白芨組織培養(yǎng)實(shí)施方案-文庫吧資料
2025-04-29 05:47本頁面
【正文】 以上各種混合液(母液)或單獨(dú)配制藥品，均應(yīng)放入冰箱中保存，以免變質(zhì)、長(zhǎng)霉。配制植物生長(zhǎng)素時(shí)，應(yīng)先按要求濃度稱好藥品，置于小燒杯或容量瓶中，用1 mol/L氫氧化鈉溶解，再加蒸餾水稀釋至所需濃度。這類物質(zhì)使用濃度很低，～10 mg/L。它們都是分別稱量，分別配成所需的濃度(～ mg/mL)，用時(shí)按培養(yǎng)基配方中要求的量分別加入。每配1L培養(yǎng)基，加鐵鹽5mL。由硫酸亞鐵(FeSO4配制時(shí)，每種化合物的量加大100倍或1000倍，逐次溶解并混在一起，制成微量元素母液。制備時(shí)，按表中排列的順序，以其10倍的用量，分別稱出并進(jìn)行溶解，以后按順序混在一起，最后加蒸餾水，使其總量達(dá)到1L，此即大量元素母液。這樣，每次配制培養(yǎng)基時(shí)，取其總量的1/1/100、1/1000，加以稀釋，即成培養(yǎng)液。白及組培選取的培養(yǎng)基即為MS培養(yǎng)基。MS培養(yǎng)基與其它培養(yǎng)基的基本成分相比，硝酸鹽、鉀和銨的含量高，有較高的無機(jī)鹽濃度，無機(jī)養(yǎng)分的數(shù)量和比例比較合適，足以滿足植物細(xì)胞在營養(yǎng)上和生理上的需要，對(duì)保證組織生長(zhǎng)所需的礦質(zhì)營養(yǎng)和加速愈傷組織的生長(zhǎng)十分有利。培養(yǎng)室：開展白及幼苗的無菌生長(zhǎng)提供場(chǎng)所，室內(nèi)需要有培養(yǎng)架及控制溫度、濕度、光照的各種設(shè)備。接種室：進(jìn)行材料的接種，內(nèi)置超凈工作臺(tái)，加裝紫外線燈滅菌。(2)器具的洗滌、干燥、消毒、儲(chǔ)藏。由于組培苗生產(chǎn)從進(jìn)瓶到出瓶都是在無菌條件下完成，所以離不開一個(gè)無菌環(huán)境，但實(shí)驗(yàn)室的規(guī)模大小需依據(jù)生產(chǎn)規(guī)模來確定。⑥空調(diào)：用來調(diào)節(jié)操作間、培養(yǎng)室的溫度。④鋁箔：用于培養(yǎng)容器封口。常用的規(guī)格有直徑9cm、12cm。常用的規(guī)格有2cm15cm、3cm15cm。⑥接種針：用來轉(zhuǎn)移細(xì)胞團(tuán)、愈傷組織。④尖頭鑷子：用來分離植物材料。②小型噴霧器：裝載滅菌藥液，來給超凈工作臺(tái)等處噴霧滅菌。⑦紫外線滅菌燈：用來對(duì)接種室、培養(yǎng)室、操作室等工作環(huán)境進(jìn)行滅菌處理。⑤無菌脫脂棉：用來進(jìn)行器械、植物材料表面的滅菌處理。③細(xì)菌過濾器：用來過濾不能進(jìn)行高溫滅菌的試劑溶液。（4）滅菌器械①磨砂口玻璃瓶：用來對(duì)植物材料進(jìn)行表面滅菌。⑦藥物天平：用來稱取配制培養(yǎng)基的藥品。⑤移液管架：用來放置、固定移液管。④刻度移液管：用來吸取定量植物生長(zhǎng)物質(zhì)溶液。③大肚移液管：用來吸取定量溶液。②容量瓶：用來配制標(biāo)準(zhǔn)溶液。（3）計(jì)量器械①量筒：用來量取一定體積的液體。⑤塑料桶：用來存放洗滌溶液、廢棄溶液。④純水水桶：用來存放去離子水或蒸餾水。②塑料盆：用于清洗培養(yǎng)容器。⑩器械架：在無菌操作期間用來放置滅菌的器械。⑧玻璃漏斗：用來過濾溶液。⑥冰箱：用來貯存化學(xué)藥劑、植物材料等。④玻璃攪拌棒：用來配制培養(yǎng)基。②烘箱：用來烘干器械。（1）通用器械①燒杯：用來盛放、溶解化學(xué)藥劑等。本實(shí)驗(yàn)選取盧氏本地優(yōu)質(zhì)白及（Bletilla striata(Thunb．)Reichb．f．）蒴果，采收時(shí)間為8月下旬至9月中旬，此時(shí)間段胚齡大約為第8周至第22周。白及的蒴果中有大量的種子，并且蒴果的消毒較方便，污染率低。結(jié)合盧氏當(dāng)?shù)貙?shí)際，探索采用白及無菌播種的技術(shù)路線，通過不同濃度和培方的培養(yǎng)基實(shí)現(xiàn)白及組織培養(yǎng)的最佳技術(shù)路線，建立白及快繁體系。二
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