基因分析的基本策略課件(參考版)
2025-01-22 14:42本頁面
【正文】 2023年 2月 6日星期一 11時 15分 55秒 11:15:556 February 2023 1一個人即使已登上頂峰，也仍要自強不息。 2023年 2月 6日星期一 上午 11時 15分 55秒 11:15: 1最具挑戰(zhàn)性的挑戰(zhàn)莫過于提升自我。勝人者有力，自勝者強。 :15:5511:15Feb236Feb23 1越是無能的人，越喜歡挑剔別人的錯兒。 , February 6, 2023 閱讀一切好書如同和過去最杰出的人談話。 2023年 2月 6日星期一 11時 15分 55秒 11:15:556 February 2023 1空山新雨后，天氣晚來秋。 2023年 2月 6日星期一 上午 11時 15分 55秒 11:15: 1楚塞三湘接，荊門九派通。 11:15:5511:15:5511:15Monday, February 6, 2023 1不知香積寺，數(shù)里入云峰。 11:15:5511:15:5511:152/6/2023 11:15:55 AM 1成功就是日復(fù)一日那一點點小小努力的積累。 上午 11時 15分 55秒 上午 11時 15分 11:15: 沒有失敗，只有暫時停止成功！。 2023年 2月 上午 11時 15分 :15February 6, 2023 1行動出成果，工作出財富。 :15:5511:15:55February 6, 2023 1他鄉(xiāng)生白發(fā)，舊國見青山。 :15:5511:15Feb236Feb23 1故人江海別，幾度隔山川。 , February 6, 2023 雨中黃葉樹，燈下白頭人。 ? 免疫組化將免疫反應(yīng)的 特異性 、組織化學(xué)的 可見性 和顯微鏡的 顯像和放大作用 巧妙地結(jié)合起來，成為蛋白質(zhì)水平分析基因的直觀特異的方法之一。 ? 對轉(zhuǎn)染細胞的外源基因表達情況也可以采用此法。是一種快速定量分析細胞的新技術(shù)。 ? 基本過程 ：蛋白質(zhì)樣品制備和 SDSPAGE分離； 蛋白質(zhì)的轉(zhuǎn)膜； 標記的抗體與膜上蛋白質(zhì)的抗原抗體雜交； 檢測并分析標記物信號。上必須選用蛋白質(zhì)技術(shù)對基因的表達活性進行分析。 ?目前在 研究轉(zhuǎn)基因的活性。 ? 特點：能在同一時間內(nèi)平行分析大量的基因轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物，進行大量的信息篩選和檢測分析。 ? 監(jiān)測大量基因表達的最好方法之一是 cDNA微陣列技術(shù)，利用這種技術(shù)可以同時測定成千上萬個基因的轉(zhuǎn)錄活性。 ，同時檢測多個基因，可評價他們在同一情況下的差異表達。 RPA有 Northern Blot無法比擬的優(yōu)勢： ，反應(yīng)更加完全。 （二） RTPCR用于定性、定量分析 RNA 三、 RNA酶保護試驗 — 了解基因轉(zhuǎn)錄后的選擇性剪接 ?RNA酶保護試驗 ：可用于① mRNA定量、 ② mRNA末端定位、 ③ mRNA剪切部位④確定內(nèi)含子在相應(yīng)基因中的位置。 ? 將陽性參照基因作為內(nèi)參照與待測 RNA在一個反應(yīng)體系中進行擴增，可以對 RNA進行 相對定量分析 。其基本程序是：提取細胞總 RNA，然后將其中的mRNA在體外逆轉(zhuǎn)錄成 cDNA，再以 cDNA為模板，進行特定基因的 PCR擴增。同時作為監(jiān)測細胞內(nèi) RNA含量不夠準確，只能作為 定性分析 RNA方法 。原理同 Southern blot。 ? mRNA研究常用的方法有 Northern blot、 原位雜交 、實時 PCR、 RNA酶保護試驗 、 cDNA芯片技術(shù) 和 RTPCR。目前在上述 RNA研究中，以 mRNA研究最為熱點。 （五） 顯示 ：根據(jù)核酸探針標記物的種類分別進行放射自顯影或利用酶檢測系統(tǒng)進行不同顯色處理。 （三） 雜交 ：調(diào)整探針的濃度（ ～ ） 、探針長度（ 50～ 100個堿基）、雜交的溫度和時間。最常用的固定劑是多聚甲醛，其它的固定劑（如戊二醛）。放射性同位素標記探針具有放射性既污染環(huán)境，又對人體有害，且受半衰期限制等缺點，非放射性探針可以用生物素、地高辛 、熒光素標記探針。同時原位雜交既可檢測 DNA，也可檢測 RNA，所用探針不同而已。 ? 原位雜交不需要從組織提取核酸，對組織中含量極低的靶序列有 很高的靈敏度 ，并可 完整保持組織與細胞形態(tài) ，更能準確反映出組織細胞的相互關(guān)系及功能狀態(tài)。 ? 利用人類基因組序列預(yù)測并設(shè)計了能與代表性片段雜交的寡核苷酸探針，制成芯片，然后與 RDA篩選出來的代表性差異 PCR產(chǎn)物在芯片上進行雜交，用計算機分析雜交結(jié)果。 ?實時 PCR需要包括熱循環(huán)儀、計算機、光學(xué)儀器用于熒光激發(fā)和收集器、數(shù)據(jù)處理和分析軟件。 ? 當 PCR產(chǎn)物擴增時，聚合酶遇到結(jié)合在模板上的熒光探針時，利用聚合酶所具有的 5`3`外切酶作用，將兩種染料分離，因此
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