蛋白質(zhì)制備資料(參考版)
2024-11-04 05:29本頁(yè)面
【正文】 為什么,第三十二頁(yè)，共三十二頁(yè)。此法可測(cè)量微量抗原物質(zhì)，也可測(cè)量微量抗體物質(zhì)。熒光胺與伯胺專一結(jié)合后得到熒光加成產(chǎn)物，可用于PAG。zǐ)的泳動(dòng)速度不同，造成電壓梯度不連續(xù)。制備凝膠用TrisHCl緩沖液，電極緩沖液為TrisGly。ir243。)在一起，上 到CMSepharose Fast Flow 陽(yáng)離子交換 柱上，采用0.05mol/L檸檬酸緩沖液〔pH 5.0〕平衡吸附，請(qǐng)問(wèn)：在此條件下，哪種 蛋白質(zhì)不被吸附，被吸附的蛋白質(zhì)哪種先 被鹽溶液〔1mol/LNaCl梯度〕洗下來(lái)， 為什么？,第三十一頁(yè)，共三十二頁(yè)。)方法有幾種類型？,2.層析方法有幾種(jǐ zhǒnɡ)？各種層析方法的 根本原理是什么？,3.A、B、C3種蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)分別為9.0、 8.0、4.0，將這3種蛋白質(zhì)混合(h249。,課 外 作 業(yè),1.蛋白質(zhì)純化(chn yǒnɡ),SDSPAG電泳(di224。n)層析(IEX),柱層析技術(shù),凝膠過(guò)濾層析,疏水相互作用層析〔HIC〕,親和層析,免疫親和層析,共價(jià)層析,固定化金屬離子親和層析,染料配體親和層析,吸附層析,聚焦層析,高效液相層析〔HPLC〕,第二十九頁(yè)，共三十二頁(yè)。,總結(jié),蛋白質(zhì)別離純 化的一般(yībān)程序,前處理(chǔlǐ),粗分級(jí)別離,細(xì)分級(jí)別離,蛋 白 質(zhì) 的 層 析 分 離,離子交換(l237。缺點(diǎn)是靈敏度較差。ng)分析法,此法優(yōu)點(diǎn)是時(shí)間(sh237。,五、超速離心沉降(ch233。,四、蛋白質(zhì)化學(xué)結(jié)構(gòu)分析法,一個(gè)純蛋白質(zhì)，所有氨基酸都成整數(shù)比。 如果所有局部的比活力都相同，認(rèn)為該樣品是均一的。nɡ)于蛋白質(zhì)純度鑒定。n yǒnɡ)法,常用(ch225。nd249。,第二十六頁(yè)，共三十二頁(yè)。,較靈敏，適合測(cè)定20～40μg/mL 的蛋白質(zhì)溶液．,雖精確度不高，但操作簡(jiǎn)便， 樣品可回收。j236。n)過(guò)程中的定量,選擇(xuǎnz233。,第六節(jié) 提純(t237。,三、結(jié)晶(ji233。nɡ)大晶體。,第二十四頁(yè)，共三十二頁(yè)。,〔五〕pH值,結(jié)晶溶液的pH值一般選擇在被結(jié)晶蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)附近。,(三〕溫度,通常選擇4℃冷室或25 ℃溫箱進(jìn)行結(jié)晶。,〔二〕蛋白質(zhì)濃度,結(jié)晶母液濃度越高，結(jié)晶時(shí)機(jī)越大。nd249。)越高，結(jié)晶越容易。),樣品純度(chjīng)條件,〔一〕蛋白質(zhì)純度(ch,第二十三頁(yè)，共三十二頁(yè)。ng)因素,動(dòng)力學(xué) 因素,溶解度,控制晶核過(guò)程 和晶核生長(zhǎng),在適宜的過(guò)飽和狀態(tài)下，溶質(zhì)分子通過(guò)擴(kuò)散、旋轉(zhuǎn)、碰撞等運(yùn)動(dòng)形式，形成晶核。ng)因素,熱力學(xué) 平衡(p237。jīng),一、根本原理,決定(ju233。,轉(zhuǎn)移方法,電泳法,非電泳法,多采用電泳法,填充聚丙烯酰胺和5%交聯(lián)劑,采用涂漬的毛細(xì)管柱，降低電滲作用,第二十二頁(yè)，共三十二頁(yè)。,六、印漬轉(zhuǎn)移法〔Western blotting〕,是將凝膠電泳后的蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移到特殊的膜上，然后用親和反響或免疫反響或結(jié)合反響測(cè)定蛋白質(zhì)的技術(shù)。,4.毛細(xì)管凝膠電泳〔CGE〕,按填充(ti225。ch233。,3.毛細(xì)管等電
環(huán)評(píng)公示相關(guān)推薦
鄂ICP備17016276號(hào)-1