【正文】 一。實驗證明其方法具有分離效果好，操作簡便，速度快，實驗成本低等優(yōu)點。薄層層析對設備要求不高，分離效果好、操作簡便、 分離速度快 (13 h)、樣品需要量較少 (500ng～ 1 g)。苯酚 硫酸法可用于甲基化的糖、戊糖和多聚糖的測定，方法簡單，靈敏度高，實驗時基本不受蛋白質存在的影響，并且產(chǎn)生的顏色穩(wěn)定 160min 以上。 SHAO Qingsong 等 [1012]采用 苯酚 硫酸法測定傳統(tǒng)中藥溫郁金多糖的含量，采 取 L9(3)3 的正交試驗設計，得到了最佳的比色方案，多次測定吸光度，分別得到溫郁金中多糖的含量為 %， %， %， %， %和 %。 苯酚 硫酸法的基本原理是 利用糖類在濃硫酸作用下，水解生成糠醛或其衍生物，可與苯酚試劑縮合產(chǎn)生顏色物質，反應后溶液呈橙黃色，于 480 490nm 處有特征吸收，其顏色深淺與糖的濃度成正比。 法測定茶多糖的含量 蒽酮 硫酸法測定多糖含量，是利用多糖在濃硫酸作用下，水解生成單糖，并迅速脫水生成羥甲基糠醛，羥甲基糠醛與蒽酮絡合成藍色化合物，通過該化合物顏色的深淺來計算多糖濃度的高低。 3 茶多糖的含量測定方法研究 文獻報道的茶多糖的含量測定方法包括比色法、薄層色譜法、 氣質聯(lián)用法、 高效液相色譜法等。結果表明在微波輔助下，水和 20%乙醇提取多 糖的效果好，微波功率越高越有利于多糖提取，總提取時間以 60min 以上為宜，液固相比達到 15:1 即可，茶多糖的最高提取率為 4%左右，而傳統(tǒng)水提法，多糖的提取率為 %。何傳波等 [7]采用微波輔助方法提取鐵觀音茶多糖，通過正交實驗考察了微波功率、時間、水浴浸提溫度、料液比對多糖得率的影響，結果表明鐵觀音茶多糖得率隨微波功率和時間的增加而增大 ,隨料液比的升高先增后降。 通過對兩種酶法的提 取工藝分析與比較，我們可以得到酶法提取的最佳工藝條件，在此條件下酶法提取可提高茶多糖得率。王元鳳 [6]研究了一次熱水提取后的茶渣采用熱水提取、復合酶提取、果膠酶提取對茶多糖提取效果的影響，并對酶法提取工藝進行了優(yōu)化。結果表明，質量分數(shù)為 %的茶葉水解酶，在 pH 值 ，溫度48176。 分析水提取法所用條件不同，達到茶多糖的提取率各不相同，通過正交試驗設計或采用 二次響應面方法等優(yōu)化水提取的工藝條件得到各自的最佳提取率，條件參數(shù)準確，具有實用價值。C ，沉淀時所用的乙醇濃度為 75%。因此，采用 RSA法優(yōu)化得到的浸提條件參數(shù)準確可靠，具有實用價值。C、漫提時間 1． 5h、料水比 1：20時，實際測得的提取率為 % 。C，浸提時間 3h，沉淀劑量為 3倍體積丙酮。蘇永昌 [2]對烏龍茶多糖提取工藝的研究表明，用熱水 (80176。水提取的多糖多數(shù)是中性多糖。 湖北科技學院本科畢業(yè)論文：茶多糖提取工藝的優(yōu)化 第 37 頁 共 49 頁 2 茶多糖的提取工藝 茶葉提取條件的不同對多糖的提取率產(chǎn)生不同的影響， 對于茶葉多糖的提取方法，我們常見的一般分為水提取法、酶提取法、微波輔助提取等。如今茶多糖在許多方面得到開發(fā)和應用，如抗腫瘤、治療艾滋病等方面用作抗病毒藥、延緩衰老藥 [1]。 多糖是一類廣泛存在于自然界的生物大分子物質，參與生物體結構組成和多種生理功能。 ” 顧元慶《茶譜》中有 “ 人飲真茶，能止渴、消食、除痰、少睡、利尿道、明目、益思、除煩、去膩，人固不可一日無茶?！渡褶r(nóng)本草經(jīng)》記載了久服茶葉能 “安心益氣，輕身耐老 ”。 關鍵詞 茶多糖；提取工藝；含量測定；藥理活性；展望 1 前言 茶是一種被人們廣泛接受的飲品，自古就享有養(yǎng)生之譽。 