【正文】 10:57:13 上午 10:57 上午 10:57:13三月 21MOMODA POWERPOINTLorem ipsum dolor sit, eleifend nulla ac, fringilla purus. Nulla iaculis tempor felis amet, consectetur adipiscing elit. Fusce id urna blanditut cursus. 感謝您的下載觀看專家告訴。 三月 2110:57 上午 三月 2110:57March 24, 20231業(yè)余生活要有意義，不要越軌。 三月 21三月 2110:57:1310:57:13March 24, 20231意志堅(jiān)強(qiáng)的人能把世界放在手中像泥塊一樣任意揉捏。 10:57:1310:57:1310:57Wednesday, March 24, 20231知人者智，自知者明。 10:57:1310:57:1310:573/24/2023 10:57:13 AM1越是沒有本領(lǐng)的就越加自命不凡。 10:57:13 上午 10:57 上午 10:57:13三月 21楊柳散和風(fēng)，青山澹吾慮。 三月 2110:57 上午 三月 2110:57March 24, 20231少年十五二十時(shí)，步行奪得胡馬騎。 三月 21三月 2110:57:1310:57:13March 24, 20231意志堅(jiān)強(qiáng)的人能把世界放在手中像泥塊一樣任意揉捏。 三月 2110:57:1310:57Mar2124Mar211世間成事，不求其絕對圓滿，留一份不足，可得無限完美。 三月 21三月 21Wednesday, March 24, 2023很多事情努力了未必有結(jié)果，但是不努力卻什么改變也沒有。 2023/3/24 10:57:1310:57:1324 March 20231做前，能夠環(huán)視四周；做時(shí)，你只能或者最好沿著以腳為起點(diǎn)的射線向前。 24 三月 202310:57:13 上午 10:57:13三月 211比不了得就不比，得不到的就不要。 10:57:1310:57:1310:57Wednesday, March 24, 20231乍見翻疑夢，相悲各問年。 10:57:1310:57:1310:573/24/2023 10:57:13 AM1以我獨(dú)沈久，愧君相見頻。 小 結(jié)目 錄 Thank You!目 錄靜夜四無鄰，荒居舊業(yè)貧。采用不同技術(shù)建立的模式生物是研究基因功能必不可少的工具，各種方法都具有各自的特點(diǎn)和局限性。 生物信息學(xué) 具有方便快捷和經(jīng)濟(jì)的優(yōu)點(diǎn)，如何應(yīng)用生物信息學(xué)技術(shù)充分利用已知數(shù)據(jù)和生物學(xué)知識，得到與目的基因功能有關(guān)的重要信息，預(yù)測基因的功能，進(jìn)而制定實(shí)驗(yàn)室研究方案，是現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)研究人員必備的技能。目 錄 分析基因表達(dá)可以從 RNA和蛋白質(zhì)水平上進(jìn)行。216。目 錄216。 基因捕獲技術(shù)的基本過程是： 將一含報(bào)告基因的 DNA載體隨機(jī)插入基因組，產(chǎn)生內(nèi)源基因失活突變，通過報(bào)告基因的表達(dá)，提示插入突變的存在，以及內(nèi)源基因的表達(dá)特點(diǎn)。通過對突變小鼠的深入研究、對突變基因定位及位置候選法克隆突變堿基就會(huì)得到突變基因的功能信息。216。216。216。目 錄 ENU誘變 是近年來發(fā)展起來的研究基因功能的新手段。目 錄 因此，單單應(yīng)用 “反向遺傳學(xué) ”不足以完成功能基因組學(xué)的任務(wù)，而基于 “正向遺傳學(xué) ”的，從異常表型到特定基因突變的 隨機(jī)突變篩選策略 逐漸受到青睞。反義寡核苷酸是指能與 mRNA互補(bǔ)配對的 RNA分子，長度一般為 20nt左右。 目 錄反義寡核苷酸引發(fā)基因沉默的機(jī)制：（ 1）可能是通過與靶 mRNA互補(bǔ)結(jié)合后以位阻效應(yīng)抑制靶基因的翻譯；（ 2）也可能通過與雙鏈 DNA結(jié)合形成三股螺旋而抑制轉(zhuǎn)錄；（ 3）也不能排除通過激活細(xì)胞內(nèi)的 Dicer酶進(jìn)入 RNA干涉途徑而降解靶mRNA。目 錄缺點(diǎn)：1. 該技術(shù)可能對靶基因的相似序列發(fā)生作用，導(dǎo)致脫靶（ offtargeting）效應(yīng)。 若將 RNAi技術(shù)與 Cre/loxP重組系統(tǒng)以及基因表達(dá)調(diào)控系統(tǒng)相結(jié)合，建立轉(zhuǎn)基因動(dòng)物模型，則不僅具有穩(wěn)定、可遺傳、可誘導(dǎo)等特點(diǎn)，而且無需使用胚胎干細(xì)胞技術(shù)和基因打靶技術(shù)，與基因敲除相比具有簡單、易操作、周期短等優(yōu)勢。 