生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)8聚丙烯酰胺凝膠垂直板電泳-文庫吧資料
2025-01-22 13:02本頁面
【正文】 TEMED、 、 1%瓊脂糖溶液、 ％考馬斯亮蘭 R250 、 7%醋酸 器材：雙垂直板電泳槽、穩(wěn)壓穩(wěn)流電泳儀 、脫色搖床 五 、 操作方法 將平 、 凹玻璃板和邊條如下圖安裝在制膠架上 。而長軸則隨蛋白質(zhì)的分子量成正比地變化。 ? SDS與蛋白質(zhì)結(jié)合后，還引起了蛋白質(zhì)構(gòu)象的改變。 ? 在蛋白質(zhì)溶液中加入巰基乙醇后，巰基乙醇能使蛋白質(zhì)分子中的二硫鍵還原，使蛋白質(zhì)分成單個亞單位； ? SDS能使蛋白質(zhì)的氫鍵、疏水鍵打開，并結(jié)合到蛋白質(zhì)分子上，形成蛋白質(zhì) – SDS復(fù)合物。 如果在丙烯酰胺凝膠系統(tǒng)中加入陰離子去污劑十二烷基磺酸鈉(sodium dodecyl sulfate,簡稱 SDS)， 則蛋白質(zhì)分子的電泳遷移率主要取決于它的分子量 ， 而與所帶電荷和形狀無關(guān) 。 C顯示蛋白質(zhì)樣品分離成數(shù)個區(qū)帶。 2種孔徑的凝膠、 2種緩沖體系、 3種 pH值使不連續(xù)體系形成了凝膠孔徑、pH值、緩沖液離子成分的不連續(xù)性，這是樣品濃縮的主要因素。分離膠是由 AP催化聚合而成的小孔膠，凝膠緩沖液為 TrisHC1。 圖 1 聚丙烯酰胺凝膠圓盤電泳示意圖 (A為正面 ,B為剖面 ) (1)樣品膠 (2)濃縮膠 (3)分離膠 (4)電極緩沖液 圖 2 夾心垂直板電泳槽示意圖 圖 3 凝膠模示意圖 返回 ? 不連續(xù)體系由電極緩沖液、濃縮膠及分離膠所組成。 表 分子量范圍與凝膠濃度的關(guān)系 分子量范圍 適用的凝膠濃度 /(%) 蛋 白 質(zhì) ?104 2030 14 104 1520 15 1041 105 1015 1 105 510 ?5 105 25 核酸 (RNA) ?104 15–20
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