溶菌酶的作用機(jī)制(2)-文庫吧資料
2025-01-14 02:15本頁面
【正文】 r%u( y+B2E6H9LcOfRjU mXp!samp。wz1D4G7JbMePhTkWoZr$u( x+A2E5H9KcNfRiUl Xpsamp。w)z1C4F7JaMdPhSkWnZq$u*x A2D5H 8KbNfQiTlXos%v( y0B3E6I9LdOgRjVmYp!tamp。v)z0C3F7IaM dPgSkVnYq$t*xA1D 5G8JbNeQhTl Wor%u( y+B2E6H9LcOfRj U mXp!samp。wz1C4G7JaMePhTkWnZr$u*x+ A2E5H 8KcNfQiUlXps%v) y0B3F6IaLdOgSjVmYq!t*wz1D4G7JbMeQhTkWoZr$u( x+A2E5H9KcNfRiUlXpsamp。w)z0C4F7JaMdPhSkVnZq$u*xA2D 5G8KbNeQiTl Xor%v( y+B3E6I9LcOgRjU mYp!tamp。v) y0C3F7IaLdPgSjVnYq$t*wA1D4G8JbNeQhTlWoZr%u( y+ B2E6H 9KcOfRiU mXp!samp。w)z1C4G7JaM ePhSkWnZr$u*x+A2D5H8KbNfQi UlXos%v( y0B3F6I9LdOgRjVmYq!tamp。v)z0C4F7IaMdPgSkVnZq$t*x A1D5G8KbNeQiTl Wor%v( y+B3E6H9LcOgRjU mYp!samp。w z1D4G7JbMePhTkWoZr$u( x+A2E5H9KcNfRiUlXps%v) y0C3F6IaLdOgSjVnYq!t*wz1D4G8JbMeQhTkWoZr%u( x+B2E5H9KcOfRiU mXpsamp。w)z1C 4F7JaMdPhSkWnZq$u*xA2D5H8KbNfQi TlXos%v( y0B3E6I9LdOgRjVmYp!tamp。 謝謝！ Wor%u(y+B2E6H9LcOfRjU mXp!samp。 所有實(shí)驗(yàn)結(jié)果都支持這個(gè)晶體學(xué)假設(shè) 。像先前研究的預(yù)期結(jié)果一樣，這些突變蛋白質(zhì)只有很少甚至沒有催化活性。 最早把定點(diǎn)誘變使用到溶菌酶研究的在 1989年被發(fā)表。通過定點(diǎn)誘變技術(shù)的使用， DNA的核苷酸序列可以特殊地變更以至多肽的氨基酸可以被任何調(diào)查者選擇的氨基酸代替。 因此可以說 ，在結(jié)合底物時(shí) ， 酶迫使底物采取了接近于過渡態(tài)的構(gòu)象 。 上述的催化機(jī)制中 ， 關(guān)鍵要素為： （ 1） 廣義的酸催化 ， Glu35以酸的形式提供質(zhì)子 ， 他的糖苷鍵氧原子的距離為 ， 正式合適的作用距離 。 （ 3） 正碳離子中間產(chǎn)物進(jìn)一步與來自溶劑的 OH發(fā)生反應(yīng) 。 H+的轉(zhuǎn)移使 D環(huán)的 C1鍵與糖苷鍵 O原子間的鍵斷開 ， 并形成正 C離子過渡態(tài)中間產(chǎn)物 。 側(cè)鏈基團(tuán)的氧原子與這個(gè)糖苷鍵的距離大約是 。 這樣 ，在 pH5下 ， 這是溶菌酶水解幾丁質(zhì)的最適 pH， 即溶菌酶活性最大 。 Asp52是在一個(gè)明顯的極性環(huán)境中 ， 在那里它在一個(gè)復(fù)雜的氫鍵網(wǎng)絡(luò)中起著氫鍵受體的作用 。Asp52位于糖苷鍵的一側(cè) ， 而 Glu35在另一側(cè) 。 進(jìn)一步的問題是酶的催化作用，究竟鍵是在糖苷鍵原子的哪一側(cè)被裂解的？ 回答這個(gè)問題可以在 H218O溶液中酶促水解底物 （ NAG） 6， 發(fā)現(xiàn)只有 D糖 C1上含有 18O， 而 E糖的 C4羥基只含普通的 O，由此可知這個(gè)鍵斷裂在 D糖基的 C1和 E殘基的糖苷鍵的 O之間 。 酶活性部位剛好能容納一個(gè)六糖分子 ， A、 B、 C、 D、 E、F表示 6個(gè)糖殘基的位置 ， 只是第 4個(gè)糖殘基D環(huán)因空間的原因必須由正常的椅式變形為能量較高的半椅式或 “ 沙發(fā) ” 構(gòu)造 。 從活性部位的幾何大小看出酶的最小底物應(yīng)該是 （ NAG） 6。 細(xì)菌的細(xì)胞壁多糖恰好具有 NAMNAG鍵 ， 所以水解部位只能發(fā)生在 DE之間 。CD也不可能成為裂解的部位 ， 而 NAM不能適合到部位 C中 ， 進(jìn)一步排除了另外一個(gè)裂解部位： EF鍵 。
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