【正文】 is in human heart transplant recipients. Comparison with conventional echocardiography. Circulation. 1997,95(1)：1409. Marie PY, Angioi M, Carteaux JP,et al. Detection and prediction of acute heart transplant rejection with the myocardial T2 determination provided by a blackblood magnetic resonance imaging sequence. J Am Coll Cardiol 2001 Mar 1。：生物技術(shù)可能是國內(nèi)少數(shù)幾個接近于國外技術(shù)水平的領(lǐng)域之一，基礎(chǔ)較好；本項目所使用的技術(shù)均為生物工程領(lǐng)域的成熟技術(shù)，現(xiàn)有技術(shù)基礎(chǔ)已完全滿足該項目的要求；研究組大部分技術(shù)人員都是相關(guān)領(lǐng)域的專家，如有足夠資金支持，完成該項目無大的困難。有時即使是對同一個人的檢測，同一中心不同時間做的結(jié)果也不一樣，所以，對于把混合淋巴細胞反應(yīng)方法用于診斷器官移植排斥反應(yīng)的研究也越來越少。目前，臨床移植排斥反應(yīng)的診斷主要靠臨床醫(yī)生的經(jīng)驗、一些移植器官的功能性指標(一旦發(fā)現(xiàn)器官功能有改變,就表明器官的損傷已相當嚴重了，時機太晚！)和一些非特異的免疫學(xué)指標(如白細胞移動抑制試驗,C反應(yīng)蛋白檢測, 淋巴細胞轉(zhuǎn)化試驗, 淋巴細胞亞群分析及一些細胞因子監(jiān)測等的結(jié)果)。為建立一個風(fēng)險小，快捷、敏感、特異、可靠、無創(chuàng)、費用低、醫(yī)生和病人都樂于接受的排斥反應(yīng)的監(jiān)測、診斷的科學(xué)方法，國內(nèi)外研究人員都進行了大量工作。②我們建立的免疫學(xué)新方法的也已申請專利。產(chǎn)品上市后一年可收回全部投資。投資到位后1824個月可具備批量投產(chǎn)條件，生產(chǎn)能力為年產(chǎn)80萬套，投產(chǎn)一年后年產(chǎn)150萬套。②各種傳染性疾病檢測試劑盒投放市場后，可創(chuàng)造不少于排斥反應(yīng)檢測試劑盒所能創(chuàng)造的效益。 經(jīng)濟指標 ：①預(yù)測、診斷排斥反應(yīng)的試劑盒國內(nèi)上市后年利稅達到一億元人民幣。 水平：①預(yù)測、診斷排斥反應(yīng)的試劑盒達到世界領(lǐng)先水平。（3）移植后用于診斷，不但可以確定排斥反應(yīng)的發(fā)生與否，而且還可以確定受體對哪一個HLA抗原產(chǎn)生了排斥反應(yīng)，精確到每一種抗原亞型。： ：（1）表達10多種和表達單種HLA抗原的細胞株，具有穩(wěn)定表達、傳代能力。 過23年的工作，完成上述HLAⅠ類抗原、HLA‖類抗原近100個亞型抗原的表達、并使之具備生產(chǎn)條件。該方法已獲國家發(fā)明專利（見附件）。（2） 表達HLA抗原的細胞株的大規(guī)模培養(yǎng)技術(shù)。⑷對混合淋巴細胞反應(yīng)抑制試驗方法在臨床感染性疾病診斷方面的應(yīng)用進行探索性研究，爭取早日把該方法應(yīng)用到流腦、乙腦病毒、出血熱病毒、水痘病毒、麻疹病毒、腮腺炎病毒、呼吸道合胞病毒、SARS病毒等疾病的診斷和感染性疾病疫苗接種后的免疫效果評價方面。⑵用這些表達較多HLA抗原的細胞株制備HLA抗原板，通過混合淋巴細胞反應(yīng)抑制試驗對器官移植病人進行排斥反應(yīng)監(jiān)測,并探索其最佳反應(yīng)條件。⑴挑選上述已被EB病毒轉(zhuǎn)化的細胞株中相互不具有相同抗原的細胞株，以他們?yōu)檩d體，通過上述基因工程的方法，把其它的未包含在所挑選的載體中的HLA抗原分別轉(zhuǎn)入其中并表達，使一個細胞表達盡可能多的HLA抗原。(2)排斥反應(yīng)等的診斷：在進行移植免疫學(xué)的研究過程中，我們又建立了一個全新的免疫學(xué)方法，由于其實驗方法與混合淋巴細胞反應(yīng)相似，反應(yīng)結(jié)果和混合淋巴細胞反應(yīng)結(jié)果完全相反，暫時我們把它叫做混合淋巴細胞反應(yīng)抑制試驗，該實驗可以用來檢測外周血中活化淋巴細胞的特異性，故使用上述HLA抗原板即可檢測器官移植受者體內(nèi)有無HLA抗原活化的淋巴細胞，從而判斷體內(nèi)有無排斥反應(yīng)發(fā)生。