湖北科技學院本科畢業(yè)論文：茶多糖提取工藝的優(yōu)化 第 35 頁 共 49 頁 參考文獻 [1] Pharmacopoeia ,C.(Ed).Pharmacopoeia of the People Republic of :People’s Medical Publishing . 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A microtiter modification of the anthronesulfuric acid colorimetric assay for glucose我們得到溫郁金多糖的含量分別為 %， %， %， %， %和 %.在這些結果的基礎上，可以得出這樣的結論：苯酚 —硫酸法測定多糖的含量是準確的、有效的和可行的。選擇正交實驗設計作為我們實驗的方法。結果見表 10： 精密度實驗、重復性實驗、樣品穩(wěn)定性實驗和回收率實驗等都表明了此方法是準確、有效和可行的。結果見表 9： 結果表明在 3h 內(nèi)樣品溶液保持穩(wěn)定。在這個過程中 ，溶液在 4176。結果見表 7： 湖北科技學院本科畢業(yè)論文：茶多糖提取工藝的優(yōu)化 第 33 頁 共 49 頁 重現(xiàn)性實驗 采用同樣的方法進行試驗，分析 6 個不同的樣品溫郁金多糖。同時參照試劑 按上述進行空白試驗。 計算結果得到 f 值為 湖北科技學院本科畢業(yè)論文：茶多糖提取工藝的優(yōu)化 第 32 頁 共 49 頁 多糖成分的測定 精密稱取溫郁金多糖，取一定體積的蒸餾水，共同加入 250ml 的燒瓶中，以恒定的速率攪拌促使其溶解，再加蒸餾水至刻度處。精密量取 的溶液，然后按照 中的操作步驟進行實驗。很明顯 PC%的分析數(shù)據(jù)與上述討論獲得的有重要意義的分析相一致。在統(tǒng)計學中， SS’total 的數(shù)值被指定與 SStotal 的數(shù)值相等，然而 SS’total 的獲得不同于 SStotal ， SS’之和是所考慮的因素。這些數(shù)據(jù)結果已經(jīng)被 PC%比例的分析進一步確證了。因此表 4 中計算得到了極差分析的 K， k 和 R值，表 5 中列出了方差分析數(shù)據(jù)。然而在 L9(3)3 正交實驗設計中，只需要做 9 次實驗。然而，實驗進行中隨機引入的需要避免的個人的或主管的因素，有意識到或沒有意識到。 湖北科技學院本科畢業(yè)論文：茶多糖提取工藝的優(yōu)化 第 30 頁 共 49 頁 比色法的最優(yōu)化方案 L9(3)3 的正交試驗設計在實驗中進行。葡 萄糖標準溶液的繪制：回歸方程： A=+； R2=。在冷卻至室溫 20min 以后，于 485nm 波長處進行吸光度值測定。 制作葡萄糖標準曲線 分別制備 60、 80、 100μg/ml葡萄糖溶液，精密吸取 標準溶液，置于玻璃容器中，同時加入 5%苯酚溶液 和硫酸溶液 進行混合，保持水浴溫度 40176。從吸光度值和吸收波長范圍，我們可以觀察到最大吸收波長為 485nm。C. 在冷卻至室溫 20min 以后，于 300 600nm 波長范圍內(nèi)進行吸光度值測定。不同的參數(shù) 和用量如下表層現(xiàn)：（表 2） 統(tǒng)計學分析 所獲得的數(shù)據(jù)用 ANOVA 方法進行統(tǒng)計學分析（ SPSS 版本 ） 3 結果與討論 最大吸收波長的測定 最大吸收波長的測定采用略作修改的（ Habibi， Mahrouz， Vignon， 2021） [13]方法。比色方案可以通過逐步的實施或者采用實驗設計以達到最優(yōu)化。 湖北科技學院本科畢業(yè)論文：茶多糖提取工藝的優(yōu)化 第 29 頁 共 49 頁 比色法的正交試驗設計 因為不同潛在的參數(shù)影響比色，最優(yōu)化的實驗條件是比色的關鍵步驟。