【正文】 實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組：實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組之間除了處理不同，其他條件均應(yīng)等同。各給藥組所測(cè)得血糖值比較：模型組與空白組比較，以分析模型是否成功；陽(yáng)性對(duì)照組與模型組比較，以分析本方法是否可靠；給藥組與模型組比較，以分析是否有藥理作用；與陽(yáng)性對(duì)照組比較，以分析兩者作用強(qiáng)度如何。陽(yáng)性對(duì)照目的有兩個(gè)：其一是檢查方法的可靠性；其二是對(duì)此同類(lèi)新藥之優(yōu)劣及特點(diǎn)。所謂同類(lèi)，即選用的藥物力求與被研究的新藥主治相同、功效相似，且劑型及給藥途徑均相同者。②模型對(duì)照組：不用被試品，其他處理與給藥組相同，即經(jīng)受同樣的造模處理。但試驗(yàn)操作與給藥組相同，如灌胃給藥生在空白對(duì)照只給NS（或溶劑），以抵消一些非實(shí)驗(yàn)因素（給藥，捉拿等）的干擾。常用對(duì)照組有三種。3）對(duì)照：比較研究是科學(xué)實(shí)驗(yàn)不可缺少的條件，沒(méi)有比較就沒(méi)有區(qū)別，也就談不上科學(xué)性。在稱(chēng)重同時(shí)，將體重不同的小鼠分放于不同鼠盒中，相同體重小鼠放在一起；分組時(shí)再將相同體重的小鼠分放于不同的鼠盒中，使每只小鼠均有同等機(jī)會(huì)分配到各組中去。使每一個(gè)體在實(shí)驗(yàn)中都有同等的機(jī)會(huì)，以減少主觀因素的影響或避免偏性誤差。重復(fù)次數(shù)要根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求和性質(zhì)，主要藥效，指標(biāo)穩(wěn)定者，重復(fù)2~3次即可。計(jì)數(shù)研究（以反應(yīng)有、無(wú)作為指標(biāo)）所用小鼠或大鼠每組應(yīng)不少于20~30只。每組該用多少動(dòng)物才能取得可信的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，這要根據(jù)觀察指標(biāo)的性質(zhì)（包括藥物作用的顯著性和結(jié)果的離散度等）和動(dòng)物種類(lèi)而定。如何用最少的動(dòng)物、實(shí)驗(yàn)次數(shù)得到可以信賴(lài)的結(jié)果。1）重復(fù)：一般說(shuō)來(lái)，實(shí)驗(yàn)重復(fù)次數(shù)越多，結(jié)論越正確、越可靠。 二、實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的原則為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的科學(xué)性、正確性、減少誤差和偏因。嚴(yán)密而合理的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)，不但可對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果和誤差有比較準(zhǔn)確的估計(jì)，最大限度地獲得豐富而可靠的資料，而且還可減少人力，節(jié)省物力和時(shí)間，提高工作效率，避免因?qū)嶒?yàn)設(shè)計(jì)不當(dāng)，造成人力、物力的浪費(fèi)，甚至全功盡棄的不良結(jié)果。⑤狗要做心電圖。臟器系數(shù)（心、肝、脾、肺、腎、腎上腺、甲狀腺、睪丸、子宮、卵巢、前列腺、腦）。②血液學(xué)檢查：RBC、Hb、WBC及其分類(lèi)，BPC、凝血 ③血液生化檢查：天門(mén)冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶AST、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶ALT、堿性磷酸酶ALP、尿素氮BuN、總蛋白TP、白蛋白ALB、血糖GLu、總膽紅素TBIL、肌酐Gma、總膽因醇TCHO。