I、用這種HLA抗原檢測板，通過混合淋巴細胞反應(yīng)為器官移植受者挑選供體，同時對移植后的患者進行監(jiān)測，發(fā)現(xiàn)已對供體器官產(chǎn)生免疫耐受的患者，并指導(dǎo)其逐漸停用免疫抑制劑。G、探索用這些細胞株作為刺激細胞進行混合淋巴細胞反應(yīng)的最佳條件。E、篩選穩(wěn)定表達某一個HLA抗原的細胞建株、并進行鑒定。C、選擇一種能在真核細胞中表達、并且能整合到宿主細胞基因組中的逆轉(zhuǎn)錄病毒表達載體， 構(gòu)建HLA抗原表達載體，該項工作正在進行中（已構(gòu)建出10余個抗原表達載體）。其主要研究內(nèi)容包括：A、HLA抗原缺失細胞系（作為HLA抗原表達的空白細胞載體）的選擇與鑒定，已完成。主要研究內(nèi)容有：(1)排斥反應(yīng)預(yù)測：它是運用分子生物學(xué)技術(shù)，建立表達HLAⅠ類和Ⅱ類抗原的標準細胞株，使每株細胞上只表達一個HLA抗原。但在本方法出現(xiàn)以前, 臨床上尚沒有一個快捷、敏感、特異、可靠、無創(chuàng)的科學(xué)的指標來指導(dǎo)移植前供體的挑選, 移植后排斥反應(yīng)和免疫耐受的診斷,及免疫抑制劑用量調(diào)整的方法。在器官移植后，供受體間HLA抗原的差異將引起排斥反應(yīng)，排斥反應(yīng)仍是目前影響心、肝、腎、骨髓等器官或細胞移植后1年、5年、10年存活率的主要因素， 如果有一個在移植以前可以挑選供受體使之合理搭配(即挑選那些移植后可能發(fā)生排斥反應(yīng)較輕或不發(fā)生排斥反應(yīng)的供受體進行移植, 這一點對骨髓移植尤為重要)、在移植后能檢測有無排斥反應(yīng)發(fā)生、移植器官有無淋巴細胞慢性浸潤及受體對供體器官有無免疫耐受發(fā)生等的無創(chuàng)檢測方法, 對指導(dǎo)臨床醫(yī)生合理調(diào)整免疫抑制劑用量、使之適時停藥(將大大減輕病人的經(jīng)濟負擔(dān)), 提高病人生存質(zhì)量，降低移植病人的死亡率, 延長移植器官的存活時間具有重要意義, 這將有力推動器官移植事業(yè)的發(fā)展。因此，本方法將對器官移植前的供受體選擇、移植后的排斥反應(yīng)的確定以及停用免疫抑制劑時機的掌控有革命性的貢獻。再如, 許多病人在移植后, 由于經(jīng)濟原因而停用免疫抑制劑, 結(jié)果發(fā)現(xiàn)其中有些病人停藥后并不發(fā)生排斥反應(yīng), 也就是說這些病人對供體器官產(chǎn)生了免疫耐受，在未停藥的患者中，實際上可能有不少患者已對供體器官產(chǎn)生了耐受。再者器官移植后,受體需終生使用免疫抑制劑, 但服用該藥的劑量過大不僅導(dǎo)致費用增加(一般一年需數(shù)萬元人民幣), 且受體易患感染性疾病及惡性腫瘤等, 服用劑量過小又會導(dǎo)致移植器官被排斥而失去功能, 如何對具體的個體選擇合適的用藥劑量是長期以來困擾臨床醫(yī)生的一個難題。目前對移植后排斥反應(yīng)的確定主要是通過有創(chuàng)，痛苦、非特異的活檢穿刺方法。而本方法是一個功能性檢測方法，是了解一個人的HLA抗原組合對各種不同特定抗原反應(yīng)性的方法。為我國生物技術(shù)的產(chǎn)業(yè)化發(fā)展開辟一個新領(lǐng)域，對促進我國生物技術(shù)產(chǎn)業(yè)向多元化發(fā)展具有重要意義。由于該項目填補了世界器官移植領(lǐng)域的空白，它的出現(xiàn)將搶占全球器官移植領(lǐng)域產(chǎn)品的至高點。不但具有廣泛的社會效益，而且還具有巨大的經(jīng)濟效益。本項目通過基因工程技術(shù)和細胞工程技術(shù)，建立HLA抗原標準細胞檢測平臺，為器官移植前的供受體搭配、移植后排斥反應(yīng)的預(yù)測、監(jiān)測、診斷、預(yù)防和技術(shù)服務(wù)保障提供快捷、敏感、特異、可靠、無創(chuàng)的科學(xué)檢測方法。二、項目情況研究的目的及意義、應(yīng)用需求、研究開發(fā)的必要性（不限字數(shù)）、意義針對危害人類健康的各器官的終末期疾病，器官移植是目前唯一的治療手段。屆時，年銷售收入20億元人民幣，稅收3億元人民幣，凈利潤8億元人民幣。預(yù)計總投資約5000萬元人民幣，首期投資需10001500萬元人民幣。本產(chǎn)品的出現(xiàn)將搶占全球器官移植領(lǐng)域產(chǎn)品的至高點。器官移植排斥反應(yīng)預(yù)測、診斷、監(jiān)測領(lǐng)域在世界上屬于一個尚未開發(fā)的領(lǐng)域,尚未有與排斥反應(yīng)診斷有關(guān)的試劑盒推出, 我們申請國內(nèi)外專