【正文】 究。 研究內(nèi)容 該研究主要分為以下四部分 : 設(shè)計微波提取金銀花總黃酮的最佳工藝條件，制備供試液。而微波輔助提取的總黃酮較乙醇回流法高。 金銀花總黃酮含量按以下公式計算 : 金銀花總黃酮得率 %= 式中 : C— 根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線查到的濃度 V2— 所取供試液的總體積 V1— 濃縮液定容的體積 V0— 由 V1 所取的試劑體積 微波輔助提取法與乙醇回流法比較 比較兩種提取方法的處理時間和液固比對總黃酮提取量的影響。 26 微波提取單因素實驗方法 分別考察不同的微波輻射功率 ,輻射時 間 ,乙醇濃度 ,固液比對提取效果的影響 提取工藝正交試驗設(shè)計方法 系統(tǒng)考察微波提取法的工藝參數(shù)，根據(jù)已有的資料及實際情況，選用微波輻射功 (A),輻射時間（ B） ,乙醇濃度 (C),固比 (D)作為考察因素，以測得的浸提取樣品中總黃酮含量為考察指標(biāo)，選用擇 L9(34）正交表設(shè)計，得到供試液。 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備 精密量取對照品溶液 0， 1， 2， 3， 4， 5mL，分別置 10mL 容量瓶中，加入 5%亞硝酸鈉溶液 ，振蕩搖勻，放置 6min；再加入 10%硝酸鋁 ，振蕩搖勻，放置 6min；最后加入 4%氫氧化鈉試液 4mL，加甲醇定容至刻度，搖勻，放置 15 min。 擬采取的研究方法或試驗方法 最大吸收波長的選擇方法 以亞硝酸鈉、硝酸鋁和氫氧化鈉為顯色劑，分別作各樣品提取液以及蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品的吸收曲線， 在 510nm 處均有 1 個強吸收峰，因此選擇 510nm為測定波長。所用材料經(jīng)鑒定為菊科金銀花 試劑：蘆丁對照品（批號： 100802020016，含量 %）購于中國藥品生物制品檢定所；所用試劑亞硝酸鈉、硝酸鋁、氫氧化鈉 95%、 乙醇皆為分析純；所用水為去離子水。準(zhǔn)備充分，保證實驗?zāi)茼樌M(jìn)行。 經(jīng)費情況 本實驗在實驗設(shè)計及操作過程 中，在指導(dǎo)老師葛老師、學(xué)院老師和同學(xué)們的指導(dǎo)鼓勵和幫助下。經(jīng)過指導(dǎo)老師葛老師的幫助，結(jié)合文獻(xiàn)資料中的有關(guān)資源，確立了研究方案，技術(shù)路線合理。 三、完成該課題研究已具備的條件（ 有關(guān)的研究工作基礎(chǔ)，儀器設(shè)備條件，經(jīng)費情況） 研究工作基礎(chǔ) 在實驗準(zhǔn)備階段，查閱了大量相關(guān)金銀花總黃酮提取文獻(xiàn)，為實驗開展提供理論基礎(chǔ)。脫色可反復(fù)進(jìn)行，直至顏色符合要求或色值不能再降低。因此，應(yīng)注意微波輻射的時間和功率的控制。溶劑選擇不當(dāng)，不但給生產(chǎn)帶來了麻煩，還會嚴(yán)重影響提金銀花總黃酮的質(zhì)量和澄明度 提取溫度 在高溫度條件下，分子之間碰撞的次數(shù)加劇，有 效成份被破壞，無效成分浸出量增加，這不僅增加了浸出物質(zhì)的雜質(zhì)，而且容易引起某些不耐熱成份和揮發(fā)性較強的成份分解、變質(zhì)或揮發(fā)掉。 24 二、課題關(guān)鍵問題及難點 溶劑的選擇 浸出液的溶劑選擇，必須是對有效成分溶解度大，對無效成分溶解度小 (不溶解或雜質(zhì)沉淀 )，不能與金銀花中黃酮的成份起化學(xué)變化而影啊有效成分。