血清γ球蛋白的分離純化與鑒定-文庫吧資料
2025-01-10 17:08本頁面
【正文】 圖 DEAE－纖維素離子交換層析純化 γ－球蛋白 血清 α、 β、 γ－球蛋白 、 清蛋白的等電點(diǎn)為： 清蛋白 pI=， α2球蛋白 pI=， β球蛋白 pI=， γ球蛋白 pI= 本實(shí)驗(yàn)采用 mol/l NH4Ac緩沖液進(jìn)行洗脫 。 DEAE （二乙基氨基乙基） －纖維素 含有可離子化的堿基，可與氫離子結(jié)合，成為帶正電荷的陰離子交換劑。如果其帶負(fù)電，則能結(jié)合陽離子，成為陽離子交換劑；如果其帶正電，則能結(jié)合陰離子，稱為 陰離子交換劑 。 三、 DEAE－纖維素離子交換層析 【 實(shí)驗(yàn)?zāi)康?】 1. 通過使用 DEAE－纖維素離子交換層析法 ， 進(jìn)一步 純化 γ球蛋白脫鹽液 ， 得到較純的 γ球蛋白溶液 2. 學(xué)習(xí)了解 離子交換層析方法的基本原理和應(yīng)用范圍 離子交換層析的基本原理 離子交換層析是一種常用的、通過使用各種類型的離子交換劑達(dá)到分離純化目的的層析方法。 2. 加樣分離時(shí)，滴速越慢，分離效果越好。 保存： 檢測(cè)洗脫液的蛋白質(zhì)量，保存含量高的進(jìn)一步純化 不斷加洗脫液，使銨全部流出，為下次實(shí)驗(yàn)做準(zhǔn)備。 ▲ 加樣與洗脫 ▲ 凝膠的再生 加樣： 用滴管將鹽析后樣品加入柱床面，打開出口使樣品 溶液滲入凝膠。 注意：★ 床面上要保持少許水， 防止膠床露出液面 。 加入攪拌均勻的 SephadexG50懸液，調(diào)節(jié)流速 10滴/min，使凝膠均勻沉降，不斷補(bǔ)充，直至 15cm。 葡聚糖凝膠（ Sephadex) 交聯(lián)度 網(wǎng)狀結(jié)構(gòu) 網(wǎng)孔徑 吸水量 機(jī)械強(qiáng)度 耐壓力 大 致密 小 小 大 高 小 疏松 大 大 小 低 應(yīng)用最多的凝膠！ ▲ Sephadex G50的準(zhǔn)備 ▲ 裝柱（ 15~20cm） 操作步驟 ： 層析柱保持垂直。 分子量大的物質(zhì) 則被排阻在交聯(lián)網(wǎng)狀物之外，沿著凝膠顆粒間的孔隙隨溶劑流動(dòng)，其流程短，移動(dòng)速度快，先流出層析床。它利用一些多孔的細(xì)珠支持物，這些小孔大小不一，可以允許半徑在一定范圍內(nèi)的分子透過它。 凝膠層析法原理 凝膠層析法又
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