如大鼠長(zhǎng)毒無(wú)明顯毒性，可免做狗的長(zhǎng)毒。4）試驗(yàn)周期：一般為臨床用藥用期的2~3倍?？诜幉捎霉辔阜?。如試品毒性很低，測(cè)不出LD50，只設(shè)高低兩劑量組，高劑量組一般為擬用于臨床劑量的50倍以上，并應(yīng)高于藥效學(xué)試驗(yàn)之高劑量和臨床治療量。高劑量組應(yīng)產(chǎn)生明顯的毒性反應(yīng)或個(gè)別動(dòng)物死亡，即接近最小致死量；低劑量組應(yīng)略高于動(dòng)物的有效量或臨床試用量而不出現(xiàn)任何觀察指標(biāo)的異常；中劑量組介于兩者之間，應(yīng)產(chǎn)生輕微毒性反應(yīng)。非嚙齒類(lèi)常用狗，4~6個(gè)月齡，每組至少4只，♂♀各半。長(zhǎng)期毒性試驗(yàn)的要求1）動(dòng)物：至少兩種動(dòng)物（包括嚙齒類(lèi)和非嚙齒類(lèi)）。3）觀察停藥后組織功能損害的發(fā)展和恢復(fù)情況（可逆性觀察）。長(zhǎng)期毒性試驗(yàn)?zāi)康?）觀察動(dòng)物因連續(xù)用藥所產(chǎn)生的毒性反應(yīng)，中毒開(kāi)始時(shí)間及中毒時(shí)首先出現(xiàn)的癥狀。測(cè)定MTD量，同樣也應(yīng)嚴(yán)密觀察動(dòng)物毒性反應(yīng)，要求與LD50測(cè)定時(shí)的毒性反應(yīng)觀察相同。小鼠不少于20只，♂♀各半，連續(xù)觀察7d。最大給藥量（MTD）測(cè)定多數(shù)中藥毒性較低，口服給藥吸收有限，即使一次給予最大濃度、最大容積（）也難以觀察到死亡反應(yīng)，即測(cè)不出LD50，可以測(cè)定其MTD，以反映受試品的毒性情況。實(shí)驗(yàn)報(bào)告需注明日期，動(dòng)物品系、規(guī)格、數(shù)量、受試物來(lái)源及含量、各組動(dòng)物死亡率，動(dòng)物中毒表現(xiàn)及致死癥狀等。不同方法各有特點(diǎn)，實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)不完全相同，但方法上大同小異：首先通過(guò)預(yù)試找出全死、全不死的劑量，正式試驗(yàn)時(shí)在全死和全不死劑量中間插入2~5個(gè)劑量組，每組動(dòng)物（小鼠）至少10只，♂♀各半，各劑量按等比級(jí)數(shù)遞增（或遞減），各劑量組和死亡率之間應(yīng)呈較好的線(xiàn)性關(guān)系。6）測(cè)定方法：如Bliss法、簡(jiǎn)化機(jī)率單位法、孫氏綜合法（改良冠氏法）等。宜控制在20℃上下。死亡動(dòng)物應(yīng)及時(shí)進(jìn)行尸檢，發(fā)現(xiàn)病復(fù)器官應(yīng)做病理組織學(xué)檢查。3）觀察時(shí)間：各中藥毒性反應(yīng)出現(xiàn)快、慢不同，如果代謝產(chǎn)物中毒，毒性反應(yīng)可能出現(xiàn)晚些，所以急毒觀察時(shí)間不少于7d，如遇遲發(fā)性或進(jìn)行性反應(yīng)時(shí)，還要適當(dāng)延長(zhǎng)至14 d。應(yīng)測(cè)定靜注的LD50，水溶性差，無(wú)法通過(guò)注射途徑（皮下、腹腔或靜脈）給藥時(shí)，可處考慮只用胃腸道給藥。常采用灌胃和注射給藥。半數(shù)致死量（LD50）的測(cè)定1）實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：多用小鼠6~8周齡，體重18~22g，雌雄各半，正規(guī)動(dòng)物室飼養(yǎng)的健康合格小鼠。應(yīng)注意L幫ED50的測(cè)定需在同種動(dòng)物身上，觀察同一試品，采用同一給藥途徑，在相同試驗(yàn)條件下進(jìn)行。3）計(jì)算治療指數(shù)：治療指數(shù)（Therapeutic index，簡(jiǎn)稱(chēng)TI），等于LD50/ED50。