【正文】 【5】 【參考文獻(xiàn)】【1】蔣培余，細(xì)菌遺傳元件水平轉(zhuǎn)移與抗生素抗性研究進(jìn)展[J]，微生物學(xué)通報(bào)，2006年第4期【2】張桂賢，鏈霉素人工抗原的合成及其多克隆抗體的制備[J]，山東畜牧獸醫(yī)，2010 年第3 期 【3】張?jiān)Ｇ?，植物甾醇微生物轉(zhuǎn)化制備甾體藥物中間體的研究進(jìn)展[J]，微生物學(xué)通報(bào)，2006年第2期【4】王玉閣，微生物發(fā)酵制藥的研究[ J ]，齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)2006 年第27 卷第2 期 【5】李娜，魯曉翔，酪氨酸酶抑制劑的研究進(jìn)展[ J ]，食品工業(yè)科學(xué)，2010年第7期 生物與環(huán)境工程學(xué)院 周素花。酪氨酸酶抑制劑結(jié)構(gòu)與底物相似，作為酪氨酸酶的競(jìng)爭(zhēng)性底物，從而削弱酪氨酸酶對(duì)酪氨酸及其系列氧化產(chǎn)物的催化氧化作用。從4000余個(gè)微生物代謝產(chǎn)物中找到一株活性化合物產(chǎn)生菌，經(jīng)鑒定為鏈霉菌，以酪氨酸酶為底物，發(fā)現(xiàn)鏈霉菌代謝產(chǎn)物H7264A和H7263B 均具有酪氨酸酶抑制活性。抑制酪氨酸酶活性對(duì)人類皮膚色素疾病的治療、食品保鮮及農(nóng)業(yè)抗蟲領(lǐng)域具有重要意義。【4】五、酶抑制劑酪氨酸酶廣泛存在于自然界中，其化學(xué)本質(zhì)是含銅蛋白，是黑色素生物合成的關(guān)鍵酶和限速酶。微生物容易誘變,可以根據(jù)需要,運(yùn)用現(xiàn)代生物技術(shù)對(duì)微生物進(jìn)行改造,使之更適合中藥發(fā)酵的需要?；蛞灾兴幹械挠行С煞譃榍绑w,經(jīng)微生物的代謝可以形成新的化合物或微生物的次生代謝產(chǎn)物和中藥中的成分發(fā)生反應(yīng)形成新的化合物。這就是微生物可以用來發(fā)酵炮制中藥的理論根據(jù)如酶法已成為中藥炮制的一種方法?，F(xiàn)代工業(yè)中許多生物產(chǎn)品都是通過微生物發(fā)酵生產(chǎn)的,如各式各樣的酶、抗生素。中藥發(fā)酵制藥技術(shù)是在繼承中藥炮制學(xué)發(fā)酵法的基礎(chǔ)上,吸取了微生態(tài)學(xué)研究成果,結(jié)合現(xiàn)代生物工程的發(fā)酵技術(shù)而形成的高科技中藥制藥新技術(shù),是從中藥(天然藥物)制藥方面尋找藥物的新療效。因此改變微生物細(xì)胞膜的通透性使甾醇底物及其轉(zhuǎn)化產(chǎn)物能自由地出入細(xì)胞, 也是促進(jìn)側(cè)鏈降解的有效方法。（3）影響植物甾醇側(cè)鏈降解收率的因素一是發(fā)酵液中植物甾醇的溶解度，甾醇是脂溶性化合物, 在水中的溶解度很低, 因此反應(yīng)中甾醇的有效濃度相當(dāng)?shù)? 這就導(dǎo)致反應(yīng)速度和轉(zhuǎn)化率偏低。甾醇側(cè)鏈的降解開始于C227位的羥化, 然后經(jīng)過氧化, 最終截?cái)嘤贑217位。（2）微生物選擇性降解甾醇側(cè)鏈微生物對(duì)甾醇作用產(chǎn)生42AD和ADD主要包括側(cè)鏈的降解, C23位羥基氧化成酮基以及C25, 6位雙鍵的氫化。（1）植物甾醇的微生物轉(zhuǎn)化諾卡氏菌、分枝桿菌、節(jié)桿菌和假單胞桿菌等微生物都能將甾醇類化合物作為碳源利用, 而使甾醇降解。植物甾醇的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)決定了它可以作為甾體激素藥物半合成的原料。三、甾體激素甾體激素藥物是僅次于抗生素的第二類藥物, 由于其結(jié)構(gòu)極其復(fù)雜, 目前利用全合成的方法比較困難, 通常以具有甾體母核結(jié)構(gòu)的天然產(chǎn)物為原料采用半合成的方法改造后制得。利用鏈霉菌產(chǎn)抗生素能力與鏈霉素抗性基因之間的對(duì)應(yīng)關(guān)系定向篩選正向突變株,是目前農(nóng)用抗生素科研領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)，紫外誘變是菌種選育過程中最常用的誘變方法之一,但該法導(dǎo)致的菌種突變是隨機(jī)的,正突變株的出現(xiàn)頻率很低,需要進(jìn)行大量的篩選工作。二是利用鏈霉素其醛基直接與載體蛋白的胺基縮和。鏈霉素屬于不含伯胺基的氨基糖苷類抗生素，可采用兩種方法制備免疫原。1943年美國(guó) ，是繼青霉素后第二個(gè)生產(chǎn)并用于臨床的抗生素。