【正文】 液 C標(biāo)，測其吸光度為 A標(biāo) ，再在相同條件下測得樣品溶液的吸光度為 A樣 ，根據(jù)下列公式求得樣品濃度。 標(biāo)準(zhǔn)曲線法 ? 將一系列濃度不同的標(biāo)準(zhǔn)溶液按照一定操作過程顯色后，分別測吸光度，以吸光度為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。 定量分析 ?定量分析的依據(jù)是比耳定律、在液層厚度一定時(shí)，溶液的濃度與吸光度要成正比關(guān)系。 ?如果只有一兩個(gè)發(fā)色團(tuán)相同，其它部分的結(jié)構(gòu)略有不同，對紫外和可見光譜影響變化不大，往往具有十分接近的吸收光譜。 比較吸光度比值。 定性分析 定量分析 分光光度法的具體應(yīng)用 第四節(jié) 分光光度法的應(yīng)用 比較吸收光譜曲線。 分離 ?若上述方法不宜采用時(shí)，也可以采用預(yù)先分離的方法，如沉淀、萃取、離子交換、蒸發(fā)和蒸餾以及色譜分離法等。這種空白能夠同時(shí)消除試樣基體和試劑的干擾。適用于試樣基體有色并在測定條件下有吸收，而顯色劑溶液無干擾吸收．也不與試樣基體顯色的情況。適用于在測定條件下，顯色劑或其他試劑、溶劑等對待測組分的測定有干擾的情況。 溶劑空白 ? 在測定入射光波長下，溶液中只有被測組分對光有吸收，而顯色劑和其他組分對光無吸收，或雖有少許吸收，但所引起的測定誤差在允許范圍內(nèi)，在此情況下可用溶劑作為空白溶液。 ?溶劑、試劑、器皿及試樣本身都可能引入干擾因素。 選擇適宜的空白溶液 ?空白溶液又叫參比溶液。 選擇適當(dāng)?shù)臏y量波長 例如在 K2Cr2O7存在下測定 KMnO4時(shí) ? 不是選 λmax(525nm)，而是選 λ=545nm。 ? 鈷試劑與 Co2+在弱酸性介質(zhì)中一旦完成反應(yīng)后，即使再用強(qiáng)酸酸化溶液，該配合物也不會(huì)分解。 ?選取的條件是掩蔽劑不與待測離子作用； ?掩蔽劑以及它與干擾物質(zhì)形成的配合物的顏色應(yīng)不干擾待測離子的測定。 ?例如，雙硫腺能與 Hg2+、 Pb2+、 Cu2+、 Ni2+、Cd2+、等十多種金屬離子形成有色配合物，其中與 Hg2+生成的配合物最穩(wěn)定，在，而上述其他離子在此條件下不發(fā)生反應(yīng)。 干擾的產(chǎn)生及其消除 干擾物質(zhì)的影響有以下幾種情況： ?干擾物質(zhì)本身有顏色或無色但與顯色劑形成有色化合物，在測定條件下也有吸收； ?在顯色條件下，干擾物質(zhì)水解，析出沉淀使溶液混濁，致使吸光度的測定無法進(jìn)行； ?與待測離子或顯色劑形成更穩(wěn)定的配合物，使顯色反應(yīng)不能進(jìn)行完全。使厚度增大而影響測量值。混濁溶液散射作用較強(qiáng)，一般不易制備相同的空白溶液，常使測得的吸光度偏離，分析中不容忽視。散射和反射作用致使透射光強(qiáng)度減弱。 散射光和反射光 ?吸光質(zhì)點(diǎn)對入射光有散射作用，吸收池內(nèi)外界面之間入射光通過時(shí)又有反射作用。 ?但在接近紫外末端處，因在短波長光源強(qiáng)度和檢測器靈敏度均減弱，雜散光的比例相對增大，測定時(shí)可能會(huì)出現(xiàn)假峰。前一種情況在分析中常會(huì)遇到。 ?雜散光 Is常隨入射光強(qiáng)度 I0的增大而增大。 ?主要由儀器光學(xué)系統(tǒng)的缺陷或光學(xué)元件受灰塵、霉蝕的影響而引起。 ?在保證一定光強(qiáng)的前提下，應(yīng)使用盡可能窄的帶寬寬度，同時(shí)應(yīng)盡量避免采用尖銳的吸收峰進(jìn)行定量分析。 ?