溶菌酶的作用機(jī)制(3)-文庫吧資料
2025-01-14 02:13本頁面
【正文】 eNbJ8G5D 1Aw*t$qYnVkSgPdLaI7F3C0z)vamp。t!pYmVjRgOcL9I6E3B0y( v%roXl TiQfNbK8G5D 2A x*u$qZnWkShPdMaJ7F4C1z) wamp。spXmUiRfNcK9H5E2B+ x(u%rZoWkThQeMbJ8G4D1z w*t!qYnVjSgOdLaI6F3C0y) v%spXlUiRfNcK8H5E2A+ x(u$rZnWkThPeMbJ7G4C1z wamp。s!pXmUj RfOcK9H6E2B+ y(u%rZoWl ThQeN bJ8G4D1A w*t$qYnVjSgPdLaI7F3C0y) vamp。t!pYmUjRgOcL9I6E3B+ y( v%roXlTiQeNbK8G5D2A x*u$qZnVkShPdMaJ7F4C0z) wamp。t!pYmVjRgOdL9I6E3B0y( v%soXl UiQfNbK8H5D 2A+ x*u$qZnWkShPeMaJ7F4C v%spXlUi QfNcK8H5E2A+ x*u$r ZnWkThPeM aJ7G4C1z wamp。s!pXmU iRfOcK9H6E2B+ x(u%rZoWlThQeMbJ8G4D1A w*t!qYnVjSgPdLaI6F3C0y) vamp。s!pYmUjRgOcL9H 6E3B+ y( v%roWlTi QeNbK8G5D2A x*t$qZnVkShPdMaI7F4C0z) wamp。t!qYmVjSgOdL9I6F3B0y) v%soXlUi QfNcK8H5D2A+ x*u$r ZnWkShPeMaJ7G4C 1z) wamp。s!pXmUj RfOcK9H6E2B+ y(u%rZoWl ThQeN bJ8G4D1A w*t$qYnVkSgPdLaI7F3C0z) vamp。 謝謝！ !pYmVjRgOcL9I6E3B0y(v%roXlTiQfNbK8G5D2A x*u$qZnVkShPdMaJ7F4C0z) wamp。 所有實(shí)驗(yàn)結(jié)果都支持這個(gè)晶體學(xué)假設(shè) 。像先前研究的預(yù)期結(jié)果一樣，這些突變蛋白質(zhì)只有很少甚至沒有催化活性。 最早把定點(diǎn)誘變使用到溶菌酶研究的在 1989年被發(fā)表。通過定點(diǎn)誘變技術(shù)的使用， DNA的核苷酸序列可以特殊地變更以至多肽的氨基酸可以被任何調(diào)查者選擇的氨基酸代替。 因此可以說 ，在結(jié)合底物時(shí) ， 酶迫使底物采取了接近于過渡態(tài)的構(gòu)象 。 上述的催化機(jī)制中 ， 關(guān)鍵要素為： （ 1） 廣義的酸催化 ， Glu35以酸的形式提供質(zhì)子 ， 他的糖苷鍵氧原子的距離為 ， 正式合適的作用距離 。 （ 3） 正碳離子中間產(chǎn)物進(jìn)一步與來自溶劑的 OH發(fā)生反應(yīng) 。 H+的轉(zhuǎn)移使 D環(huán)的 C1鍵與糖苷鍵 O原子間的鍵斷開 ， 并形成正 C離子過渡態(tài)中間產(chǎn)物 。 側(cè)鏈基團(tuán)的氧原子與這個(gè)糖苷鍵的距離大約是 。 這樣 ，在 pH5下 ， 這是溶菌酶水解幾丁質(zhì)的最適 pH， 即溶菌酶活性最大 。 Asp52是在一個(gè)明顯的極性環(huán)境中 ， 在那里它在一個(gè)復(fù)雜的氫鍵網(wǎng)絡(luò)中起著氫鍵受體的作用 。Asp52位于糖苷鍵的一側(cè) ， 而 Glu35在另一側(cè) 。 進(jìn)一步的問題是酶的催化作用，究竟鍵是在糖苷鍵原子的哪一側(cè)被裂解的？ 回答這個(gè)問題可以在 H218O溶液中酶促水解底物 （ NAG） 6， 發(fā)現(xiàn)只有 D糖 C1上含有 18O， 而 E糖的 C4羥基只含普通的 O，由此可知這個(gè)鍵斷裂在 D糖基的 C1和 E殘基的糖苷鍵的 O之間 。 酶活性部位剛好能容納一個(gè)六糖分子 ， A、 B、 C、 D、 E、F表示 6個(gè)糖殘基的位置 ， 只是第 4個(gè)糖殘基D環(huán)因空間的原因必須由正常的椅式變形為能量較高的半椅式或 “ 沙發(fā) ” 構(gòu)造 。 從活性部位的幾何大小看出酶的最小底物應(yīng)該是 （ NAG） 6。 細(xì)菌的細(xì)胞壁多糖恰好具有 NAMNAG鍵 ， 所以水解部位只能發(fā)生在 DE之間 。CD也不可能成為裂解的部位 ， 而 NAM不能適合到部位 C中 ， 進(jìn)一步排除了另外一個(gè)裂解部位： EF鍵 。
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