殺菌劑生物測定技術(shù)-文庫吧資料
2025-01-22 01:10本頁面
【正文】 ogyne incognita 馬鈴薯莖線蟲 Ditylenchus destructor Thorne 但如果是針對(duì)某種線蟲篩選合適的殺線蟲劑，則只能以此種線蟲為指示生物。 葉碟法的基本原理是將容易感染供試菌的植物葉片 （ 如蠶豆葉片 ） 經(jīng)不同濃度的藥劑處理后平放在培養(yǎng)皿內(nèi) ， 再將一塊培養(yǎng)好的供試菌菌絲體 （ 如紋枯病菌 ） 放在葉片上 ， 經(jīng)保濕培養(yǎng)一定時(shí)間 ， 檢查其病斑面積 ， 并以此衡量供試藥劑的毒力 。 用接種環(huán)沾取供試菌液進(jìn)行劃線培養(yǎng) ， 至一定時(shí)間后觀察抑制病菌生長的最高稀釋倍數(shù)即最低抑制濃度 。 1 2 3 4 5 CK 用滅菌蒸餾水將供試藥制按等比或等差級(jí)數(shù)稀釋一系列藥液濃度 。 自倒數(shù)第二管中取出 Xml棄去不用 ，如此所得的一系列濃度順序相差一倍 。顯然，最低抑制濃度最小的，其毒力最大。 （ 3）最低抑制濃度法 最小濃度法基本原理 是藥劑按等比或等差級(jí)數(shù)系列濃度和培養(yǎng)基混合后接入供試菌，定溫培養(yǎng)一定時(shí)間后，找出“終點(diǎn)”（明顯地抑制供試菌生長發(fā)育的最高稀釋倍數(shù)，即最低濃度）的那個(gè)濃度，即為最低抑制濃度。 生長速率法示意圖 菌餅 含藥劑的培養(yǎng)基 菌餅 含毒培養(yǎng)基 純生長量＝菌落直徑－菌餅直徑 對(duì)照的純生長量－處理的生長量 抑制率＝ ――――――――――――X 100 對(duì)照的純生長量 計(jì)算公式 將算出的各處理（濃度）的抑制率換成機(jī)率值，以對(duì)數(shù)表示濃度，用作圖法或最小二乘法求出 EC50或 EC95，并以此比較毒力。 （ 4） 測定菌落直徑 恒溫培養(yǎng)到預(yù)定時(shí)間后 ，取出培養(yǎng)皿測量菌落直徑 。 對(duì) 供試藥劑 要求 ， 有一定的耐熱性 ， 遇熱不易分解 。 病原菌生長的表示方法 優(yōu)點(diǎn)： ① 操作比較簡單 ② 適用范圍廣 ， 適用于乳油 、 水劑 、 可濕性粉劑等 ③ 重復(fù)性好 。 有效好的水溶性 將不同濃度的藥液和熱的培養(yǎng)基混合，用這種含毒培養(yǎng)基培育病，以病原菌的生長進(jìn)度的快慢來判定藥劑的毒力大小。如由于大多數(shù)抗生素都有一定的水溶性，因此，抑菌圈法為抗生素的科研和生產(chǎn)廣泛采用。如是否容易擴(kuò)散。 影響抑菌圈法測定結(jié)果的因素 特別是為某一特定病害尋求有效的防治藥劑時(shí) ，實(shí)際上不可能對(duì)供試菌進(jìn)行選擇 ， 但以水平擴(kuò)散法作生物定量測定 ， 如抗菌素效價(jià)測定 ， 則必須對(duì)供試菌有如下的要求： 對(duì)被測定的藥劑有適當(dāng)?shù)拿舾行?， 抑菌圈界限明顯 培養(yǎng)容易 ， 生長迅速不易為雜菌污染 不易發(fā)生變異 容易作成接種菌液 （ 菌絲體或孢子懸浮液 ） 菌種有較強(qiáng)的耐熱能力 2 對(duì)藥劑的要求 用抑菌圈法測定一種藥劑的抑菌作用的大小，有一定的局限性。 ?各濾紙片間距要適合，以防形成的抑菌圈不園 ?放濾紙片時(shí)要平放、更迅速、準(zhǔn)確、放下后不能再移動(dòng) ?用十字交叉法測量抑菌圈的直徑 注意事項(xiàng) 用滅菌后的打孔器直接在凝固好的含孢培養(yǎng)基上打成圓孔 ， 將定量的藥液滴入圓孔中 ， 恒溫培后測量抑菌圏的大小 ， 進(jìn)行殺菌劑毒力比較 。內(nèi)徑 ， 高 ） ， 其中 1個(gè)管為對(duì)照 ， 其余 5管為 5個(gè)不同濃度的藥液 ，在適合的溫度下培養(yǎng)一段時(shí)間 ， 取出用十字交叉法測是抑菌圈的直徑 。 管碟法 又稱牛津杯法 （ 3） 待培養(yǎng)基冷至 50℃ 左右 （ 憑經(jīng)驗(yàn)估計(jì) ） ，迅速吸取 10ml菌液加入培養(yǎng)基內(nèi) ， 充分混合后 ，倒入滅菌的培養(yǎng)皿中 ， 制成含菌培養(yǎng)基平板 。 （ 1） 用滅菌蒸餾水將供試藥劑配制成一系列梯度濃度 ， 一般 5~7個(gè)濃度 。根據(jù)抑菌圈的大小來比較不同殺菌劑的毒力大小。 LC50 和 LC95的計(jì)算 孢子萌發(fā)法只適用于產(chǎn)生孢子的真菌 。 孢子萌發(fā)的標(biāo)準(zhǔn) 孢子萌發(fā)率 （ %） ＝萌發(fā)孢子數(shù) /檢查孢子數(shù) X100 若對(duì)照組有 20%以上孢子不萌發(fā) ， 則應(yīng)重做 。用孢子液和不同濃度的藥液混合 ， 恒溫保濕培養(yǎng) ，培養(yǎng)一定時(shí)間后即可檢查孢子萌發(fā)率 。 孢子萌發(fā)法的突出優(yōu)點(diǎn)是 快速 ， 試驗(yàn)當(dāng)天即可獲得結(jié)果 ， 尤其適合于 保護(hù)劑 的篩選 。Prevost 就采用此法 ， 后經(jīng)不少學(xué)者改進(jìn) ，使之日趨規(guī)范 、 合理 。 1 從大量合成化合物中篩選出有可能作為殺菌劑的化合物 2 為特定的植物病害尋找有效的藥劑 ， 為此需要進(jìn)行篩選殺菌劑毒力的比較 3 殺菌劑作
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