鑒于目前的狀況，其產(chǎn)業(yè)化道路仍較漫長。本實驗通過對微波提取金銀花總黃酮的工藝條件研究為藥理藥效研究提供材料，同時為其進(jìn)一步開發(fā)奠定基礎(chǔ)。 綜上所述 ,微波輔助提取法已經(jīng)在較多植物黃酮的提取中得到應(yīng)用，且作用效果明顯。結(jié)果表明，提取劍花總皂苷的最優(yōu)條件為：粒度 80目，最佳溶劑水，超聲時間 40min，溶劑揮干溫度 80℃， 料液比 l:2。 2020年張璐、劉強等，通過對茯苓多糖制備工藝及藥理作用研究進(jìn)展進(jìn)行綜述，結(jié)果為 茯苓多糖的制備方法有發(fā)酵醇沉法、稀堿浸提法、水提醇沉法、微波輔助提取法；茯苓多糖具有抗腫瘤作用、免疫增強作用、保肝與催眠作用、抗衰老作用、抗單純皰疹病毒作用、抗炎作用、防石消石作用等。 2020年，李莉研究了金銀花黃酮類化合物的提取方法，選擇水或 70%乙醇為溶劑，微波處理或非微波處理桑葉的各種方法提取桑葉總黃酮。 從文獻(xiàn)檢索情況來看，國內(nèi)外近 5年對金銀花的研究主要集中在對有效成分的提取、含量測定、有效成分的藥理活性等方面。金銀花又屬于 2020年衛(wèi)生部公布的“既是 研究，食品又是藥品的物品”。 國內(nèi)外研究現(xiàn)狀及發(fā)展趨勢 金銀花黃酮作為藥用有獨特的藥理方式和良好的療效，且毒副作用很低，從 22 而成為治療冠心病新藥開發(fā)和研究的熱點之一。本文擬利用乙醇溶液做溶劑對金銀花進(jìn)行微波處理，目的在于優(yōu)化金銀花總黃酮提取的工藝條件。金銀花既能宣散風(fēng)熱，還善清解血毒，用于各種熱性病，如身熱、發(fā)疹、發(fā) 斑、 熱毒瘡 癰、 咽喉腫痛 等證，均效果顯著。金銀花自古被譽為清熱解毒的良藥。 ―金銀花 ‖一名出自《本草綱目》，由于忍冬花初開為白色，后轉(zhuǎn)為黃色，因此得名金銀花。 21 本科畢業(yè)論文 (設(shè)計 )開題報告 學(xué) 院 生物工程 專 業(yè) 生物工程 姓 名 學(xué) 號 指導(dǎo)老師 職 稱 合作老師 / 職 稱 / 題 目 微波輔助提取金銀花總黃酮工藝條件的研究 題目性質(zhì) 實驗研究√ 技術(shù)開發(fā) 工程設(shè)計 應(yīng)用型 調(diào)查型 其他 一、選題依據(jù)和目標(biāo) （該研究的目的、意義、國內(nèi)外研究現(xiàn)狀及發(fā)展趨勢） 研究目的及意義 金銀花，為 中藥材 和 植物 的統(tǒng)稱。 二、進(jìn)度安排（ 起止時間： 2020 年 10 月 9 日 ～ 2020 年 4 月 22 日 ） 2020 年 10 月～ 2020 年 11 月 搜集資料，確立研究方向，學(xué)習(xí)基本操作 2020 年 11 月～ 2020 年 12 月 完成外文翻譯、撰寫綜述 2020 年 12 月～ 2020 年 1 月 完成 開題報告，準(zhǔn)備試驗用品 2020 年 1 月～ 2020 年 3 月 工藝條件的研究完成實驗 2020 年 3 月～ 2020 年 4 月 撰寫畢業(yè)論 文，準(zhǔn)備 論文答辯 2020 年 4 月 完成畢業(yè)論 文 答辯及修改 20 三、主要參考資料 [1] 王艷，張鐵軍． 微波萃取技術(shù)在中藥有效成分提取中的應(yīng)用 [J]．中草藥， 2020， 36(3)：470473． [2] 涂瑤生，畢曉黎 .微波提取技術(shù)在中藥及天然藥物提取中的應(yīng)用及展望 [J].世界科學(xué)技術(shù) —中醫(yī)藥現(xiàn)代化， 2020， 7(3)： 6569． [3] 江蘇新醫(yī)學(xué) .