微生物應(yīng)用技術(shù)ppt課件-文庫(kù)吧資料
2025-01-23 17:38本頁(yè)面
【正文】 (三 )菌種擴(kuò)大培養(yǎng) ? （ 1）一級(jí)種子培養(yǎng) 采用液體培養(yǎng)基，由葡萄糖、玉米漿、尿素、磷酸氫二鉀、硫酸鎂、硫酸鐵及硫酸錳等組成 ，pH為 ～ ；三角瓶?jī)?nèi) 32 ℃ 振蕩培養(yǎng) 12h，貯于 4 ℃ 冰箱備用。淀粉水解糖的制備一般有酸水解法和酶水解法兩種。這些菌株的斜面培養(yǎng)一般采用由蛋白胨、牛肉膏、氯化鈉等組成， pH為 ～ ， 32 ℃ 培養(yǎng) 24 h，冰箱保存?zhèn)溆?。這些細(xì)菌都是需氧微生物，都需要以生物素為生長(zhǎng)因子。 (一 )谷氨酸發(fā)酵生產(chǎn)的菌種 谷氨酸酵生產(chǎn)菌種主要有棒狀桿菌屬、短桿菌屬、小桿菌屬及節(jié)桿菌屬的細(xì)菌。谷氨酸是一種重要的氨基酸。可在 60℃ ， 20mmHg真空中烘 16 h，然后磨粉、裝桶。當(dāng)濃縮到原來水濃縮體積，蒸出餾分中含水達(dá) 2％ ～ 4 ％時(shí)，即停止蒸餾。將二次 BA萃取以 mol/L NaOH 液萃取，調(diào) pH至 ～ ，得青霉素鈉鹽水濃縮液。 (3)脫色 在二次 B A提取液中加活性炭 150 一 300g／ 10億單位，脫色、過濾。然后以 % ～ %NaHCO3在 pH ～ 霉素從 BA中提取到緩沖液中。 (1)過濾：采用鼓式真空過濾器，過濾前加去乳化劑并降溫 (2)提煉 用溶媒萃取法。 (三 )青霉素發(fā)酵工藝 種子制備階段以生產(chǎn)豐富的孢子（斜面和大米孢子培養(yǎng)）或大量健壯的菌絲體（種子罐）為目的。 ? 前體 苯乙酸或苯乙酰胺，由于它們對(duì)青霉菌有一定毒性，故一次加入量不能大于 0． 1％，并采用多次加入方式。 (二 )青霉素發(fā)酵生產(chǎn)培養(yǎng)基 ? 碳源 目前普遍采用淀粉經(jīng)酶水解的葡萄糖糖化液進(jìn)行流加。 70年代前育種采用誘變和隨機(jī)篩選方法，后來由于原生質(zhì)體融合技術(shù)、基因克隆技術(shù)等現(xiàn)代育種技術(shù)的應(yīng)用，青霉素工業(yè)發(fā)酵生產(chǎn)水平已達(dá) 85 000U／ ml以上。 (一 )青霉素發(fā)酵生產(chǎn)菌株 最初由弗萊明分離的點(diǎn)青霉，只能產(chǎn)生 2 U／ ml的青霉素。在二戰(zhàn)期間立刻大顯身手，它能有效控制傷口的細(xì)菌感染，挽救了數(shù)百萬戰(zhàn)爭(zhēng)中受傷者的性命?？股夭粌H廣泛用于臨床醫(yī)療，而且已經(jīng)用于農(nóng)業(yè)、畜牧及環(huán)保等領(lǐng)域。這類有機(jī)物質(zhì)能在低濃度下抑制或殺滅活細(xì)胞，這種作用又有很強(qiáng)的選擇性。分離提純后的產(chǎn)品，還要經(jīng)過質(zhì)量檢查合格后，才能成為正式產(chǎn)品。對(duì)發(fā)酵產(chǎn)品的要求不同，分離提純的方法也相應(yīng)有些區(qū)別。為了使發(fā)酵過程能順利進(jìn)行，要隨時(shí)取樣，檢測(cè)培養(yǎng)液中的細(xì)菌數(shù)目、產(chǎn)物濃度，同時(shí)還要及時(shí)為發(fā)酵菌提供必需的營(yíng)養(yǎng)，并嚴(yán)格控制溫度、 pH、溶氧、通氣量與轉(zhuǎn)速等發(fā)酵條件。 三、擴(kuò)大培養(yǎng)和接種 發(fā)酵過程一般是在發(fā)酵罐內(nèi)進(jìn)行的，發(fā)酵罐是一種圓柱形的容器，容量從幾升到幾百萬升，罐上除有通氣、攪拌、接種、加料、冷卻等裝置外，還有對(duì)溫度、 pH、通氣量與轉(zhuǎn)速等發(fā)酵條件進(jìn)行檢測(cè)和控制的裝置。例如，如果青霉素生產(chǎn)過程中污染了雜菌，這些雜菌會(huì)分泌青霉素酶，將形成的青霉素分解掉。一般來說，培養(yǎng)基的配方要經(jīng)過反復(fù)的實(shí)驗(yàn)才能確定。 一、菌種的選育 在大規(guī)模的發(fā)酵生產(chǎn)中，需要將選育出的優(yōu)良菌種經(jīng)過多次擴(kuò)大培養(yǎng)，讓它們達(dá)到一定數(shù)量以后，再進(jìn)行接種。 20世紀(jì) 40 年代，微生物學(xué)家開始用紫外線、激光、化學(xué)誘變劑等處理 菌種，使菌種產(chǎn)生突變，以篩選出符合要求的優(yōu)良菌種。人們最初是從自然界尋 找所需要的菌種，如谷氨酸發(fā)酵時(shí)常用菌有谷氨酸棒狀桿菌 等。 四、微生物發(fā)酵的基本特征 第二節(jié) 工業(yè)發(fā)酵的工藝流程 生物發(fā)酵工藝多種多樣，但基本上包括菌種的選育、菌種培 養(yǎng)基的配制、擴(kuò)大培養(yǎng)和接種、發(fā)酵過程下游處理即分離提 純等幾個(gè)過程。 （ 3）非連續(xù)性生產(chǎn)。 （ 2）無菌發(fā)酵，整個(gè)反應(yīng)過程要求無菌。 微生物發(fā)
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