目前多采用 RNA聚合酶 Ⅲ 啟動(dòng)子構(gòu)建 siRNA的表達(dá)載體或表達(dá)框架，常用的 RNA聚合酶 Ⅲ 的啟動(dòng)子有人、鼠 U6啟動(dòng)子、人 H1啟動(dòng)子。1. RNA干涉技術(shù)可用來研究基因的功能目 錄RNAi的作用機(jī)制： 外源 dsRNA可直接被導(dǎo)入細(xì)胞，或者通過轉(zhuǎn)基因、病毒感染等方式進(jìn)入細(xì)胞，并整合到基因組中獲得表達(dá)；各種來源的 dsRNA被核酸酶 RNaseⅢ 家族中，特異識別 dsRNA的 Dicer酶，以一種 ATP依賴的方式逐步切割成長約 21~23nt的雙鏈 小干擾 RNA(small interference RNA， siRNA)； siRNA識別 mRNA鏈上的同源區(qū)域之后，結(jié)合一個(gè)核酶復(fù)合物形成 RNA誘導(dǎo)的沉默復(fù)合體（RNAinduce silencing plex， RISC）； RISC定位到靶 mRNA轉(zhuǎn)錄本上，并在距離 siRNA 3’端 12個(gè)堿基的位置切割 mRNA。 RNAi是機(jī)體的一種天然防御機(jī)制，具有防御病毒感染、入侵等功能。 該現(xiàn)象最早發(fā)現(xiàn)在轉(zhuǎn)基因植物中，后來這種現(xiàn)象在線蟲、真菌、果蠅、斑馬魚、小鼠早期胚胎中也有發(fā)現(xiàn)。 近年來， 條件性基因打靶（ conditional gene targeting）系統(tǒng)的建立，使得對基因靶位時(shí)間和空間上的操作更加明確，效果更加精確可靠，已達(dá)到對任何基因在不同發(fā)育階段和不同器官、組織的選擇性敲除。 1987年， Thompsson首次建立了完整的 ES細(xì)胞基因敲除的小鼠模型，此后基因敲除技術(shù)得到進(jìn)一步的發(fā)展和完善，目前該技術(shù)已經(jīng)成為研究基因功能最直接、最有效的方法之一。常用的方法主要有基因敲除基因沉默二、采用功能失活策略鑒定基因的功能目 錄 基因敲除（ gene knockout） 屬于基因打靶技術(shù)的一種，其操作步驟和原理與基因打靶技術(shù)相同。由于中靶的胚胎干細(xì)胞保持分化的全能性 , 因此它可以發(fā)育成為嵌合鼠的生殖細(xì)胞 , 使得經(jīng)過定向改造的遺傳信息可以代代相傳。除基因敲入外，基因打靶還包括基因敲除、點(diǎn)突變、缺失突變、染色體組大片段刪除等。該技術(shù)的巧妙之處在于把胚胎干細(xì)胞技術(shù)和 DNA同源重組技術(shù) “結(jié)合 ”起來，實(shí)現(xiàn)對染色體上某一基因的定向修飾和改造，從而深入地了解基因的功能?；蚯萌胧腔虼虬屑夹g(shù)的一種，基因打靶技術(shù)是20世紀(jì) 80年代后半期發(fā)展起來的，一種按預(yù)期方式準(zhǔn)確改造生物遺傳信息的實(shí)驗(yàn)手段。通過基因敲入，可以研究特定基因在體內(nèi)的功能；也可以與之前基因的功能進(jìn)行比較；或?qū)⒄；蛞牖蚪M中置換突變基因以達(dá)到靶向基因治療的目的?？寺〈笃?DNA常應(yīng)用酵母人工染色體 (YAC)、細(xì)菌人工染色體 (BAC)等，可獲得 200kb以上的大 DNA片段，能攜帶包含完整的基因或多個(gè)基因，以及基因的所有外顯子，和附近的染色體調(diào)控區(qū)，為目的基因提供與其在正常染色體上一致的環(huán)境，保證了轉(zhuǎn)基因在正常細(xì)胞中的時(shí)空表達(dá)。當(dāng)前轉(zhuǎn)基因動(dòng)物所涉及的轉(zhuǎn)基因片段長度大多在幾十個(gè)kb以下，但是，隨著科學(xué)研究需要進(jìn)行 大片段 DNA、多基因或基因簇的轉(zhuǎn)基因 ?？烧{(diào)控的基因表達(dá)系統(tǒng)也是一種常用的方法： 例如四環(huán)素調(diào)控系統(tǒng)，該表達(dá)系統(tǒng)可使轉(zhuǎn)基因動(dòng)物體內(nèi)外源基因的表達(dá)受誘導(dǎo)劑（四環(huán)素）的調(diào)控，通過加入或去除誘導(dǎo)劑，就可以實(shí)現(xiàn)對外源基因表達(dá)時(shí)間及水平的控制。 雖然轉(zhuǎn)基因技術(shù)本身仍存在一些問題，但其在醫(yī)學(xué)研究中的重要地位是毋庸置疑的，隨著轉(zhuǎn)基因技術(shù)的不斷完善，其在醫(yī)學(xué)及生物學(xué)領(lǐng)域必將有更加廣泛的應(yīng)用。2. 利用轉(zhuǎn)基因技術(shù)建立的疾病動(dòng)物模型具有遺傳背景清楚、遺