藥物的LD50愈小，說(shuō)明毒性越大。（一）急性毒性試驗(yàn)?zāi)康?）估測(cè)試品毒性強(qiáng)度：常用動(dòng)物的致死量表示。毒理學(xué)研究基本項(xiàng)目通常分為：急性毒性試驗(yàn)，長(zhǎng)期毒性試驗(yàn)和特殊毒性試驗(yàn)。三、中藥新藥毒理學(xué)研究的基本內(nèi)容中藥毒理學(xué)研究是預(yù)測(cè)中藥安全性的重要手段，通過(guò)毒性研究可以了解中藥毒性反應(yīng)的性質(zhì)、毒性程度、毒害發(fā)展過(guò)程及毒性作用是否可逆，從而在臨床試驗(yàn)時(shí)注意和采取預(yù)防措施，避免產(chǎn)生毒副作用，確保安全用藥。（三）藥代動(dòng)力學(xué)研究研究新藥在體內(nèi)吸收、分布及排泄。主要觀察三個(gè)方面：神經(jīng)系統(tǒng)：觀察給藥后的行為變化及活動(dòng)情況心血管系統(tǒng)：觀察給藥后的對(duì)心電圖及血壓等的影響。（二）一般藥理研究指主要藥效以外的廣泛藥理作用研究。計(jì)量資料（量反應(yīng)指標(biāo)，可以數(shù)量表示藥理反應(yīng)，如血壓、心率、尿量、體溫等）：常用t檢驗(yàn)方法，如實(shí)驗(yàn)組數(shù)多也可采用F檢驗(yàn)。給藥途徑一般采用二種，其中一種應(yīng)與臨床相同。給藥劑量與途徑各試驗(yàn)至少設(shè)兩個(gè)劑量組，一般應(yīng)設(shè)三個(gè)劑量組，因量效關(guān)系起碼要三個(gè)劑量組才能顯示出來(lái)，其中一個(gè)劑量應(yīng)相當(dāng)于臨床劑量（一般按公斤體重計(jì)算）的2~5倍。還應(yīng)考慮動(dòng)物是否易得、是否經(jīng)濟(jì)、是否容易飼養(yǎng)管理。如降壓藥研究，宜選用貓、狗、大鼠，不宜使用家兔，因家兔血壓不穩(wěn)定，對(duì)某些藥物不敏感；過(guò)敏性哮喘藥研究，宜選用豚鼠；子宮平滑肌研究，宜選用家兔等；催吐實(shí)驗(yàn)宜選用犬、貓、鴿子，不宜選用家兔或鼠類(lèi)，因?yàn)楹笳邿o(wú)嘔吐反應(yīng)。小鼠，昆明種，抗炎實(shí)驗(yàn)用雄性。對(duì)其品系、性別、年齡、體重、雌雄、健康狀態(tài)、飼養(yǎng)條件及動(dòng)物來(lái)源等應(yīng)有記錄。粗制劑水溶性差者，可僅用口服給藥。受試藥物中藥材應(yīng)經(jīng)過(guò)生藥學(xué)鑒定（品種、產(chǎn)地）；中藥制劑的處方、劑型、制備工藝及藥品質(zhì)量應(yīng)基本穩(wěn)定；與臨床用藥制劑相同；根據(jù)受試藥物特點(diǎn)和試驗(yàn)方法，藥效試驗(yàn)可選用不含賦形劑的中藥制劑或提取物。當(dāng)選擇符合中醫(yī)臨床病或證的模型有困難時(shí)，可選用與其病或證相似的病理模型和方法進(jìn)行試驗(yàn)，如研究治療痞滿(mǎn)證的新藥，可參考治療肝胃不和證、脾虛證的模型，以證實(shí)所研究藥物“消痞”、“消脹”的作用。選擇或建立動(dòng)物模型時(shí)盡量選擇與人體發(fā)病機(jī)理相近的模型。因?yàn)檎?dòng)物屬陰陽(yáng)平衡，正氣不虛的機(jī)體，所以對(duì)許多臨床病人有效的補(bǔ)益藥在正常動(dòng)物身上常?？床坏綉?yīng)有的補(bǔ)益效果。動(dòng)物模型的選擇模型選擇標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)首選符合中醫(yī)臨床證或病的動(dòng)物模型。 通過(guò)這兩類(lèi)實(shí)驗(yàn)，基本可以明確試品的藥理作用，無(wú)論哪一種方法，必須是方法先進(jìn)、可靠、操作規(guī)范、結(jié)果可信。其優(yōu)點(diǎn)是可按要求嚴(yán)格控制實(shí)驗(yàn)條件，重復(fù)性較好，用藥量小，節(jié)省動(dòng)物，所得結(jié)果容易分析。