中藥大辭典 [M].上海：上?？茖W(xué)出版社， 1997． [4] 裴凌鵬，惠伯棣， 金宗鐮， 等 .黃酮類化合物的生理活性及其制備技術(shù)研究進(jìn)展 [J].食品科學(xué)， 2020， 25(2)： 203207． [5] Kim Antioxi dantive flavonoids from the leaf of Morus Alba[J].Arch Pham Res,1999,22(1):81. 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Studies on the constituents of the leaf of Morus Alba[J].Chem Pham Bull,2020,49(2):151. 簽名欄： 學(xué)生： 指導(dǎo)老師： 學(xué)院領(lǐng)導(dǎo) ： 注意： 1．任務(wù)書由指導(dǎo) 老師填寫、院領(lǐng)導(dǎo)審核，學(xué)生、指導(dǎo)老師、院領(lǐng)導(dǎo)均應(yīng)簽字。實驗分別從微波時間、微波功率、乙醇濃度、固液比等因素考察超聲波法對金銀花總黃酮提取的影響，獲得最佳微波提取條件，并與傳統(tǒng)乙醇回流法進(jìn)行比較。 微波輔助提取法與傳統(tǒng)乙醇回流法進(jìn)行效果比較。 配置標(biāo)準(zhǔn)蘆丁作對照品制備標(biāo)準(zhǔn)曲線方法的研究。 18 參考文獻(xiàn) [1] 王艷，張鐵軍．微波萃取技術(shù)在中藥有效成分提取中的應(yīng)用 [J]中草藥， 2020, 36(3):470473． [2] 張英，俞卓裕，吳曉琴．中草藥和天然植物有效 成分提取新技術(shù) — 微波協(xié)助萃取 [J]．中國中藥雜志， 2020, 29(2)： 104106． [3] 陳斌，南慶賢，呂玲．微波萃取葛根總黃酮的工藝研究 [J]．農(nóng)業(yè)工程學(xué)報， 200l, l7(6)： 123125． [4] 戴玉錦，盧明，馮玲．微波法從柚皮中提取黃酮類化合物的工藝研究 [J]．江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué)，2020, (1)： 121123． [5] 張志信，張仕秀，宋關(guān)斌用微波一堿水法提取三七莖葉總黃酮的工藝研究 [J]．藥物生物技術(shù)， 2020, 12(6)： 389391． [6] 李伶，楊俊紅，徐志東用微波提 取山楂中總黃酮的正交實驗研究 [J]．中國藥學(xué)雜志， 2020, 40(2)： l12114． [7] 林敏，吳冬青，范彥康等用微波對提取萬壽菊花中黃酮類化合物的影響 [J]．湖州師范學(xué)院學(xué)報， 2020, 27(2):108111． [8] 孔琪，吳春．菊花黃酮的提取及抗氧化活性研究 [J]．中草藥， 2020, 35(9):10011002． [9] 房方，張廣強，謝新年 .用分光光度法進(jìn)行黃酮類化合物含量測定的研究 [J].河南中醫(yī)藥學(xué)刊 ,2020, 12(1):1719． [10] 丁利君，吳振輝，蔡創(chuàng)海，等 ．金銀花中黃酮類物質(zhì)最佳提取工藝的研究 [J]．食 品科學(xué)，2020, 23(2)： 6266． [11] 胡碧波，吳祖帥，蔡君，等．金銀花中主要黃酮的測定及影響因素考察 [J]．中國中藥雜志，2020, 31(21)： 117119． [12] 揚俊，蔣惠娣，徐娟華．金銀花總黃酮的提取工藝及其含量的動態(tài)變化研究 [J]．中草藥． 