【正文】 可做革蘭氏染色檢查和氧化酶試驗，應(yīng)為氧化酶陰性的革蘭氏陰性桿菌 。除宋內(nèi)氏志賀氏菌、鮑氏志賀氏菌 13 型的鳥氨酸陽性 。 凡是三糖鐵瓊脂中斜面產(chǎn)堿、底層產(chǎn)酸（發(fā)酵葡萄糖，不發(fā)酵乳糖，蔗糖）、不產(chǎn)氣（福氏志賀氏菌 6 型可產(chǎn)生少量氣體）、不產(chǎn)硫化氫、半固體管中無動力的菌株，挑取其 中已培養(yǎng)的營養(yǎng)瓊脂斜面上生長的菌苔，進(jìn)行生化試驗和血清學(xué)分型。志賀氏菌在不同選擇性瓊脂平板上的菌落特征見表 1。宋內(nèi)氏志賀氏菌的單個菌落直徑大于其他志賀氏菌。１℃，厭氧培養(yǎng) 16 h～ 20 h。 操作步驟 增菌 以無菌操作取檢樣 25 g（ mL），加入裝有滅菌 225 mL 志賀氏菌增菌肉湯的均質(zhì)杯，用旋轉(zhuǎn)刀片式均質(zhì)器以 8 000 r/min～ 10 000 r/min 均質(zhì)；或加入裝有 225 mL志賀氏菌增菌肉湯的均質(zhì)袋中，用拍擊式均質(zhì)器連續(xù)均質(zhì) 1 min～ 2 min，液體樣品振蕩混勻即可。 志賀氏菌屬診斷血清。 粘液酸鹽培養(yǎng)基。 糖發(fā)酵管。 3 β 半乳糖苷酶培養(yǎng)基。 葡萄糖銨培養(yǎng)基。 營養(yǎng)瓊脂斜面。 志賀氏菌顯色培養(yǎng)基。 麥康凱（ MAC）瓊脂。； g） 均質(zhì)器； h） 振蕩器； i） 無菌吸管： 1 mL（具 mL 刻度）、 10 mL（具 mL 刻度）或微量移液器及吸頭； j） 無菌均質(zhì)杯或無菌均質(zhì)袋：容量 500 mL； k） 無菌培養(yǎng)皿：直徑 90 mm； l） pH 計或 pH 比色管或精密 pH 試紙； m） 全自動微生物生化鑒定系統(tǒng)。 ℃； e） 電子天平：感量 g； f） 顯微鏡： 10179。 2 設(shè)備和材料 除微生物實驗室常規(guī)滅菌及培養(yǎng)設(shè)備外，其他 設(shè)備和材料如下： a） 恒溫培養(yǎng)箱： 36 ℃177。 志賀氏菌檢驗 1 范圍 本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了食品中志賀氏菌 (Shigella) 的檢驗方法。 菌落數(shù)大于或等 于 100 時，前 3 位數(shù)字采用 四舍五入 原則修約后，取前 2 位數(shù)字，后面用 0 代替位數(shù)來表示結(jié)果；也可用 10 的指數(shù)形式來表示，此時也按 四舍五入 原則修約，采用兩位有效數(shù)字。 若所有稀釋度平板均無菌落生長，則以小于 1 乘以最低稀釋倍數(shù)計算；如為原液，則以小于 1 計數(shù)。 若所有平板上菌落數(shù)均大于 150 CFU，則對稀釋度最高的平板進(jìn)行計數(shù)，其他平板可記錄為多 不可計，結(jié)果按平均菌落數(shù)乘以最高稀釋倍數(shù)計算。菌落數(shù)應(yīng)采用兩個平板的平均數(shù)。 選取菌落數(shù)在 10 CFU～ 150 CFU 的平板，根據(jù)菌落形態(tài)分別計數(shù)霉菌和酵母數(shù)。 菌落計數(shù) 肉眼觀察，必要時可用放大鏡，記錄各稀釋倍數(shù)和相應(yīng)的霉菌和酵母數(shù)。 培養(yǎng) 待瓊脂凝固后，將平板倒置， 28℃177。 及時將 15 mL～ 20 mL 冷卻至 46℃ 的馬鈴薯 葡萄糖 瓊脂或孟加拉紅培養(yǎng)基 (可放置于 46℃177。 