基因功能分析的基本策略課件(參考版)
2025-02-10 10:42本頁面
【正文】 2023年 2月 26日星期日 12時(shí) 23分 0秒 12:23:0026 February 2023 1一個(gè)人即使已登上頂峰，也仍要自強(qiáng)不息。 2023年 2月 26日星期日 下午 12時(shí) 23分 0秒 12:23: 1最具挑戰(zhàn)性的挑戰(zhàn)莫過于提升自我。勝人者有力，自勝者強(qiáng)。 :23:0012:23Feb2326Feb23 1越是無能的人，越喜歡挑剔別人的錯(cuò)兒。 , February 26, 2023 閱讀一切好書如同和過去最杰出的人談話。 2023年 2月 26日星期日 12時(shí) 23分 0秒 12:23:0026 February 2023 1空山新雨后，天氣晚來秋。 2023年 2月 26日星期日 下午 12時(shí) 23分 0秒 12:23: 1楚塞三湘接，荊門九派通。 12:23:0012:23:0012:23Sunday, February 26, 2023 1不知香積寺，數(shù)里入云峰。 12:23:0012:23:0012:232/26/2023 12:23:00 PM 1成功就是日復(fù)一日那一點(diǎn)點(diǎn)小小努力的積累。 下午 12時(shí) 23分 0秒 下午 12時(shí) 23分 12:23: 沒有失敗，只有暫時(shí)停止成功！。 2023年 2月 下午 12時(shí) 23分 :23February 26, 2023 1行動(dòng)出成果，工作出財(cái)富。 :23:0012:23:00February 26, 2023 1他鄉(xiāng)生白發(fā)，舊國見青山。 :23:0012:23Feb2326Feb23 1故人江海別，幾度隔山川。 , February 26, 2023 雨中黃葉樹，燈下白頭人。 ?可以進(jìn)行 穩(wěn)定 的基因表達(dá)抑制。 在線蟲和植物， siRNA 可擴(kuò)增，但哺乳細(xì)胞不能。 shRNA 與 siRNA 的比較 ?siRNA ?應(yīng)用非常方便，干擾效力往往比較高。 ?在有 14bp 匹配的情況下就能夠誘發(fā)干擾。 shRNA 與 siRNA 應(yīng)用的局限 ?在某些細(xì)胞的特定狀態(tài)下， shRNA 或 siRNA 仍能夠誘發(fā)細(xì)胞的抗病毒反應(yīng)。 ?盡可能使用較低的 siRNA 濃度，以保證其特異性。 ?采用多個(gè) siRNA 片段 ，并篩選其中最有效的。 shRNA 表達(dá)載體系統(tǒng) miRNA 表達(dá)載體系統(tǒng) siRNA 設(shè)計(jì)原則 ?siRNA antisense 鏈 5’ 端穩(wěn)定性較低時(shí)具有更好的效率。 siRNA 與 shRNA ? 30bp siRNA 可以誘導(dǎo) RNAi，并克服哺乳細(xì)胞的障礙。 ?在胚胎期細(xì)胞，上述非特異的抗病毒體系尚未形成。 ?在 mRNA 水平進(jìn)行的基因敲除： ?Antisense oligonucleotides ?Ribozyme ?RNA interference： dsRNA； siRNA；shRNA dsRNA 能夠誘發(fā)細(xì)胞的抗病毒反應(yīng) ?在哺乳動(dòng)物存在干擾素相關(guān)的抗病毒體系。 ?dsRNA 對(duì)蛋白質(zhì)的合成產(chǎn)生影響。 Posttranslational gene silencing ?dsRNA 造成同源性基因的甲基化和表達(dá)關(guān)閉。 ?同源 mRNA 翻譯受阻。 siRNA 的產(chǎn)生 ? Dicer： RNase III 的一種，可降解 dsRNA 成 siRNA。 RNA 干擾 ?RNA 干擾 ：雙鏈 RNA 誘導(dǎo)的同源 mRNA 降解 。 ORC6 細(xì)胞分裂調(diào)控蛋白。 Hela 細(xì)胞：經(jīng) ORC6 siRNA 作用后，細(xì)胞出現(xiàn)多核現(xiàn)象 。 線蟲：左側(cè)為 GFP 轉(zhuǎn)基因線蟲；右側(cè)線蟲則經(jīng) GFP dsRNA 處理。 ?很少量的雙鏈 RNA 就能誘發(fā) C. elegans 整體的基因沉默，甚至能傳遞到子一代。 ?ds RNA 比 sense 或 antisense RNA 都好 。 ?外源基因不但不能加深花的顏色，反而造成內(nèi)源基因表達(dá)的降低。一般是在細(xì)胞水平。 基因敲除和 RNA 干擾 ?基因敲除是在基因水平將某個(gè)基因定點(diǎn)去除，動(dòng)物整體水平。 ?如果整合于特定位點(diǎn)時(shí)，則 PCR 可以
教學(xué)課件相關(guān)推薦
鄂ICP備17016276號(hào)-1