【正文】 應(yīng)轉(zhuǎn)動(dòng)拖拉，細(xì)胞扣搖散后，如肉眼未見凝集，應(yīng)將反應(yīng)物涂于玻片上，在在顯微鏡下觀察確認(rèn)陰性。 （ 2）陽性對(duì)照管不凝集和（或）陰性對(duì)照管出現(xiàn)凝集，實(shí)驗(yàn)失敗，分析原因重做試驗(yàn)。 （ 3）陽性對(duì)照管不凝集和（或）陰性對(duì)照管凝集，結(jié)果不 可信不能發(fā)出報(bào)告，分析原因后重做試驗(yàn)。 紅細(xì)胞血型檢測 41 第四節(jié)抗球蛋白實(shí)驗(yàn)技術(shù) 抗球蛋白試驗(yàn)原理圖 紅細(xì)胞血型檢測 42 第四節(jié)抗球蛋白實(shí)驗(yàn)技術(shù) 二、分類及應(yīng)用 抗球蛋白試驗(yàn) 直接 間接 致敏紅細(xì)胞的不完全抗體、補(bǔ)體 血清中的不完全抗體 應(yīng)用 HDN的診斷、 AIHADE的診斷、藥物誘發(fā)型溶血病的診斷 交叉配血及血型鑒定、器官移植、等 紅細(xì)胞血型檢測 43 第四節(jié)抗球蛋白實(shí)驗(yàn)技術(shù) 抗球蛋白配血方法 患者 獻(xiàn)血者 主側(cè) 次側(cè) 37 ℃ ? 37℃ 水浴 30分鐘 三洗 紅細(xì)胞血型檢測 44 第四節(jié)抗球蛋白實(shí)驗(yàn)技術(shù) 抗球蛋白方法配血方法 加抗球蛋白 離心 看結(jié)果 陽性 陰性 紅細(xì)胞血型檢測 45 第四節(jié)抗球蛋白實(shí)驗(yàn)技術(shù) 三、 結(jié)果的判斷 直接抗球蛋白試驗(yàn)： （ 1）陽性對(duì)照管凝集，陰性對(duì)照管不凝集，被檢管凝集， 判定為陽性。 紅細(xì)胞血型檢測 40 第四節(jié)抗球蛋白實(shí)驗(yàn)技術(shù) 一、基本原理 ? 抗球蛋白試驗(yàn)（ Coombs實(shí)驗(yàn)）主要用于檢測血清中的不完全抗體如： IgG、 IgA和（或）補(bǔ)體如：C C4。 常用對(duì)的酶：菠蘿酶，無花果酶，木瓜酶 紅細(xì)胞血型檢測 37 第三節(jié) 酶處理實(shí)驗(yàn)技術(shù) ? 酶介質(zhì)配血方法 患者 獻(xiàn)血者 主側(cè) 次側(cè) 主次側(cè) 均加酶 紅細(xì)胞血型檢測 38 第三節(jié) 酶處理實(shí)驗(yàn)技術(shù) 37℃ 水浴 30分鐘 ? 37 ℃ 離心 看結(jié)果 陽性 陰性 ? 紅細(xì)胞血型檢測 39 第三節(jié) 酶處理實(shí)驗(yàn)技術(shù) 結(jié)果的判斷 （ 1）陽性對(duì)照管凝集，陰性對(duì)照管凝集，被檢管凝集為陽 性，不出現(xiàn)凝集判定為陰性。 紅細(xì)胞血型檢測 34 第二節(jié) 鹽水介質(zhì)實(shí)驗(yàn)技術(shù) ? 鹽水介質(zhì)配血方法 患者 獻(xiàn)血者 主側(cè) 次側(cè) 離心 看結(jié)果 陽性 陰性 紅細(xì)胞血型檢測 35 第二節(jié) 鹽水介質(zhì)實(shí)驗(yàn)技術(shù) 紅細(xì)胞血型檢測 36 第三節(jié) 酶處理實(shí)驗(yàn)技術(shù) ? 原理：在酶的作用下切斷帶有負(fù)電荷的羧基基團(tuán)的唾液酸，降低 Zeta電位，縮短紅細(xì)胞之間的距離。 特點(diǎn)：簡單、快速、易學(xué)，結(jié)果準(zhǔn)確、可靠。 為定型試驗(yàn)方法，也可于半定量試驗(yàn)。 （三）影響因素 ① 離子干擾 ②溫度 ③操作不規(guī)范 ④ 離心不當(dāng) 紅細(xì)胞血型檢測 33 第二節(jié) 鹽水介質(zhì)實(shí)驗(yàn)技術(shù) ? 