1）以整體實(shí)驗(yàn)為主 包括正常動(dòng)物和病理模型動(dòng)物，其優(yōu)點(diǎn)是保持機(jī)體本身的完整性，包括神經(jīng)反射、體液聯(lián)系、完整的內(nèi)臟功能，試品的代謝過(guò)程更符合于臨床情況；劑量和給藥途徑可以和臨床參比，結(jié)果更接近臨床實(shí)際。有明確的祛邪作用，可能開(kāi)發(fā)為抗癌藥物，祛邪作用不明顯者，但具有扶正、增效或減毒作用，只能作為抗癌輔助藥應(yīng)用。2）中藥成分復(fù)雜，藥理作用廣泛，應(yīng)選擇多指標(biāo)驗(yàn)證其藥效，并分清主次，突出重點(diǎn)，間接證實(shí)其藥效的外圍實(shí)驗(yàn)可酌情選作。同時(shí)，要做到安全，有效兩個(gè)基本原則。第三節(jié) 中藥新藥藥理學(xué)、毒理學(xué)研究的基本內(nèi)容一、中藥新藥的概念什么是中藥新藥：新藥是指我國(guó)未上市過(guò)的藥品，已生產(chǎn)的藥品，凡增加新適應(yīng)證、改變給藥途徑和改變劑型的亦屬新藥范圍。藥理學(xué)有門(mén)分支稱(chēng)為“時(shí)辰藥理學(xué)”，研究時(shí)間生物學(xué)在藥理上的應(yīng)用。意義：根據(jù)藥物的晝夜節(jié)律，制定出最佳給藥劑量、給藥間隔、次數(shù)，當(dāng)機(jī)體對(duì)藥物敏感時(shí)減少藥物用量，反之。參附注射液小鼠靜脈注射的LD50：；12時(shí)給藥為 。藥物晝夜節(jié)律—藥物的作用和毒性隨外界晝夜的變化而出現(xiàn)有規(guī)律的波動(dòng)。也表明中藥療效與用藥時(shí)間有密切關(guān)系。這些說(shuō)明：生物的生命活動(dòng)與時(shí)間密切相關(guān)，有一定內(nèi)在規(guī)律可尋。環(huán)境有時(shí)辰節(jié)律，機(jī)體的生理活動(dòng)也隨晝液交替而周期變化，藥物作用及毒副反應(yīng)為也隨之變化而有差異。3）機(jī)體機(jī)能狀態(tài)不同，藥物作用有別玉屏風(fēng)散能使機(jī)體低下的免疫功能增強(qiáng)，又能使過(guò)亢的免疫功能趨向正常（雙向調(diào)節(jié)作用）。2）肝、腎功能不全病人肝、腎是藥物消除的兩大重要器官，肝代謝藥物（肝藥酶）、腎可排泄藥物。如黃苓對(duì)正常體溫度無(wú)降低作用，只對(duì)發(fā)熱病人有解熱作用。在質(zhì)的差異方面：主要是變態(tài)反應(yīng)（過(guò)敏反應(yīng)）：西藥青霉素、中藥口服人參糖漿、靜滴生脈液都有過(guò)敏反應(yīng)報(bào)道。4）藥物作用的個(gè)體差異遺傳起決定性作用，有量和質(zhì)的兩種表現(xiàn)：在量的差異方面：高敏性：某些病人對(duì)藥物敏感性高，等量的藥物可以引起和一般病人性質(zhì)相似但強(qiáng)度更大的藥理效應(yīng)的毒性?，F(xiàn)代研究認(rèn)為：病人樂(lè)觀情緒有利于調(diào)動(dòng)體內(nèi)的積極因素，增加自身免疫能力，提高療效。如：紅花、麝香興奮子宮，甚則引起痙攣；莪術(shù)、姜黃等干擾孕激素；芫花、甘逐、丹皮酚等影響子宮內(nèi)膜和胚胎的營(yíng)養(yǎng)；半夏可致畸；催吐藥、峻瀉藥禁用于孕婦，以免導(dǎo)致流產(chǎn)。生理情況的影響1）年齡不同，對(duì)藥物的反應(yīng)不同兒童期：處于生長(zhǎng)發(fā)育時(shí)期，器官發(fā)育不完全（善），特別是肝腎功能尚不完善，影響藥物代謝、排泄老年人：肝腎功能減退，也影響藥物代謝、排泄，對(duì)藥物更敏感、易中毒，藥量應(yīng)相對(duì)減少。（八）、配伍中藥配伍使用，對(duì)藥效及毒性有著重要影響（第六章中藥復(fù)方藥理將詳細(xì)敘述）。湯劑煎煮所用水量、火侯、時(shí)間長(zhǎng)短不同，直接影響藥物有效成分的溶出和藥效的發(fā)揮。目前湯劑仍用得最多、最廣泛。所以常用劑量的確定，是以藥理毒理研究及臨床反復(fù)實(shí)踐確定的。（七）、劑量、煎煮方法和條件劑量：指成人一日的用藥量?，F(xiàn)代制藥要求更高：一方面，同一中藥的不同劑型，由于制造工藝和給藥途徑不同，影響藥物的藥動(dòng)學(xué)和藥效學(xué)過(guò)程。