發(fā)酵工程制藥二ppt課件-文庫吧資料
2025-01-11 08:40本頁面
【正文】 的產量 增加參與生物合成中的限速階段基因的拷貝數 反饋抑制 (feedback inhibition)是生物合成限速反應的實質，一般是終產物對合成反應某個環(huán)節(jié)發(fā)揮作用的酶活力的抑制，這個環(huán)節(jié)就是“限速瓶頸”，被抑制的酶就是“限速酶”。 ?化學結構類似的抗生素，其生物合成途徑和每個合成環(huán)節(jié)的酶也相似，編碼酶的基因之間存在同源性； ?用放線紫紅素的 actⅡ 和 actⅣ 做探針，與 24種產 氨基糖苷類抗生素的鏈霉菌 DNA雜交，可產生特異性雜交帶； ?用 actⅡ 為探針，成功地克隆了榴菌素 (granaticin)和殺螨菌素(milbemycin)的生物合成基因簇； ?利用紅霉素的 eryA1基因克隆了苦霉素 (picromycin)生物合成相關基因； ?利用碳霉素 (carbomycin)的 car E 基因克隆了麥迪霉素的 4羥基苯?；D移酶基因； 克隆抗生素生物合成基因的策略和方法 ⑺ 同源基因雜交法 以已克隆的抗生素生物合成基因片段順序為探針，探察同源性基因。 ? 氯霉素類 ：含二氯乙酰胺，包括氯霉素、甲砜霉素等。 ? 氨基糖甙類 ：由氨基己糖的衍生物組成，包括鏈霉素、慶大霉素、卡那霉素、新霉素、小諾霉素等。 克隆抗生素生物合成基因的策略和方法 ⑺ 同源基因雜交法 以已克隆的抗生素生物合成基因片段順序為探針，探察同源性基因。 ?Eli Lilly公司首先根據催化泰樂星生物合成的最后一個步驟的 大環(huán)菌素 O甲基轉移酶 (Macrocin0methyltransferase)氨基端 35個氨基酸順序，按照密碼子偏愛原則合成了 44 bp的寡核苷酸探針； ?用 ?Charon4構建弗氏鏈霉菌的 gDNA文庫，與探針逐一雜交， 10個重疊克隆共涉及 27 kb DNA； ?與用粘粒 pKC462a構建的 弗氏鏈霉菌的 gDNA文庫雜交，有 4個重疊克隆共包含 58 kb片段，其中包括前面的 27 kb片段； ?進一步分析表明， 58 kb DNA中編碼 Tylosin生物合成全部基因。 克隆抗生素生物合成基因的策略和方法 ⑹ 寡核苷酸探針法 鏈霉菌編碼抗生素生物合成基因 ORF順序的密碼子的第 3位堿基多達 90％為 G或 C，是探針設計的根據。 克隆抗生素生物合成基因的策略和方法 ⑸ 抗生素抗性基因克隆法 抗性基因常常是抗生素生物合成基因簇的成員，可以做為一個標記基因用于克隆基因簇。 在吸水鏈霉菌 (S． Hydroscopicus)中，與雙丙氨磷 (bialaphos)合成基因緊密連鎖的抗性基因 bar 所編碼的產物與 bialaphos生物合成途徑第 10步所需的乙酸基轉移酶相同， bar 可能是bialaphos生物合成途徑的一部分。 克隆抗生素生物合成基因的策略和方法 ⑸ 抗生素抗性基因克隆法 抗性基因常常是抗生素生物合成基因簇的成員，可以做為一個標記基因用于克隆基因簇。 ? 頭霉素 C (Cephamycin C )是牲畜鏈霉菌表達的 ?內酰胺類 抗生素； ? Panlabs公司 將牲畜鏈霉菌總 DNA的 20～ 40 kb的Bgl Ⅱ 部分消化片段克隆到質粒 pIJ943中，轉化變青鏈霉菌 1326； ? 以不產黑色素、有硫鏈絲菌素 (Thiostrepton)抗性(ts r 為 pIJ943的選擇標記 )確定轉化子； ⑷ 直接克隆法 抗生素生物合成基因成簇存在，總長度～30 kb，成套克隆基因簇是可能的。 ?突變分析結果： SCP1上至少有 17 kb DNA參與次甲霉素生物合成，其中兩個轉錄單位分別至少有兩個次甲霉素生物合成基因簇成員； 【 突變克隆法原理圖解 】 1 2 3 4 5 6 1 2 3 4 5 6 片段克隆到噬菌體或整合性質粒中，以同源性重組方式插入相應
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