鹽水介質(zhì)試驗(yàn)技術(shù)常用于血型鑒定、血清中 IgM類抗體的篩查和鑒定、鹽水介質(zhì)的交叉配血等。 ，主側(cè)交叉配合試驗(yàn)陽性 （ 1）復(fù)查血型 （ 2）主側(cè)凝集類 B抗原 （ 3）血清中可能含有一種 ABO抗體，必要時(shí)可以做 ABO亞型鑒定 紅細(xì)胞血型檢測 32 四、交叉配血試驗(yàn) ，主側(cè)交叉配合試驗(yàn)陽性 （ 1）自身對(duì)照試驗(yàn)陰性：受血者體內(nèi)有同種不規(guī)則抗體。 盡可能確保對(duì)人和一個(gè)病人來說，輸了供血者的血不會(huì)引起有害反應(yīng)，并且使紅細(xì)胞在輸注后能保持最長的存活時(shí)間。 凝集 不凝集 紅細(xì)胞血型檢測 29 四、交叉配血試驗(yàn) ? 交叉配血試驗(yàn)的內(nèi)容 患者 獻(xiàn)血者 主側(cè) 次側(cè) 主側(cè)配血 用患者血清與供 者紅細(xì)胞進(jìn)行試驗(yàn) 次測配血 供血者血清與患 者紅細(xì)胞進(jìn)行試驗(yàn) 紅細(xì)胞血型檢測 30 四、交叉配血試驗(yàn) ? 交叉配血的目的 交叉配血試驗(yàn)是輸血前必要的步驟，主要是檢查受血者血清中有無能破壞供血者紅細(xì)胞的抗體。 紅細(xì)胞血型檢測 28 四、交叉配血試驗(yàn) （一）要求和內(nèi)容 交叉配血的要求： 主側(cè)配血要求： 絕對(duì)不可以有凝集或溶血現(xiàn)象。 ?在選擇不規(guī)則抗體篩查或鑒定細(xì)胞時(shí)，應(yīng)符合本地 區(qū)不規(guī)則抗體分布的特點(diǎn)。 ，結(jié)果不明確 （ 1）分析結(jié)果： ① 是否符合劑量效應(yīng) ② 譜細(xì)胞是否新鮮 （ 2）改變試驗(yàn)方法： ①使用高靈敏度的方法重復(fù)試驗(yàn) ②添加試劑后重復(fù)實(shí)驗(yàn) ③帶抗體增強(qiáng)后重復(fù)試驗(yàn) 紅細(xì)胞血型檢測 24 三、不規(guī)則抗體篩選和鑒定 ，自身細(xì)胞陰性 （ 1）強(qiáng)度不一致：可能存在混合抗體 （ 2）強(qiáng)度一致： ?抗體可能為專于 O細(xì)胞反應(yīng)的抗體 （如： 抗 I、抗 H、抗 HI） ?可能針對(duì)高頻抗原的抗體 ?可能針對(duì)譜細(xì)胞的抗體 ，自身細(xì)胞陽性 （ 1）存在自身抗體 （ 2）同種和自身抗體同時(shí)存在 （ 3）冷凝集：在冷凝集素的作用下存在凝集紅細(xì)胞 紅細(xì)胞血型檢測 25 三、不規(guī)則抗體篩選和鑒定 （ 4）假凝劑：在干擾因子的作用下一可造成紅細(xì)胞假凝集 （ 5）酶引起的多凝集 （ 6）補(bǔ)體的影響 ，自身細(xì)胞陽性 可能是自身抗體或 C?陽性 紅細(xì)胞血型檢測 26 三、不規(guī)則抗體篩選和鑒定 四、抗體篩查和鑒定的影響因素 ?篩查細(xì)胞不包括低頻率抗原，不能檢出低頻率抗原。 (2)普紅細(xì)胞 ：使用試劑細(xì)胞中的譜細(xì)胞，應(yīng)用各種抗體檢查技術(shù)，檢測患者的血清，確定其抗體的特異性。 一旦抗體被檢出，應(yīng)作抗體鑒定試驗(yàn)，以確定其特異性。目前臨床是已不用。 4. 酶法：能暴露隱蔽抗原，增強(qiáng)一些稀有抗原檢測。 缺點(diǎn)是：靈敏度低 2. 聚凝胺法 優(yōu)點(diǎn)：與水鹽介質(zhì)法比靈敏度有所提高。 紅細(xì)胞血型檢測 21 三、不規(guī)則抗體篩選和鑒定 二、不規(guī)則抗體的篩查方法 抗體