2020, 33(11)： 990993． [13] 張睿，徐雅琴，時陽 . 黃酮類化合物提取工藝研究 [J].食品與機械 [J]， 2020, (1)： 2122． [14] 全國中草藥匯編編寫 組 .全國中草藥匯編 [M].人民衛(wèi)生出版社 [J], 2020． [15] 涂瑤生，畢曉黎 .微波提取技術(shù)在中藥及天然藥物提取中的應(yīng)用及展望 [J].世界科學(xué)技術(shù) 中醫(yī)藥現(xiàn)代化， 2020, 7(3)： 6569． [16] 張秀明，茯苓藥理作用研究概況 [J]．中藥材， 2020, 24(6)： 445449． [17]Wang H K,Xia ,Yang ZY,et advances in the discovery and development of flavonoids and their an a1ogues [J]as antitum Ol~and antiHIV agents,Adv ExpMed Biol,1998,439:191225. 19 本科畢業(yè)論文 (設(shè)計 )任務(wù)書 學(xué) 院 生物工程 專 業(yè) 生物工程 姓 名 學(xué) 號 指導(dǎo)老師 職 稱 講 師 合作老師 / 職 稱 / 題 目 微波輔助提取金銀花總黃酮工藝條件的研究 一、課題的內(nèi)容和任務(wù)要求 研究的內(nèi)容 設(shè)計微波提取金銀花總黃酮的最佳工藝條件，制備供試液。該方法提高了黃酮的提取率，減少了有機溶劑用量，縮短了提取時間 。 從兩種方法的對比中可以明顯看出，微波輔助提取較傳統(tǒng)乙醇回流提取法提取量高，且溶劑用量 少，縮短了提取時間，提取成本低。另一方面，微波是一種高頻波，它使提取體系中偶極分子因高速旋轉(zhuǎn)產(chǎn)生高頻率摩擦，從而可在短時間內(nèi)產(chǎn)生極大的熱量，使整個樣品同時被加熱，從而大大加快了多糖的溶解 。 本方法與其他方法比較 微波輔助提取法與傳統(tǒng)水提法相比，提取時間縮短至二十四分之一，所得凈多糖產(chǎn)率也有一定的提高。其中傳統(tǒng)乙醇回流提取法的最佳工藝條件為液固比 50:1，提取時間 5h；金銀花總黃酮微波輔助提取工藝，最佳提取功率為 406W，最佳提取時間為 12min，最佳液固比 25:1，最佳乙醇濃度為 70%。本實驗中，用傳統(tǒng)醇回流法需要大于 4 h的提取過程，而微波萃取法只需 30 min即可完成，提取率較傳統(tǒng)醇提取法高，節(jié)時，節(jié)能，其優(yōu)越性顯而易見。 010 20 40 60 80 固液 比(mL/g)總黃酮得率(%) 17 5. 討論 微波萃取法的原理是微波直接與被分離物作用，微波的激活作用導(dǎo)致樣品基體內(nèi)不同成分的反應(yīng)差異使被萃取物與基體快速分離，通過偶極子旋轉(zhuǎn)和離子傳導(dǎo)兩種方式同時加熱，加劇了體系中分子的碰撞頻率，使黃酮分子容易從藥材內(nèi)部擴散到溶劑中，大大縮短加熱的時間，并達(dá)到較高產(chǎn)率 。 微波輔助提取金銀花黃酮類化合物提取率能達(dá)到 %，要高于乙醇回流法提取的 %。 微波輔助與傳統(tǒng)提法最佳工藝對比 比較此兩種方法在最佳條件下的總黃酮得率，結(jié)果見表 411。 由圖 43 和圖 46明 顯可看出兩種提取方法總黃酮提取量隨時間的延長而提高，但傳統(tǒng)乙醇回流法提取總黃酮的所需時間比微波輔助提取法提取長得多，且金銀花總黃酮提取量比較低，而微波輔助提取的總黃酮較乙醇回流法高。當(dāng)液固比超過 50 的時候，金銀花總黃酮的含量隨固液比的增加而減少。