根據(jù)對樣品污染狀況的估計，選擇 2 個～ 3 個適宜稀釋度的樣品勻液（液體樣品可包括原液）， 在進(jìn)行 10 倍遞增稀釋的同時，每個稀釋度分別吸取 1 mL 樣品勻液于 2 個無菌平皿內(nèi)。 按 操作程序，制備 10 倍系列稀釋樣品勻液。 液體樣品：以無菌吸管吸取 25 mL 樣品至盛有 225 mL 無菌蒸餾水的錐形瓶（可在瓶內(nèi)預(yù)置適當(dāng)數(shù)量的無菌玻璃珠）中，充分混勻，制成 1:10 的樣品勻液。 3 培養(yǎng)基和試劑 馬鈴薯 葡萄糖 瓊脂培養(yǎng)基 孟加拉紅培養(yǎng)基 4 操作步驟 樣品的稀釋 固體和半固體樣品：稱取 25 g 樣品至盛有 225 mL 滅 菌蒸餾水的錐形瓶中，充分振搖，即為 1:10 稀釋液。75 mm 。 無菌平皿：直徑 90 mm。 無菌廣口瓶： 500 mL。 電子天平：感量 g。 ～ 100179。 恒溫振蕩器。1℃ 。 2 設(shè)備和材料 除微生物實驗室常規(guī)滅菌及培養(yǎng)設(shè)備外，其他設(shè)備和材料如下： 冰箱： 2℃ ～ 5℃ 。 霉菌計數(shù) 1 范圍 本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了食品中霉菌和酵母菌（ moulds and yeasts）的計數(shù)方法。 178。 本法采用了 FAPAS 餅干質(zhì)控樣 ， 其基質(zhì)與被測樣品相 似 ， 質(zhì)控樣的真值包括了 GC － MS 和 LC － MS 等方法 的測定結(jié)果 。 在色譜分析過程中運(yùn)用 梯度洗脫程序快速去除脂溶性干擾物質(zhì)并活化了色譜 柱 ， 從而縮短進(jìn)樣間隔 ， 提升了分析效率 。 本次研究發(fā)現(xiàn) ， 去脂后的樣品或脂肪 含量較少的樣品在 0℃ 14 500 179。 在提取過程中為避免糊化和丙烯酰胺變 性 ， 不宜加熱 ( 溫度不超過 40℃ ) 和超聲提取 ［ 6］， 而且 加熱或超聲波震蕩可產(chǎn)生微小顆粒堵塞固相萃取柱 ( SPE) ， 降低凈化效率 。 6 餅干 552 177。 8 牛奶芒果味餅干 152 177。 8 無 添糖消化餅干 450 177。 10 蔬菜梳打餅干 325 177。 45 小小酥 465 177。 41 油炸薯片 1325 177。 62 番茄味薯片 635 177。 21 燒烤味薯片 545 177。 2． 7 樣品測定 測定了 16 份薯片 ( 條 ) 及餅干類市售食品 ， 每個 樣品平行測定 3 次 ， 丙烯酰胺的平均含量范圍為 93 ～ 1 325 μ g /kg， 其中薯 片 ( 條 ) 的平均含量為 596 μ g /kg， 高于餅干的平均含量 270 μ g /kg(如下） 薯片 ( 條 ) 及餅干中丙烯酰胺的含量 ( x－ 177。 1． 標(biāo)準(zhǔn) 2． 樣品 3． 加標(biāo)樣品 2． 6 質(zhì)控樣測定 對 FAPAS 餅干質(zhì)控樣 ( T3021， 英國 ) ， 經(jīng)平行處 理 5 個樣品的測定結(jié)果為 ( 747． 0 177。檢出限和定量檢出限經(jīng) 3 倍和 10 倍 信噪比計算分別為 10 μ g /kg 和 31 μ g /kg( 圖 如下 ) 2． 5 加標(biāo)回收率和精密度 取高 、 低 2 種濃度的樣品各 5 份 ， 分別加入 1 000 μ g /kg 標(biāo)準(zhǔn)品 ， 經(jīng)計算平均加標(biāo)回收率為 98． 2%， 相對標(biāo)準(zhǔn)偏差 ( RSD) 為 7． 8% ( 圖 如下 ) 。 