細(xì)菌可移動(dòng)遺傳元件(mobile genetic elements, MGE)可以在同種甚至不同種菌株間水平轉(zhuǎn)移, 加速了臨床上耐藥及多重耐藥菌株產(chǎn)生。細(xì)菌可通過隨機(jī)突變, 或表達(dá)潛在抗性基因獲得抗性。內(nèi)在抗性是指細(xì)菌天然對(duì)某些抗生素不敏感。對(duì)土壤微生物產(chǎn)生抗生素物質(zhì)進(jìn)行了系統(tǒng)和開創(chuàng)性工作，發(fā)現(xiàn)了鏈霉素是結(jié)核桿菌的克星。青霉素的發(fā)現(xiàn)，是人類找到了一種具有強(qiáng)大殺菌作用的藥物，結(jié)束了傳染病幾乎無法治療的時(shí)代；從此出現(xiàn)了尋找抗菌素新藥的高潮，人類進(jìn)入了合成新藥的新時(shí)代。他首先發(fā)現(xiàn)青霉素。開創(chuàng)了藥物微生物技術(shù)的新時(shí)代。這一研究成果當(dāng)時(shí)被譽(yù)為“科學(xué)紀(jì)錄中最杰出的一項(xiàng)”。對(duì)狂犬病的研究是他科學(xué)生涯中最后、也是最重要的一項(xiàng)工作。微生物制藥的生物來源是青霉素，放線菌；作用對(duì)象是抗菌藥，抗腫瘤藥，抗病毒藥，除草劑，酶抑制劑，免疫調(diào)節(jié)劑；作用機(jī)制是抑制細(xì)胞壁合成藥，影響細(xì)胞膜功能藥，干擾蛋白質(zhì)合成藥；化學(xué)結(jié)構(gòu)是抗生素，維生素，氨基酸，甾體激素，酶及酶抑制劑。微生物在其生命活動(dòng)過程中產(chǎn)生的，能以極低濃度抑制或影響其他生物機(jī)能的低分子量代謝物?！娟P(guān)鍵詞】微生物制藥抗生素甾體激素酶及酶抑制劑半個(gè)世紀(jì)以來微生物轉(zhuǎn)化在藥物研制中一系列突破性的應(yīng)用給醫(yī)藥工業(yè)創(chuàng)造了巨大的醫(yī)療價(jià)值和經(jīng)濟(jì)效益。 可能與實(shí)驗(yàn)所用的蛋清的量有關(guān)，因?yàn)槭切?shí)驗(yàn)，所以實(shí)驗(yàn)所用蛋清的量約80~100ml，本來蛋清中就含有多種蛋白質(zhì)，溶菌酶的含量也不高，并且在實(shí)驗(yàn)的過程中還會(huì)造成一定程度的損失，導(dǎo)致達(dá)不到結(jié)晶時(shí)對(duì)溶菌酶的濃度要求，故無結(jié)晶生成。 可能與實(shí)驗(yàn)過程中溶液的溫度有關(guān)，酶活性在25~65攝氏度范圍內(nèi)隨著作用溫度的升高酶的活性增強(qiáng),但溫度太高則變性失活[16]。結(jié)論及分析 可能與實(shí)驗(yàn)過程中溶液的pH值有關(guān)，~,且在pH5~7范圍內(nèi)較穩(wěn)定[15]。每1mg酶活力單位數(shù)=吸光度1000/樣品（ug）（2）計(jì)算溶菌酶的收率并由其效價(jià)計(jì)算總活力回收率。溶菌酶活力=ΔOD450/(W)(U/mg)式中, ΔOD450 為450nm 處每分鐘吸光度的變化；W為加入的酶量(mg)。從加酶時(shí)開始記時(shí), 每30s測(cè)1次OD450值,共測(cè)3次[17]。酶活力測(cè)定將酶液與底物懸液分別置于25℃水浴中保溫10～15min, 測(cè)底物懸液的OD450 值,作為對(duì)照。取干菌粉5g, 傾出并稀釋至20～25mL,～。離心或過濾收集酶晶體，用少量丙酮洗滌晶體2次，以五氧化二磷真空干燥后稱重。~，室溫下靜置48h。如有沉淀，離心除去[14]。脫鹽 沉淀用1ml蒸餾水溶解后轉(zhuǎn)入透析袋，用蒸餾水透析24h（0~5攝氏度冰箱），中途換水3~5次，或流水（攪拌）透析24h。樹脂吸附 將處理好的“724”樹脂用布氏漏斗抽干，取濕樹脂20g（約為蛋清量的1/5~1/4），在不斷攪拌下加入預(yù)冷的蛋清中，再繼續(xù)攪拌3h使充分吸附，靜置過夜（0~5攝氏度）[9]。1．2儀器721型分光光度計(jì)，抽濾瓶及布氏漏斗，研缽，恒溫水浴，離心機(jī)，透析袋，1cm x 35cm層析柱，吸量管：、1ml、5ml，真空干燥器。因此, 在倡導(dǎo)綠色食品的今天, 溶菌酶的應(yīng)用前景是相當(dāng)廣闊的應(yīng)用前景[6]。溶菌酶作為一種天然蛋白質(zhì), 能在胃腸內(nèi)作用于營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)被消化和吸收, 對(duì)人體無毒性, 也不會(huì)在體內(nèi)殘留, 是一種安全性很高的食品保鮮劑、營(yíng)養(yǎng)保健品和藥品[8]。3)用溶菌酶非專一性地降解海洋生物高分子殼聚糖, 使其成為能被人體吸收的低分子量具有獨(dú)特生理活性和功能性質(zhì)的低聚殼聚糖[5]。2)將溶菌酶固定化在 HEPA(空氣過濾器)上, 作為空調(diào)的空氣凈化系統(tǒng), 使其