通常選擇吸光物質(zhì)的最大吸收波長作為測定波長。 例如，右圖 所示的吸收光譜，用譜帶 I所對應(yīng)的波長進(jìn)行分析，造成的偏離就比較小。 ?若控制溶液的酸度，在強(qiáng)酸性條件下測定Cr2O7 2 ，或在強(qiáng)堿條件下測定 Cr2O7 2 ，偏離 Beer定律的現(xiàn)象可以避免。 例 1：亞甲藍(lán)陽離子水溶液的吸收光譜 例 2：重鉻酸鉀的水溶液 有以下平衡： ? 若溶液稀釋 2倍，由于受稀釋平衡向右移動(dòng)的影響， Cr2O7 2離子濃度不是減小 2倍，Cr2O7 2 離子濃度的減少明顯地多于 2倍。 隨著濃度的增大， 660nm處吸收峰減弱，而 610 nm處吸收峰增強(qiáng)，吸收光譜形狀改變。 第三節(jié) 光度法的誤差 化學(xué)因素 ?通常只有當(dāng)溶液濃度小于 ／ L的稀溶液時(shí) Beer定律才能成立。但實(shí)際工作中常常會(huì)出現(xiàn)偏離直線的情況，即偏離Beer定律的現(xiàn)象。 偏離 Beer定律的因素 ?根據(jù) Beer定律，當(dāng)波長和入射光強(qiáng)度一定時(shí)，吸光度 A與吸光物質(zhì)的濃度 C成正比。電解質(zhì)的厚度必須嚴(yán)格控制。 ?吸收濾光片由有色玻璃或內(nèi)夾在兩玻璃片之間的有色染料的明膠所組成，這種濾光片適用于可見光區(qū)。 濾光片 ?在簡易的比色計(jì)中，使用濾光片能夠獲得有限波長范圍的光。 i是入射角， θ是衍射角， β是光柵刻痕角。 閃耀光柵 ?光柵的寬度越大，總刻線數(shù)越多，分辨率越大。波長長者衍射角大，波長短者衍射角小。萬一光柵上落上了灰塵，只能用吹氣球吹去。 ?鋁膜很薄 (約 ～ )、很亮，故從外表看不出和一般的反射鏡有什么明顯的差異。 ?若入射光不是垂直地照射在光柵上，而是有一定的角度，則上式寫為： 該式稱為平面衍射光柵方程，簡稱光柵方程。 2， …… ， n稱為干涉的級(jí)。 ，則 n=0， 177。 ? θ為衍射角。反射光柵又可分為平面反射光柵（或稱閃耀光柵）和凹面反射光柵。多縫干涉決定光譜線出現(xiàn)的位置，單狹縫衍射決定譜線的強(qiáng)度分布。再加上它所組成的單色器的結(jié)構(gòu)比較簡單，所以近年來逐步取代了棱鏡，而成為色散元件的主角。不同的光學(xué)材料具有不同的折射率，即便是同一種光學(xué)材料以相同的入射角照射，若波長不同，得到的折射角也不一樣。 棱鏡單色器 30゜利特羅（ Litrow）式（自準(zhǔn)式） 60゜棱鏡利特羅（ Litrow）式 瓦茲渥斯（ Wadsworch）式 澤尼特（ CzernyTurner）式 ? 光從一種介質(zhì)射到另一種介質(zhì)時(shí)，一部分光從界面反射回去稱為反射， 另一部分光則改變前進(jìn)方向進(jìn)入第二種介質(zhì)稱為折射。 ?入光狹縫起著限制復(fù)合光進(jìn)入單色器的作用； ?色散元件起著把復(fù)合光分解為單色光的作用； ?準(zhǔn)直鏡的作用一是把來自入光狹縫的光轉(zhuǎn)變?yōu)槠叫泄猓渡涞缴⒃?，作用二是把來自色散元件的平行光束聚焦于出光狹縫上，形成光譜像； ?出光狹縫是單色光的出口。 ?分光光度計(jì)中所用的單色器有兩種類型：棱鏡單色器和光柵單色器。 ?原子吸收光譜儀的樣品室為原子化器，常用的原子化器有火焰和石墨爐。 ?可見光范圍用玻璃比色皿?？招年帢O燈的結(jié)構(gòu)如左圖所示。對于長波，其輻射效率高于能斯特?zé)簦涫褂貌ㄩL范圍比能斯特?zé)魧?，發(fā)光面大，操作方便、廉價(jià)。對短波范圍輻射效率優(yōu)于硅碳棒，但價(jià)格較貴，操作不如硅碳棒方便。 ?線光源：空心陰極燈 /金屬 (汞 /鈉 )蒸汽燈