同時比較了不同洗脫劑 的效果 ， 用甲醇洗脫時色譜峰干擾較多 ， 很難得到滿意 的丙烯酰胺色譜峰 ， 用水洗脫時干擾較少 ， 被測組分峰 可達(dá)到很好的基線分離 ( 圖 如下 ) 。 2． 3 固相萃取條件的選擇 SPE 柱凈化是目前較多采用的前處理方式 ， 一般 需要合并使用多根 SPE 柱 。 實驗中還發(fā)現(xiàn) ， 前一個樣品測試完成后馬上進(jìn)樣 第二個樣品 ， 會使基線升高 ， 干擾峰增多 ， 被測組分不 能分離 ， 主要是由于采用乙腈 ∶ 水 ( v ∶ v， 4 ∶ 96) 等度洗 脫時 ， 干擾組分在 20 ～ 25 min 流出 ( 樣品運(yùn) 行時間為 10 min) ， 正好對后面的樣品測定形成干擾 。 2． 2 流動相及流速的選擇 比較甲醇 ∶ 水 ( v ∶ v， 10 ∶ 90) 、 甲醇 ∶ 水 ( v ∶ v， 5∶ 95) 和乙腈 ∶ 水 ( v ∶ v， 4 ∶ 96) 3 種流動相色譜分離效果 ， 雖 然對標(biāo)準(zhǔn)品的分離效果相似 ， 但對樣品的分離乙腈 ∶ 水 ( v ∶ v， 4 ∶ 96) 的效果更好 ， 干擾少 ， 可以達(dá)到基線分 離 。 SPE 凈化 : Oasis HLB( 200 mg /6 mL) 和 Oasis MCX( 60 mg /3 mL) 柱分 別用 3． 5 mL 甲醇 、 3． 5 mL 水和 2． 0 mL 甲醇 、 2． 0 mL 水活化 ， 取 2． 0 mL 提取液到 HLB 柱 ， 用 0． 5 mL 水沖 洗 ， 用 2． 0 mL 水洗脫 ， 洗脫液全部轉(zhuǎn)移到 MCX 柱 ， 收 集全部流出液 ， 過 0． 45 μ m 濾膜后儲存于 4℃ 冰箱備 用 。 g 離心 10 min， 吸取下層水相 ( 避開上層油層 ) 3． 0 mL 到離心管中 ， 在 0℃ 14 500 179。 進(jìn)樣 體積為 20 μ L。 保留時間為 7． 00 min。 1． 4 色譜條件 流動相為乙腈 ∶ 水 ( v ∶ v， 4 ∶ 96) 。 定型包裝食品必須標(biāo)識清楚 ， 容易 辨識 ， 并在其保質(zhì)期限內(nèi) 。 實驗用水均為超純水 。 純度 ＞ 99． 0%丙烯酰胺標(biāo)準(zhǔn)品購自德國 Dr． Ehrenstorfer 公司 。 250 mm， 5 μ m) 色譜柱和 Phenomenex 保護(hù)柱 。 固相萃取儀 。 美國熱電公司紫外分光光度儀 。 計算： ? ??????? 100m41cVVX 結(jié)果（以脂肪計）為 g/100g。 試樣硫代硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液消耗量 V1： ml。轉(zhuǎn)于 250mL 碘瓶中，加入 飽和碘化鉀溶液，緊密塞好瓶蓋，并輕輕振搖 ，然后在暗處放置 3min。 100%= ： 樣品處理：準(zhǔn)確稱取碾碎均勻試樣 m1= g 置 500ml 具塞錐形瓶中，加100ml 石油醚，放置過夜，過濾后減壓回收溶劑，得到油脂 m2= g 備用；KOH 標(biāo)準(zhǔn)液濃度 C=； 酸價按 GB/—2020 進(jìn)行測定， 準(zhǔn)確稱取所制得油脂 m3= g，置于錐形瓶中，加入 50ml中性乙醚 乙醇混合液，振搖使油溶解，加入酚酞指示液2 滴～ 3 滴，以氫氧化鉀標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液（ ）滴定，至初顯微紅色，且 內(nèi)不褪色為終點。