chapter_2_蛋白質(zhì)-3-蛋白質(zhì)分離技術(shù)(參考版)
2025-01-15 07:41本頁面
【正文】 屬醫(yī)藥原料中間體，其用途主要用于西藥配方，以增強(qiáng)藥效、增強(qiáng)人體對藥的吸收速度和吸收率 。用這種方法生產(chǎn)肽的企業(yè)在美國硅谷就有一家。目前，這種肽已處于淘汰狀態(tài) 。 肽的化學(xué)合成（了解） ? 五、六十年代，世界上，包括我國主要是從動物器臟獲取肽。適于做同工酶的鑒定。在電場中，每種蛋白質(zhì)成分將移向并 “ 聚焦 ”（停留在等于其等電點的 PH梯度處，形成一個很窄的區(qū)帶。 (2)載體兩性電解質(zhì)： 在等電聚焦電泳中 ， 載體兩性電解質(zhì)具有以下兩種功能： A 中和功能： 兩性電解質(zhì)的性質(zhì)在分離系統(tǒng)中形成一個平衡穩(wěn)定的 pH梯度 ， 提供中和蛋白質(zhì)電荷的離子 ， 具有 pH緩沖能 。 在不同的 pH環(huán)境中所帶的正負(fù)電荷不同 。 蛋白質(zhì)在一個穩(wěn)定的線性 pH梯度的凝膠中電泳 ， 蛋白質(zhì)朝著與自身電荷相反的方向移動 ， 在移動的過程中不斷被凝膠中的反離子中和 ， 最后靜電荷完全被中和而停止運動 ， 聚焦在等電點的位置 。 它是 60年代初建立起來的一種蛋白質(zhì)分離手段 ， 現(xiàn)在已經(jīng)成為單向蛋白質(zhì)電泳分辨率最高的一種分離技術(shù) 。 若蛋白質(zhì)分子的二硫鍵只是部分被打開 ， 這是測出的分子量是蛋白質(zhì)分子和亞基分子的混合物 。 C. 二硫鍵是否完全打開 只有蛋白質(zhì)分子中的二硫鍵完全被打開 ， 蛋白質(zhì)分子完全解聚 ，SDS充分與亞基分子結(jié)合 ， 才能準(zhǔn)確測定出亞基分子量 。 為了使 SDS與蛋白質(zhì)結(jié)合充分 ， SDS和蛋白質(zhì)結(jié)合的重量比一般是 4:1或 3:1。 單體的濃度與 SDS總濃度 ， 溫度和離子強(qiáng)度有關(guān) 。 SDS電泳成敗關(guān)之一 ， 是在制備樣品的過程中 ， 蛋白質(zhì)與 SDS結(jié)合的程度直接影響電泳分離效果 。 計算分子量 。 (2) 操作過程 制膠 ? 加樣 ? 電泳 ? 固定 ? 染色 ? 脫色 ? 計算 (3) 結(jié)果處理 a. 電泳圖譜 1 2 3 繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線：以標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)分子量的對數(shù) log(M)為縱坐標(biāo) ， Rf值為橫坐標(biāo) ， 繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線 。在電場下， 分子量大的亞基受阻大，電泳速度慢，走在小分子的后面； 分子量小的亞基受阻小，電泳速度快， 走在大分子的前面。 由于蛋白質(zhì) SDS復(fù)合物所帶負(fù)電荷遠(yuǎn)大于蛋白質(zhì)分子自身有的凈電荷 ， 這樣就
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