chapter2蛋白質(zhì)-3-蛋白質(zhì)分離技術(shù)介紹(參考版)
2025-01-15 07:51本頁面
【正文】 。他們主要是購買世界上一些精細化工廠生產(chǎn)的氨基酸為原料，用 固相合成法 、液相合成法 ，定向合成某種單肽。 世界上有固相合成法、液相合成法生產(chǎn)的肽。如：胸腺肽這種胸腺肽主要用于人體免疫。 方法 : 制膠 ? 加樣 ? 電泳 ?固定 ? 染色 ? 脫色 ? 計算 等電聚焦 ③ 雙向電泳 （ twodimensional electrophoresis） 雙向電泳是 等電聚焦電泳 和 SDSPAGE的組合 ， 即先進行等電聚焦電泳 （ 按照 pI分離 ） ， 然后再進行 SDSPAGE（ 按照分子大小 ） ， 經(jīng)染色得到的電泳圖是個二維分布的蛋白質(zhì)圖 。它的分辨率很高，可以把人的血清分成 40多個區(qū)帶。 B 載電功能： 兩性電解質(zhì)作為電的載體 ， 具有運載 “ 電流 ” 的能力 ，有良好的導電性能 水平板式電泳槽 垂直板式電泳槽 等電聚焦 時，蛋白質(zhì)混合物的分離是在具有 PH梯度的介質(zhì)中進行的。 若在某特定的 pH環(huán)境中其凈電荷為零 ， 此時的 pH為該蛋白質(zhì)的等電點 ， 在電場下不泳動 。 (1)蛋白質(zhì)的等電點 蛋白質(zhì)屬于一種兩性電解質(zhì) 。 它是利用蛋白質(zhì)分子或其它兩性分子的等電點的差異進行電泳分離和分析 。 ② 等電聚焦電泳 (isoelectric focusing, IEF ） a. 原理 : 通常是指聚丙烯酰胺凝膠等電聚焦電泳 。 二硫鍵完全被打開要取決于巰基乙醇的質(zhì)量和使用的劑量 。 B. 樣品緩沖液離子強度 因為 SDS結(jié)合到蛋白質(zhì)分子上的量取決于平衡時 SDS單體濃度 ，而不是總濃度 ， 只有在較低的離子強度溶液中 ， SDS單體才具有較高的平衡濃度 ， 所以樣品緩沖液應選用低離子強度 ， 通常是 10100mmol/l之間 。在一定溫度和離子強度下 ， SDS處于一飽和值 ， 即單體濃度不再隨SDS中濃度增加而增加 。 影響結(jié)合的因素主要有三個 : SDS單體的濃度 SDS在水溶液中以單體和 SDS復合物混合存在的 ， 能與蛋白質(zhì)結(jié)
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