蛋白鑒定分析ppt課件-文庫(kù)吧資料
2025-05-09 06:01本頁(yè)面
【正文】 EF) 通常是指聚丙烯酰胺凝膠等電聚焦電泳 。到目前為止 ， 采用 1H 2DNMR（ 二維 NMR） 能解決的最大蛋白質(zhì)分子量在 10000Da左右 。 在有機(jī)化合物中 ， 經(jīng)常用于 1H和 13C核的共振吸收波譜 。 生物大分子在 ESI譜上往往是一組帶不同的電荷的分子離子峰 。 如此循環(huán)下去 ， 直到液滴變得非常小 ， 它的表面的電荷密度變得非常大 ， 形成很強(qiáng)的電場(chǎng) ， 并從液滴中解離出帶多電荷的分子離子 。 在毛細(xì)管的柱頭上施加一個(gè)高電壓 (15kv)， 是柱頭液體霧化成很細(xì)的帶電液滴 ， 這種帶電液滴在逆向干燥氣流中揮發(fā) ， 使液滴表面電荷密度增大 。 樣品溶液以很低的流速 ， 在高的電場(chǎng)下使生物分子從毛細(xì)管中流出來(lái) 。 分離生物大分子多采用電噴質(zhì)譜法 ， 屬于動(dòng)態(tài)質(zhì)譜儀 。 根據(jù)質(zhì)量分析器的工作原理 ， 可將質(zhì)譜儀分為動(dòng)態(tài)和靜態(tài)儀器兩大類(lèi) ， 靜態(tài)儀器采用穩(wěn)定的電磁場(chǎng) ， 按空間位置來(lái)區(qū)別 m/z不同的離子 。 其動(dòng)能與加速電壓及電荷 Z有關(guān) 。 ： 質(zhì)譜儀是利用電磁學(xué)的原理 ， 使帶電的樣品離子按質(zhì)荷比進(jìn)行分離的裝置 。 (6)應(yīng)注意的問(wèn)題： A、 樣品 : 前處理 : 樣液要進(jìn)行適當(dāng)?shù)那疤幚?, 如離心 ， 沉淀 ， 抽提等 濃度 : 樣液濃度不宜太稀 組分 : 樣液組分不宜太多 ， 目標(biāo)組分與相鄰組分之間的分子量至少要相差 ?2022以上 。 然后將未知樣的標(biāo)流體積在準(zhǔn)曲線先上查得分子量 。 性能： 耐溫： 交聯(lián) 瓊脂糖凝膠可耐受 100－ 120℃ 耐酸堿：在 pH3－ 12范圍內(nèi)穩(wěn)定 耐鹽：在 6M尿素中穩(wěn)定 (4)方法 介質(zhì)溶脹 ? 裝柱 ? 平衡 ? 上樣 ? 洗脫 ? 計(jì)算分子量 分離過(guò)程 5) 結(jié)果處理 a層析圖譜 B、 標(biāo)準(zhǔn)曲線 分子量的測(cè)定方法 ， 一般都采用標(biāo)準(zhǔn)曲線法 。 其主要技術(shù)指標(biāo)是： 型號(hào) 凝膠濃度 (w/v) 分子量分離范圍 sepharose 2B 2 5 105?15 107 sepharose 4B 4 2 105?15 106 sepharose 6B 6 5 104? 2 106 sepharose 8B 8 2 104? 7 105 sepharose 12B 12 5 103? 5 104 阿拉伯?dāng)?shù)字后面的 B表示瓊脂糖凝膠的百分濃度，瓊脂糖濃度越大表交聯(lián)度越大， 分子量分離范圍越小。 瓊脂糖凝膠 Sepharose系列 瓊脂糖凝膠是由瓊脂糖經(jīng)特殊工藝制成的珠狀凝膠 ， 瓊脂糖中凝膠的結(jié)構(gòu)是氫鍵而不是共價(jià)鍵 ， 因此 ,物理穩(wěn)定性較差 。其主要技術(shù)指標(biāo)是： 介質(zhì)規(guī)格 溶脹體積(ml/mg) 球形分子量范圍 (Da) Biogel P2 2002022 Biogel P4 5004000 Biogel P6 10005000 Biogel P10 500017000 Biogel P30 2022050000 Biogel P60 3000070000 Biogel P100 40000100000 Biogel P150 50000150000 Biogel P200 80000300000 Biogel P300 100000400000 “P”后面的拉伯?dāng)?shù)字越大，表示吸水性越大，凝膠的交聯(lián)度越小，分子量分離范圍越大與 Sephadex相似。 凝膠性能： 耐高溫 100℃ 沸水煮 pH范圍 pH2?11穩(wěn)定 在高鹽濃度下體積易收縮 B、 聚丙烯酰胺凝膠 (Boi?gel) Bio?gel是由丙烯酰胺和甲叉雙丙烯酰胺交聯(lián)制成的球狀凝膠色譜介質(zhì) 。 A、 葡聚糖凝膠 (Sephadex) 葡聚糖凝膠是以葡聚糖為原料合成的珠狀凝膠 ， 其主要技術(shù)指標(biāo) 介質(zhì)規(guī)格 溶脹體積 (ml/mg) 球形分子量范圍 (Da) Sephardex G10 23 700 Sephardex G25 4 10005000 Sephardex G50 6 150030000 Sephardex G75 10 300080000 Sephardex G100 1520 4000100000 Sephardex G200 2025 5000250000 后面的阿拉伯?dāng)?shù)字越大 ， 表示交聯(lián)越小 ，
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