儀器分析ppt課件(2)(編輯修改稿)
2025-06-01 23:39 本頁面
【文章內容簡介】 u3+標記抗體反應，生成 Eu3+標記抗體 抗原 固相抗體復合物，所測熒光強度與待測物濃度呈正比。 ? 固相抗原競爭法 :將大分子抗原包被在固相上成為固相抗原，固相抗原與待測抗原共同競爭限量的 Eu3+標記抗體，待測抗原濃度越高，固相抗原結合的標記抗體就越小，所測熒光強度與待測物濃度呈反比。 固相抗體競爭法 ? 待測抗原和 Eu3+標記抗原與固相抗體發(fā)生競爭性結合，分離剩余的 Eu3+標記抗原與 Eu3+標記抗原抗體復合物，在固相中加入增強劑，測定復合物的熒光強度，熒光強度與待測抗原濃度呈反比。 ? TRFIA的特點：鑭系元素螯合物熒光壽命很長；激發(fā)光與熒光的波長差別顯著。 ? 應用： 熒光偏振免疫測定法 ? 利用物質分子在溶液中旋轉速度與分子大小呈反比的特點對熒光抗體進行檢測的技術。 ? 原理：熒光素標記抗原和待測抗原與抗體發(fā)生競爭結合反應，當標記抗原與相應抗體的量恒定時，反應平衡時結合狀態(tài)的標記抗原量與待測抗原呈反比。 ? 熒光偏振的強度與抗原濃度呈反比。以抗原濃度為橫坐標，熒光偏振強度為縱坐標作圖，建立關系。 1971年瑞典學者 Engvail和 Perlmann,荷蘭學者 Van Weerman和 Schuurs分別報道將免疫技術發(fā)展為檢測體液中微量物質的固相免疫測定方法，即酶聯(lián)免疫吸附測定法 (enzymelinked immunosorbent assay , ELISA) 。 ELISA現(xiàn)在已成為目前分析化學領域中的前沿課題 ，它是一種特殊的試劑分析方法，是在免疫酶技術( immunoenzymatic techniques ) 的基礎上發(fā)展起來的一種新型的免疫測定技術 。 酶聯(lián)免疫分析法 一、基本原理 它采用抗原與抗體的特異反應將待測物與酶連接，然后通過酶與底物產生顏色反應，用于定量測定。測定的對象可以是抗體也可以是抗原。 在這種測定方法中有 3種必要的試劑： ①固相的抗原或抗體（ 免疫吸附劑） ②酶標記的抗原或抗體（ 標記物） ③酶作用的底物（ 顯色劑） 測量時，抗原（抗體）先結合在固相載體上，但仍保留其免疫活性，然后加一種抗體（抗原）與酶結合成的偶聯(lián)物（標記物），此偶聯(lián)物仍保留其原免疫活性與酶活性，當偶聯(lián)物與固相載體上的抗原（抗體）反應結合后， 再加上酶的相應底物，即起催化水解或氧化還原反應而呈顏色。 其所生成的顏色深淺與欲測的抗原（抗體）含量成正比。 這種有色產物可用肉眼、光學顯微鏡、電子顯微鏡觀察，也可以用分光光度計（酶標儀）加以測定。 其方法簡單，方便迅速，
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