(zhì)（如菌種傳代后的穩(wěn)定性）；②孢子瓶中孢子的密度（密度大則級(jí)數(shù)少）；③孢子發(fā)芽及菌絲繁殖速度（生長(zhǎng)特性）；④發(fā)酵罐中種子的最低接種量；⑤種子罐與發(fā)酵罐的容積比（發(fā)酵規(guī)模）；q 其中菌種的發(fā)生長(zhǎng)特性影響最大q 放線菌（生產(chǎn)抗生素）三級(jí)放大，（其中鏈霉素須四級(jí)擴(kuò)大）；n 細(xì)菌生長(zhǎng)較快，用二級(jí)放大培養(yǎng)（斜面菌種→一級(jí)種子搖床培養(yǎng)→二級(jí)種子罐培養(yǎng)→發(fā)酵罐）。接種量的概念？ 移入種子的體積接種量＝ ————————— 接種后培養(yǎng)液的體積發(fā)酵級(jí)數(shù)及特點(diǎn)？種子罐級(jí)數(shù)n 一般由菌絲體培養(yǎng)開(kāi)始計(jì)算發(fā)酵級(jí)數(shù)，但有時(shí)，工廠從第一級(jí)種子罐開(kāi)始計(jì)算發(fā)酵級(jí)數(shù)；n 種子罐級(jí)數(shù)越少，越有利于簡(jiǎn)化工藝，便于控制，減少染菌；減少消毒及值班工作量，減少因種子罐生長(zhǎng)異常而造成的發(fā)酵波動(dòng)。而且抗生素的加入可幫助維持質(zhì)粒復(fù)制與染色體復(fù)制的協(xié)調(diào)。n 質(zhì)?；蛲ǔ樗拗骷?xì)胞生長(zhǎng)非必需，且一般情況下當(dāng)細(xì)胞丟失這些質(zhì)粒時(shí)，生長(zhǎng)速度會(huì)加快。若干細(xì)菌和真菌菌種可通過(guò)此保藏方法保藏5年而活力不受影響。n 如果待保藏菌種生長(zhǎng)在斜面上，則可用含10％甘油的新配制液體培養(yǎng)基洗滌收獲。超低溫冷凍保藏技術(shù)(60一80℃)n 要求長(zhǎng)期保藏的微生物菌種，一般都要求在60℃以下進(jìn)行保藏。保藏過(guò)程中應(yīng)注意控制保藏溫度，培養(yǎng)瓶或試管應(yīng)嚴(yán)格密封。n 用此方法可以維持若干微生物的活力1—2年。 ⑧其他冷凍保藏技術(shù)(20℃)n （1）普通冷凍保藏技術(shù)(20℃)n 將液體培養(yǎng)物或從瓊脂斜面培養(yǎng)物收獲的細(xì)胞分接到試管或指管內(nèi)，然后貯藏于20℃的普通冰箱中。事先，保護(hù)劑甘油應(yīng)在121℃，蒸汽滅菌15分鐘。通常將菌種懸浮在10%（V/V）甘油蒸餾水或10%（V/V）二甲亞砜蒸餾水保護(hù)劑中。液氮保藏一般選用滲透性強(qiáng)的保護(hù)劑，如甘油和二甲亞砜。n 操作過(guò)程中一大原則是“慢凍快融”。但缺點(diǎn)是保藏費(fèi)用高，僅用于保存經(jīng)濟(jì)價(jià)值高、容易變異，或其他方法不能長(zhǎng)期保存的菌種。液氮保藏的另一大優(yōu)點(diǎn)是可利用各種培養(yǎng)形式的微生物進(jìn)行保藏，不論孢子或菌體、液體培養(yǎng)物或固體培養(yǎng)物均可使用該法。n 幾乎所有微生物及動(dòng)物細(xì)胞等均可采用液氮超低溫保藏。制成的安瓿管可在4℃冰箱或室溫下保藏。然后以高頻電火花檢查各安瓿的真空情況，管內(nèi)呈灰藍(lán)色光表示已達(dá)真空。少量樣品經(jīng)4小時(shí)左右便可以干燥。n 抽真空過(guò)程中樣品應(yīng)始終保持冷凍狀態(tài)。~ 。30℃下凍結(jié)，冰晶顆粒細(xì)小，對(duì)細(xì)胞損傷小。n 預(yù)凍溫度一般應(yīng)在30℃以下。預(yù)凍一定要徹底，否則，干燥過(guò)程中一部分冰會(huì)融化而產(chǎn)生泡沫或氧化等副作用，或使干燥后不能形成易溶的多孔狀菌塊，而變成不易溶解的干膜狀菌體。