此操作重復兩次，就得到了溫郁金中的多糖。C 的冰箱中冷藏過夜，沉淀得到多糖。C 提取 30min。將殘渣置入燒瓶中，加入 蒸餾水。之后粉末樣品儲存在稱量瓶直到分析。 湖北科技學院本科畢業(yè)論文：茶多糖提取工藝的優(yōu)化 第 28 頁 共 49 頁 2 實驗 器材和試劑 KQ205B 超聲波清洗機（昆山超聲波器械有限公司，中國） UV2501 PC 吸收光譜儀（ 日本島津公司，日本 ） 所有化學試劑都為分析純，來自天津化學試劑公司（天津，中國） 所用樣品和溶液都使用濾過和去離子的水 材料 溫郁金的根來自中國不同地區(qū)（表 1），通過浙江林業(yè)大學天然產(chǎn)物研究中心的憑證標本的比對，為 LOU Luhuan 教授所確證。C 。因為潛在的幾種參數(shù)影響比色，故最優(yōu)化的測定條件是比色最關鍵的一步。苯酚 —硫酸法的廣泛運用在于他的靈敏性和簡易性。多糖的含量測定采用苯酚 —硫酸法，用葡萄糖溶液制作標準曲線 [6]。溫郁金中的多糖具有抗腫瘤、抗氧化活性。 近些年來，植物多糖已經(jīng)被看作生物分子修飾中重要的一類。溫郁金的首次使用記錄是在公元 627 649年的 Yao Xing Lun 中，具有排除血液淤積和減輕疼痛的功效 [3]。結果表明這個方法是準確，有效，和實用的，也可以用于其它細菌多糖的含量測定。C 。本文將使用苯酚 硫酸法測定溫郁金多糖的含量。 茶多糖的提取分離試驗（包括單因素實驗、正交 設計 實驗、含量測定實驗） 結題，整理實驗結果、分析實驗數(shù)據(jù)，撰寫論文 指導老師修改審批，完善畢業(yè)論文。 進度及要求 起止日期 要求完成的內(nèi)容及質量 查閱、收集與本課題相關的文獻 ，確定課題，完成開題報告。 4. 熟悉茶多糖提取的基本研究。0001700019,00049. [16] 羅毅 ,潘細貴 ,劉剛 ,李運飛 等 .苯酚 硫酸法測定多糖含量顯色方式的優(yōu)選 [J].中國中醫(yī)藥信息雜志 。 湖北科技學院本科畢業(yè)論文：茶多糖提取工藝的優(yōu)化 第 18 頁 共 49 頁 參考資料及文獻（包括指定給學生閱讀的外文資料）： [1] 王元鳳 ,金征宇 .茶葉中多糖的分離及降血糖活性的研究 [J].中草藥 ,2021,36(10):14531457. [2] 王丁剛 ,王淑如 .茶葉多糖的分離、純化、分析及降血脂作用 [J].中國藥科大學學報 ,1991,22 (4):225228. [3] 侯仰鋒 ,汪東風 ,周小玲等 .茶多糖對高脂血癥大鼠血脂及肝臟中微量元素的調節(jié)作用 [J].營養(yǎng)學報 ,2021,30(3):269272. [4] 王丁剛 ,王淑如 .茶葉多糖心血管系統(tǒng)的部分藥理作用 [J].茶葉 .1991 年 02 期 . [5] 聶少平 ,謝明勇 ,羅珍 .茶葉多糖的抗氧化活性研究 [J].天然產(chǎn)物研究與發(fā) ,2021,17(5):549552. [6] 全吉淑 ,尹學哲 ,金澤武道等 .茶多糖抗氧化作用的研究 [J].中藥材 ,2021,30(9):11161118. [7] 梁進 .茶葉多糖的化學修飾及體外抗凝血作用研究 [D].安徽農(nóng)業(yè)大學 ,2021. [8] 范斌 .茶多糖降血糖作用的研究 .糖尿病新世界 [J],2021 年第 03 期 . [9] 汪東風 ,王林戈 ,張莉等 .綠茶對糖尿病的防治作用 [J].茶葉科學 ,2021,30(4):243250. [10] 蘇永昌 .烏龍茶多糖的提取工藝、生物活性及高多糖優(yōu)異種質資源的研究 [D].福建農(nóng)林大學 ,2021. [11] 周小玲 .茶多糖的定量、定性及生物活性研究 [D].中國海洋大學 ,2021. [12] 曹鵬飛 .茶多糖提取