飼料及其原料中尿素檢測方法的研究進(jìn)展-文庫吧資料
2025-01-13 07:18本頁面
【正文】 全統(tǒng)一，尤其是大部分方法的試劑組成不一致，造 成了反應(yīng)產(chǎn)物的多樣性，主要表現(xiàn)在各方法的最適測定波長均不相同，而且目前也少見關(guān)于不同試劑組成方法間測定結(jié)果相關(guān)性的研究，所以各報道間均無較好的可比性。此反應(yīng)產(chǎn)物顏色深淺程度與樣品溶液中尿素含量呈正比，因此可以通過測定特定波長下反應(yīng)溶液吸光值來定量溶液中的尿素。該反應(yīng)初始為尿素與二乙酰反應(yīng)，但由于二乙酰溶液不穩(wěn)定，所以目前多使用二 乙酰肟作為反應(yīng)基礎(chǔ)試劑。根據(jù)上述試驗結(jié)果分析，在目前該方法已經(jīng)可以定性半定量測定飼料中尿素的情況下，下一步可以研究將該方法與 DMAB 法中的樣品前處理過程相結(jié)合，以定量樣品中的尿素。鄧福貴和李斌 (1997)報道，以甲酚紅為指示劑酶法測定血清尿素，其反應(yīng)溶液的吸收峰為 572 nm。孟丹勝 (1994)詳細(xì)介紹了應(yīng)用甲酚紅檢測飼料中尿素含量的過程及可能遇到的問題和解決方 法，其中主要包括試劑純度和有效性的檢驗，測定結(jié)果假陽性和假陰性的排除。孫新來和趙慧 (1990)報道，通過 30 多次實驗分析，表明將新鮮黃豆中提取的脲酶應(yīng)用于其改進(jìn)的甲酚紅顯色法中，反應(yīng)在 30 s 開始顯色、尿素檢出率達(dá) 100%、靈敏度達(dá) %，與購買商品化脲酶相比具有明顯的經(jīng)濟(jì)優(yōu)勢。 應(yīng)用甲酚紅法測定飼料中尿素的主要原理是尿素在脲酶水解作用下產(chǎn)氨而使溶液 pH 升高，引起甲酚紅溶液顏色發(fā)生相應(yīng)變化，從而根據(jù)顏色是否發(fā)生改變及深淺來定性半定量溶液中尿素的有無和含量。試劑空白吸收程度隨測定波長的增大而下降，同樣波長下樣品吸光值的變化則不大，所以推薦可以使用 440 nm 作為測定波長，這樣就可以盡量減少由于試劑添加量變化而引起的誤差，從武金鳳等 (2022)報告中的反應(yīng)溶液掃描圖譜也可以看到波長為 420~440 nm 時，吸光值無顯著性變 化，因此，本方法測定飼料樣品的進(jìn)一步實驗中可以探討在這兩個波長下試劑吸收有無顯著性差異，以確定反應(yīng)溶液的最適測定波長。 DMAB 法雖然較為常用，但由于其試劑本身在 420 436 nm 具有較高的吸收值，所以操作過程中要嚴(yán)格控制顯色劑的加入量，一般推薦添加試劑 5 mL。武金鳳等 (2022)在實驗中吸取含氮量為 ~10 mg 的濾液 5 10 mL 加入 25 mL 反應(yīng)管中，再加 5 mL DMAB 溶液，用水定容至刻度后混勻放置 20 min,實驗結(jié)果表明，反應(yīng)溶液在 25℃水浴和常溫條件下放置 20 min，測定結(jié)果無顯著性差異。翟毓秀 (1993)報道，樣品經(jīng)過前處理，尿素含量在
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