n 為避免保護(hù)劑或帶入的培養(yǎng)基中某些成分或產(chǎn)物的影響，在1小時(shí)內(nèi)必須將分裝好的安瓿管放到25~40℃的低溫冰箱或凍干裝置中預(yù)凍。將2~3ml保護(hù)劑加入斜面內(nèi)，用接種針輕刮菌苔，注意不使懸液中帶入培養(yǎng)基，也不能有過(guò)多的氣泡。保護(hù)劑一般為脫脂牛奶或馬血清等。n 在冷凍干燥脫水的過(guò)程中，保護(hù)劑起到穩(wěn)定細(xì)胞膜的作用，即能推遲或逆轉(zhuǎn)膜成分的變性，同時(shí)，又可以使細(xì)胞免于冰晶損傷而死亡。微生物斜面培養(yǎng)至穩(wěn)定期（最好形成孢子），加入保護(hù)劑制成細(xì)胞懸液。許多菌種用此法可保藏10年以上。n 但是，該法操作相對(duì)繁瑣，技術(shù)要求較高。凍干的菌種密封在較小的安瓿管中，避免了保藏期間的污染，也便于大量保藏。該法是將菌液在凍結(jié)狀態(tài)下升華其中水分，最后獲得干燥的菌體樣品。工廠中經(jīng)常采用。也可將小管用火焰熔封，保存期可達(dá)13年。高溫滅菌后，將菌種接入在適宜溫度下培養(yǎng)，直至形成孢子。n 將麩皮（也可用各種谷物代替）與水或其它培養(yǎng)基成分以一定的比例拌勻，加水或培養(yǎng)液與麩皮的比例為1::1或1:，原則是按照不同菌種對(duì)水分要求不同而定。 ⑤ 麩皮保藏法n 麩皮保藏法（或稱(chēng)曲法保藏）常用于放線菌和霉菌的保藏。n 適用菌種：該法適宜保藏詭譎棒狀桿菌（Cornebacterium insidiosum)、根瘤病土壤桿菌（Agrobacterium tumefaciens)、假單孢菌（Pseudomonas sp.)等。需用時(shí)，可從管內(nèi)移出一環(huán)接到培養(yǎng)基上，而原來(lái)的管加塞后仍可繼續(xù)保藏。④蒸餾水懸浮法n 這是最簡(jiǎn)單的保藏方法。n 土壤法以土壤代替河沙，不需酸洗，經(jīng)風(fēng)干、粉碎、過(guò)24目篩，分裝滅菌后，同上制備。n 需要保藏的菌株先用斜面培養(yǎng)基培養(yǎng)，再用無(wú)菌水制成細(xì)胞或孢子懸液，將10滴懸液注入裝有洗凈、滅菌河沙的沙管內(nèi)，使細(xì)胞或孢子吸附在沙上，放到干燥器中吸干沙中的水分，將干燥后的沙管用火焰熔封管口。u 適用菌種：產(chǎn)孢子的絲狀真菌和放線菌以及產(chǎn)芽孢的細(xì)菌。u 保藏期：45 ℃冰箱保藏，也可常溫下保存，時(shí)間可達(dá)數(shù)年，甚至數(shù)十年。③沙管保藏法、土壤保藏法u 原理：利用干燥、低溫、隔氧、無(wú)營(yíng)養(yǎng)物的條件保藏菌種。特別對(duì)難于冷凍干燥的絲狀真菌和難以在固體培養(yǎng)基上形成孢子的擔(dān)子菌等的保藏更為有效。用170℃下滅菌12h的液體石蠟封住半固體穿刺培養(yǎng)物，在45℃冰箱中保藏，保存期612個(gè)月。一般保存期36個(gè)月。第四章 菌種的保藏及種子的擴(kuò)大培養(yǎng)各種菌種保藏方法的保藏原理、適用范圍和時(shí)間長(zhǎng)短。缺點(diǎn)：效率低，進(jìn)展慢，不能滿足育種工作要求；發(fā)生負(fù)向突變，表現(xiàn)為菌株的衰退和生產(chǎn)質(zhì)量的下降的幾率更高?；貜?fù)突變：高產(chǎn)菌株在傳代的過(guò)程中，由于自然突變導(dǎo)致高產(chǎn)性狀的丟失，生產(chǎn)性能下降的現(xiàn)象。? 由于紫外線照射后有光復(fù)活效應(yīng)，所以照射時(shí)和照射后的處理應(yīng)在紅燈下進(jìn)行。? 被照射的菌懸液細(xì)胞數(shù)，細(xì)菌為1