植物dna分子標記ppt課件-文庫吧資料
2025-05-10 02:52本頁面
【正文】 顯性純合體和雜合體。 （ 5）可以對 RFLP難以分析的基因組區(qū)域做遺傳連鎖圖。 （ 3）技術簡單，需要樣品量少，成本低。具有廣泛適用性和通用性。 RAPD結果 Timothy geic variation (Guo et al. 2022) RAPD的優(yōu)缺點 優(yōu)點： （ 1）不需 DNA探針，設計引物不需知道序列信息。 5. 將凝膠浸于 1ug/ml的 EB中 30min~60min，用水清洗約 10min，觀察、拍照。 ? RAPD方法是在 PCR技術基礎上發(fā)展起來的，它利用一系列單個隨機引物（通常為 10個核苷酸），對所研究的基因組 DNA進行 PCR擴增，引物與基因組 DNA某一區(qū)段互補時，就與其結合，就可對引物下游 DNA進行合成，即擴增。 RFLP標記缺點 （ 1） DNA需要量大。 (1) (2) 品系 1 品系 2 + – RFLP標記方法與步驟 （ 1） DNA的分離：可用 CTAB法或 SDS法 （ 2）酶切：一般根據(jù)基因組總 DNA的復雜性選 用限制酶。然而，各限制片段在凝膠中還是分開的，但不能分辨。但是在不同物種、不同品種、甚至同一品種的不同的兩個個體之間， DNA會發(fā)生變異，其中有些變異導致了限制性酶切位點的更動，從而產(chǎn)生了 限制片段長度 的 多態(tài)性 。酶識別位點堿基對 越少 ， DNA分子中被識別的位點 越多 ，所產(chǎn)生的限制片段 越短 。幾乎不可能有兩個生物體 DNA的堿基序列是相同的。實際上，在植物的自然群體中存在大量的 DNA序列變異。 包括基因組 DNA限制性酶切， Southern印記，DNA探針制備，同位素 /非同位素標記， DNA分子雜交等步驟。 染色體原位雜交 是指 DNA探針與染色體上的 DNA雜交，并在染色體上直接進行檢測的分子技術，其原理是兩條核苷酸 單鏈片斷 在適宜的條件下，通過 氫鍵結合，形成 DNADNA， DNARNA， RNARNA雙鍵分子，用帶有標記的 DNA或者 RNA片斷作為核酸探針，與細胞內(nèi)染色體雜交，用放射自顯影等方法予以顯示，在熒光顯微鏡下觀察目的 mRNA或者 DNA的存在與定位。 非 PCR依賴的分子標記 (基于 Southern 雜交技術的分子標記 )包括： ?限制性片段長度多態(tài)性標記 （ restriction fragment length polymorphism, RFLP） ?原位雜交（ in situ hybridization） PCR依賴的分子標記： ?隨機擴增多態(tài)性 DNA標記 （ random amplification polymorphism DNA, RAPD） ?DNA擴增指紋印記 （ DNA amplification fingerprinting, DAF） ?簡單序列重復標記 （ simple sequence repeat, SSR） ?隨機引物聚合酶鏈式反應 （ arbitrarily primed PCR, APPCR） ?擴增片段長度多態(tài)性標記 （ amplified fragment length polymorphism, AFLP） 基于分子雜交技術的分子標記技術 此類標記技術是利用 限制性內(nèi)切酶解 及 凝膠電泳 分離不同的生物 DNA 分子，然后用經(jīng)標記的 特異 DNA 探針 與之進行雜交，通過 放射自顯影 或 非同位素顯色 技術來揭示 DNA 的多態(tài)性。
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