儀器分析ppt課件(2)-文庫吧資料
2025-05-11 23:39本頁面
【正文】 mann,荷蘭學(xué)者 Van Weerman和 Schuurs分別報(bào)道將免疫技術(shù)發(fā)展為檢測體液中微量物質(zhì)的固相免疫測定方法，即酶聯(lián)免疫吸附測定法 (enzymelinked immunosorbent assay , ELISA) 。 ? 熒光偏振的強(qiáng)度與抗原濃度呈反比。 ? 應(yīng)用： 熒光偏振免疫測定法 ? 利用物質(zhì)分子在溶液中旋轉(zhuǎn)速度與分子大小呈反比的特點(diǎn)對熒光抗體進(jìn)行檢測的技術(shù)。 固相抗體競爭法 ? 待測抗原和 Eu3+標(biāo)記抗原與固相抗體發(fā)生競爭性結(jié)合，分離剩余的 Eu3+標(biāo)記抗原與 Eu3+標(biāo)記抗原抗體復(fù)合物，在固相中加入增強(qiáng)劑，測定復(fù)合物的熒光強(qiáng)度，熒光強(qiáng)度與待測抗原濃度呈反比。 ? 主要類型； ? 固相雙位點(diǎn)夾心法：待測物與固相抗體反應(yīng)后，再加入 Eu3+標(biāo)記抗體反應(yīng)，生成 Eu3+標(biāo)記抗體 抗原 固相抗體復(fù)合物，所測熒光強(qiáng)度與待測物濃度呈正比。 時(shí)間分辨熒光免疫測定法 ? 以鑭系元素螯合物標(biāo)記抗體或抗原，利用熒光發(fā)射體熒光壽命差別而將波長相同的熒光分開的技術(shù)。 一、分子發(fā)光分析法及其分類 ? 某些物質(zhì)的分子吸收一定能量后，電子從基態(tài)躍遷到激發(fā)態(tài)，以光輻射的形式從激發(fā)態(tài)回到基態(tài)，這種現(xiàn)象稱為分子發(fā)光，在此基礎(chǔ)上建立起來的分析方法為分子發(fā)光分析法 較高激發(fā)態(tài) 基 態(tài) 吸收能量受激 光輻射退激 分子在退激過程中以光輻射形式釋放能量 熒光的產(chǎn)生 ? 根據(jù)分子受激時(shí)所吸收能源及輻射光的機(jī)理不同分為以下幾類： 光致發(fā)光：以 光源 來激發(fā)而發(fā)光 電致發(fā)光：以 電能 來激發(fā)而發(fā)光 — 原子發(fā)射光譜法 生物發(fā)光：以 生物體釋放的能量 激發(fā)而發(fā)光 化學(xué)發(fā)光：以 化學(xué)反應(yīng)能 激發(fā)而發(fā)光 — 化學(xué)發(fā)光分析法 熒光 — 熒光分析法 磷光 — 磷光分析法 熒光效率：發(fā)射熒光的光量子數(shù)與吸收光的光量子數(shù)的比值 ? 熒光淬滅：處于激發(fā)態(tài)的電子不能回復(fù)到基態(tài)，所吸收的能量不能以熒光的形式發(fā)射。 ? 非均相熒光免疫測定法：需要分離抗原抗體復(fù)合物和剩余的標(biāo)記物，然后測定復(fù)合物或剩余標(biāo)記物的量，從而計(jì)算出標(biāo)本中的抗原量。 ? 雙位點(diǎn) IRMA：先用固相抗體與抗原反應(yīng)，然后再用過量的標(biāo)記抗體與已結(jié)合于固相抗原的另外一個(gè)抗原決定簇結(jié)合，形成抗體 抗原 標(biāo)記抗體復(fù)合物，分離出剩余的標(biāo)記抗體，測定固相上的放射性。 ? 在同樣條件下測定樣品，計(jì)算出抗原抗體復(fù)合物的放射性強(qiáng)度與總放射性強(qiáng)度的比值，在標(biāo)準(zhǔn)曲線上找出待測抗原的量。 4. 放射免疫分析 一、原理： Ag + Ab AgAb + Ag +
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