放入 400 mL 的標(biāo)準(zhǔn)模塊，蓋好底箱，打開頂箱蓋子和插板，從頂箱放入填充物，至標(biāo)尺零線，蓋好頂蓋后，反復(fù)顛倒幾次，消除死角空隙，調(diào)整填充物加入量至標(biāo)尺零線，測量時，先把填充物倒置于頂箱，關(guān)閉插板開關(guān)，打開底箱蓋，取出標(biāo)準(zhǔn)模塊，放入待側(cè)餅干，蓋好底蓋，拉開插板使填充物自然落下，在標(biāo)尺上讀出填充物的刻度，即為餅干的實體 體積。 T). c— 氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液的實際濃度，單位為摩爾每升 (mol/L). — 滴定試液時消耗氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積 .單位為毫升 (mL) — 空白試驗消耗氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積 ，單位為毫升 (mL). m— 樣品的質(zhì)量 .單位為克 (g). 允許差 在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨立測定結(jié)果的絕對差值，應(yīng)不超過 176。記錄耗用氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積。靜置 10 min 后再搖 2 10 min，用紗布或濾紙過濾。 100%................(1) 式中： — 稱量瓶和試樣的質(zhì)量（ g） — 稱量瓶和試樣干燥后質(zhì)量（ g） — 稱量瓶質(zhì)量 （ g） 酸度 1 試劑 a)氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液 (0. 1 mo1/L) b)酚酞指示液 (1%)。放入干燥器內(nèi) , 冷卻 ,至前后兩次質(zhì)量差不超過 ,如后一次質(zhì)量超過前一次質(zhì)量 ,以前一次質(zhì)量計算 [如公式 1]。 2）℃烘箱中烘 2h 后取出 ,放入干燥器內(nèi) ,冷卻 后稱重 .然后再放入（ 105177。 （ 4）判定結(jié)果： PH=— 半成品的檢測 水分 以電烘箱 115℃恒重法為標(biāo)準(zhǔn) 方法。s/cm，臨用前煮沸數(shù)分鐘，趕除二氧化碳，冷卻。 （ 3）試劑 用于校準(zhǔn)儀器的標(biāo)準(zhǔn)緩沖溶液，按下表規(guī)定的數(shù)量稱取試劑，溶于 25℃水中，在容量瓶內(nèi)定容至 1000 ml。 磁力攪拌器。 玻璃電極。為 了提高測定的準(zhǔn)確度，校準(zhǔn)儀器時選用的標(biāo)準(zhǔn)緩沖溶液的 pH值與水樣的 pH值接近。許多 pH 計上有溫度補(bǔ)償裝置，以便校正溫度差異，用于常規(guī)水樣監(jiān)測可準(zhǔn)確和再現(xiàn)至 單位。 生產(chǎn)用水的 PH 值檢測 （ 1）方法原理 以玻璃電極為指示電極，飽和甘汞電極為參比電極組成電池。 表 2 微生物指標(biāo) 微 生 物 指 標(biāo) 項 目 指 標(biāo) 項 目 指 標(biāo) 菌落總數(shù) ≤ 3 000 000 致病菌 不得檢出 餅干原料 .半成品及成品的檢測方法 原輔料的檢測 餅干用小麥粉，白砂糖和花生油等原料的檢測報告和合格證由供應(yīng)商提供，無需再做檢測。 2 理化指標(biāo) 理化指標(biāo)應(yīng)符合表 1 的規(guī)定。 儀器設(shè)備清單及相關(guān)計算 （一） 設(shè)備清單 儀器名稱 型號 數(shù)量 恒溫水 浴鍋 HH1 型 2 恒溫培養(yǎng)箱