如：參脈注射液、丹參注射液療效明顯高于生脈散、丹參片。遠(yuǎn)志無(wú)必要去心，連翹也不必去心等。改進(jìn)切制工藝，增加藥效由于歷史條件限制，古代流下來(lái)的加工炮制方法不盡合理，不一定都有科學(xué)性，我們不能照搬硬套。生曬參炮制成紅參后，單體成分增強(qiáng)五種特殊成分：人參皂苷Rh人參炔三醇、人參皂苷RhRgRg3。因?yàn)榕谥坪蟊黄茐狞S苓酶（黃苓酶能促進(jìn)黃苓苷分解，有效成分減少），有利于有效成分的保存。因?yàn)橛行С煞譃樵宜兀坞x生物堿難溶于水，醋炒后，延胡素中生物堿與醋酸結(jié)合成易溶于水的醋酸鹽，煎劑中溶于水的生物堿含量增加，鎮(zhèn)痛作用增強(qiáng)。增強(qiáng)療效（增效）：中藥具有多成分、多效性、炮制可使其中某一成分作用更突出。炒后安息香酸含量降低，對(duì)胃的刺激性也減輕。水解如附子：烏頭堿 烏頭原堿（毒性降低為1/2000），強(qiáng)心成分消旋去甲烏藥堿耐熱，不為炮制所破壞。其中也有少數(shù)不合理的，應(yīng)加以改革和改進(jìn)。故藥材的貯藏應(yīng)采取措施：及時(shí)采收加工、妥善保管（干燥、通風(fēng)、避光）、定期檢查。（四）、貯藏條件藥材因受生長(zhǎng)條件限制，季節(jié)性很強(qiáng)，貯藏不當(dāng)，易發(fā)生霉?fàn)€、變質(zhì)、蟲(chóng)蛀等現(xiàn)象而直接影響藥理作用和臨床療效。人參—%；1月采收含人參皂苷7%青蒿—青蒿素在7~8月花前葉盛期含量最高，達(dá)6%。所以，可以用植化方法先測(cè)定有效成分在不同期植物中含量，再確定采收季節(jié)。我國(guó)勞動(dòng)人民積累了很多經(jīng)驗(yàn)“春采茵陳夏采蒿，知母黃苓全年刨，九月中旬摘菊花，十月上山采連翹”，這是山西藥農(nóng)的經(jīng)驗(yàn)。草烏飲片中的烏頭堿等相差17倍之多。如黨參由于產(chǎn)地不同，其藥理作用有差別：璐黨參的解熱與抗炎作用顯著；板黨參有一定的鎮(zhèn)痛作用；文黨參鎮(zhèn)痛作用顯著。近代研究表明：藥理作用決定于中藥所含成分的質(zhì)和量?；祀s品種—華北大黃、天山大黃中，結(jié)合型蒽苷含量低，瀉下作用差。1）代用品 與正品有關(guān)似化學(xué)或分和作用的親緣品種 同屬不同種混用 用川姜樸代厚樸 同木蘭屬 同科不同屬混用 用馬尾連代黃連 同毛莨科 用正品的非入藥部位代入藥部位 黃連葉代根莖2）混淆品 外形與正品相似，相混作為正品使用，造成張冠李戴 無(wú)毒品的混淆 有毒品有混淆 砒霜代滑石 山茨菇代川貝母3）混雜品 正品藥中混入其它少量藥物，影響正品劑量，從而影響療效連錢(qián)葉中混入馬蹄草由于品種混亂，所含化學(xué)成分含量差異大，從而影響了其藥理作用。第二節(jié) 影響中藥藥理作用的因素影響中藥藥理作用的因素主要有：藥物因素、機(jī)體因素、環(huán)境因素。如：雷公藤，近代藥理研究發(fā)現(xiàn)具抗炎、免疫抑制、抗腫瘤等作用，用于治療類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、紅斑狼瘡等多種疾病取得良好療效。5）中藥藥理作用研究促進(jìn)中藥功效的發(fā)展中藥的傳統(tǒng)功效是古代醫(yī)家從臨床經(jīng)驗(yàn)總結(jié)而來(lái)的，隨人們認(rèn)識(shí)水平及科學(xué)發(fā)展，對(duì)同一中藥功效認(rèn)識(shí)也不盡相同（更加深入、全面、正確）?，F(xiàn)已揭示的中藥藥理作用與功效相關(guān)性及內(nèi)在聯(lián)系，溝通了兩者之間的關(guān)系，利于中藥的推廣應(yīng)用，也為指導(dǎo)臨床處方譴藥，提高療效提供了理論依據(jù)。）中藥藥理學(xué)補(bǔ)充和完善了傳統(tǒng)中藥的功效理論。生物活性強(qiáng)含量高的成分在全藥中可起主要作用。四氫巴馬汀不僅在延胡素內(nèi)有，在黃連、黃柏等藥內(nèi)也含有，但含量極低，故黃連，黃柏并無(wú)明顯鎮(zhèn)痛作用。B、有些成分含量較少或