殺菌劑生物測定技術(shù)-在線瀏覽
2025-03-05 01:10本頁面
【正文】 個左右孢子為宜 。 （ 4） 在每皿培養(yǎng)基上按合適的間隔放置 6個不銹鋼小管 （ 即牛津杯 ， 外徑 。 抑菌圈法示意圖 ?上述操作應(yīng)盡量在無菌條件下進行， 以防污染 ?操作室的溫度最好在 26～ 28℃ 左右， 如室溫太低，則 50℃ 左右的培養(yǎng)基在操作過程中迅速冷凝，無法制作平板 ?十字交叉法測量抑菌圈的直徑 ，消除誤差 注意事項 （ 1） 配制不同濃度的藥液 （ 2） 配孢子 懸浮液 （ 3） 制含孢子的平板 濾紙片法 前三步完全和上述管碟法相同 （ 4） 用消毒鑷子夾取滅菌的圓形濾紙片（直徑為 ）投入不同濃度藥液中， 1分鐘后取出，放入含真菌孢子的 培養(yǎng)基上，每皿放 6片（ 5個濃度各 1片，另 1片為對照片），恒溫培養(yǎng)一定時間，測抑菌圏直徑。 孔碟法 主要有以下幾個方面的 1 對供試菌的要求 在較粗放的比較殺菌劑毒力的測定中 ， 對菌種的要求不必過嚴 ， 只要在培養(yǎng)基中容易培養(yǎng)而且抑菌圈清楚的均可采用 。如與該藥劑的理化性質(zhì)有密切的關(guān)系。若有很好的擴散性能，就能真實反映該藥劑的殺菌毒力。而有相當(dāng)一部分殺菌劑的原藥是不易溶解于水，故擴散性不好，要用該法，就要用適量的乙醇或丙酮溶解后，再用水稀釋至所需的濃度。 （ 2） 生長速率法原理 有 2種： ① 菌落達到一定的大小所需時間 ， ② 一定時間內(nèi)菌落的直徑大小 。 只要操作認真 ， 均可得到可靠的結(jié)果 生長速率法的優(yōu)缺點 缺點： 對 供試菌種 要求嚴格 ， 病菌要易于培養(yǎng) ，生長較快且邊緣 整齊 、 產(chǎn)孢子緩慢 ， 而且是農(nóng)業(yè)生產(chǎn)上重要的的病原菌 。 蘋果腐爛病菌 （ Valsa mali） 小麥紋枯病菌 （ Rhzoctonia solani ） 棉花枯萎病菌 （ Fusarium oxysporium） 葡萄白腐病菌 （ Coniothyrium diplodiella） 小麥全蝕病菌 （ Gaeumannomyces graminis） 辣椒疫霉病菌 （ Phytophthora capsici） 生長速率法常用的菌種 （ 1） 制備菌餅 ：用無菌的打孔器在供試菌種邊緣打下菌塊即菌餅 （ 在無菌條件下進行 ） （ 2） 含毒培養(yǎng)基的制備 ：獎供試藥劑稀釋成一系列梯度濃度后，準確取一定量的藥液加入到熱的培養(yǎng)基中，混勻，倒入滅菌的小培養(yǎng)皿中（直徑為6cm），待冷凝后即為含毒培養(yǎng)基 生長速率法 （ 3） 移植菌餅 用接種針或消毒的攝子將菌餅反面 （ 有菌絲的一面向下和培養(yǎng)基貼合 ） 移植到帶毒培養(yǎng)基平板上 ， 一個培養(yǎng)皿最好接一個菌餅 。 每個菌落十字交叉測兩次直徑 。 毒力方程的計算 在比較粗放的進行幾種殺菌劑的毒力比較時 ， 可以采用最低抑制濃度法 。通過比較幾種不同藥劑的最抵抑制濃度即可比較其毒力。 根據(jù)培養(yǎng)基是固態(tài)還是液態(tài)又將最低抑制濃度法分為 ?液體培養(yǎng)基稀釋法 ?固體培養(yǎng)基稀釋法 取若干只滅菌試管 ， 順序編號 ， 在每只試管中加入適合供試菌生長的液體培養(yǎng)基 Nml， 然后在第一號試管中加入一定濃度的供試藥液 Xml，充分混合后自第一管中取 Nml放入第二管 ， 充分混合后取 Xml加入第 3管 ， 直到最后一管不加藥液作為對照 。 液體培養(yǎng)基稀釋法 在各管中加入供試菌懸浮液一滴，在該供試菌最適溫度下培養(yǎng)一定時間，取出觀察“終點”，一般以混濁度為準，即以某編號試管以下不再發(fā)生明顯混濁現(xiàn)象，這一試管的濃度就是最低抑制濃度。 分別取每種濃度的藥液 Xml分放 50ml滅菌三角瓶 ， 加入滅菌并冷至 60左右的培養(yǎng)基Yml， 立即搖勻倒入培養(yǎng)皿內(nèi)凝固 。 固體培養(yǎng)基稀釋法 接菌餅，若不能生長，此濃度是最低抑制濃度 劃線接細菌，不能生長，此濃度為最低抑制濃度 葉碟法比較簡易 ， 能在室內(nèi)進行 ， 比孢子萌發(fā)法和含毒介質(zhì)培養(yǎng)法接近生產(chǎn)實際 ， 可看作是盆栽試驗的 過渡 階段 。 還有一種葉碟漂浮法 ， 其原理是將容易感染供試菌的植物葉片 （ 如黃瓜葉片 ） 制成直徑 ， 漂浮在不同濃度的藥液中 ， 將供試菌 （ 如黃瓜霜霉病菌 ） 孢子懸浮液定量滴加在葉碟上 ， 在光照下培養(yǎng)一定時間 ，調(diào)查病斑面積 。 殺線蟲劑的生物測定方法 依藥劑性質(zhì)分為兩類： （一）非熏蒸劑測定方法 （二）熏蒸劑測定方法 ?將供試藥劑蒸餾水稀釋成 5~7個梯度濃度 ?取上面藥液 （ 高 1cm直徑 2 cm
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