【正文】 體中，使其獲得新的或更高水平的表達，通過細胞或個體生物性狀的變化來研究基因的功能。 其基本制作過程包括：轉基因表達載體的構建，外源基因的導入，轉基因動物的獲得和鑒定，轉基因動物品系的建立以及外源基因表達的鑒定。 雖然轉基因技術本身仍存在一些問題，但其在醫(yī)學研究中的重要地位是毋庸置疑的，隨著轉基因技術的不斷完善，其在醫(yī)學及生物學領域必將有更加廣泛的應用。當前轉基因動物所涉及的轉基因片段長度大多在幾十個kb以下，但是，隨著科學研究需要進行 大片段 DNA、多基因或基因簇的轉基因 。通過基因敲入，可以研究特定基因在體內的功能；也可以與之前基因的功能進行比較；或將正?；蛞牖蚪M中置換突變基因以達到靶向基因治療的目的。該技術的巧妙之處在于把胚胎干細胞技術和 DNA同源重組技術 “結合 ”起來，實現對染色體上某一基因的定向修飾和改造，從而深入地了解基因的功能。由于中靶的胚胎干細胞保持分化的全能性 , 因此它可以發(fā)育成為嵌合鼠的生殖細胞 , 使得經過定向改造的遺傳信息可以代代相傳。 1987年， Thompsson首次建立了完整的 ES細胞基因敲除的小鼠模型，此后基因敲除技術得到進一步的發(fā)展和完善，目前該技術已經成為研究基因功能最直接、最有效的方法之一。 該現象最早發(fā)現在轉基因植物中，后來這種現象在線蟲、真菌、果蠅、斑馬魚、小鼠早期胚胎中也有發(fā)現。1. RNA干涉技術可用來研究基因的功能目 錄RNAi的作用機制： 外源 dsRNA可直接被導入細胞，或者通過轉基因、病毒感染等方式進入細胞，并整合到基因組中獲得表達；各種來源的 dsRNA被核酸酶 RNaseⅢ 家族中，特異識別 dsRNA的 Dicer酶，以一種 ATP依賴的方式逐步切割成長約 21~23nt的雙鏈 小干擾 RNA(small interference RNA， siRNA)； siRNA識別 mRNA鏈上的同源區(qū)域之后，結合一個核酶復合物形成 RNA誘導的沉默復合體（RNAinduce silencing plex， RISC）； RISC定位到靶 mRNA轉錄本上，并在距離 siRNA 3’端 12個堿基的位置切割 mRNA。 若將 RNAi技術與 Cre/loxP重組系統(tǒng)以及基因表達調控系統(tǒng)相結合，建立轉基因動物模型，則不僅具有穩(wěn)定、可遺傳、可誘導等特點，而且無需使用胚胎干細胞技術和基因打靶技術，與基因敲除相比具有簡單、易操作、周期短等優(yōu)勢。 目 錄反義寡核苷酸引發(fā)基因沉默的機制：（ 1）可能是通過與靶 mRNA互補結合后以位阻效應抑制靶基因的翻譯；（ 2）也可能通過與雙鏈 DNA結合形成三股螺旋而抑制轉錄；（ 3）也不能排除通過激活細胞內的 Dicer酶進入 RNA干涉途徑而降解靶mRNA。目 錄 因此，單單應用 “反向遺傳學 ”不足以完成功能基因組學的任務，而基于 “正向遺傳學 ”的，從異常表型到特定基因突變的 隨機突變篩選策略 逐漸受到青睞。216。216。 基因捕獲技術的基本過程是： 將一含報告基因的 DNA載體隨機插入基因組，產生內源基因失活突變，通過報告基因的表達，提示插入突變的存在，以及內源基因的表達特點。216。 生物信息學 具有方便快捷和經濟的優(yōu)點，如何應用生物信息學技術充分利用已知數據和生物學知識，得到與目的基因功能有關的重要信息，預測基因的功能，進而制定實驗室研究方案，是現代生物醫(yī)學研究人員必備的技能。 小 結目 錄 Thank You!目 錄靜夜四無鄰，荒居舊業(yè)貧。 10:57:1310:57:1310:57Wednesday, March 24, 20231乍見翻疑夢，相悲各問年。 2023/3/24 10:57:1310:57:1324 March 20231做前，能夠環(huán)視四周；做時，你只能或者最好沿著以腳為起點的射線向前。 三月 2110:57:1310:57Mar2124Mar211世間成事，不求其絕對圓滿，留一份不足，可得無限完美。 三月 2110:57 上午 三月 2110:57March 24, 20231少年十五二十時，步行奪得胡馬騎。 10:57:1310:57:1310:573/24/2023 10:57:13 AM1越是沒有本領的就越加自命不凡。 三月 21三月 2110:57:1310:57:13March 24, 20231意志堅強的人能把世界放在手中像泥塊一樣任意揉捏。 10:57:13 上午 10:57 上午 10:57:13三月 21MOMODA POWERPOINTLorem ipsum dolor sit, eleifend nulla ac, fringilla purus. Nulla iaculis tempor felis amet, consectetur adipiscing elit. Fusce id urna blanditut cursus. 感謝您的下載觀看專家告訴。 三月 2110:57 上午 三月 2110:57March 24, 20231業(yè)余生活要有意義，不要越軌。 10:57:1310:57:1310:57Wednesday, March 24, 20231知人者智，自知者明。 10:57:13 上午 10:57 上午 10:57:13三月 21楊柳散和風，青山澹吾慮。 三月 21三月 2110:57:1310:57:13March 24, 20231意志堅強的人能把世界放在手中像泥塊一樣任意揉捏。 三月 21三月 21Wednesday, March 24, 2023很多事情努力了未必有結果，但是不努力卻什么改變也沒有。 24 三月 202310:57:13 上午 10:57:13三月 211比不了得就不比，得不到的就不要。 10:57:1310:57:1310:573/24/2023 10:57:13 AM1以我獨沈久，愧君相見頻。采用不同技術建立的模式生物是研究基因功能必不可少的工具，各種方法都具有各自的特點和局限性。目 錄 分析基因表達可以從 RNA和蛋白質水平上進行。目 錄216。通過對突變小鼠的深入研究、對突變基因定位及位置候選法克隆突變堿基就會得到突變基因的功能信息。216。目 錄 ENU誘變 是近年來發(fā)展起來的研究基因功能的新手段。反義寡核苷酸是指能與 mRNA互補配對的 RNA分子，長度一般為 20nt左右。目 錄缺點：1. 該技術可能對靶基因的相似序列發(fā)生作用，導致脫靶（ offtargeting）效應。 目前多采用 RNA聚合酶 Ⅲ 啟動子構建 siRNA的表達載體或表達框架，常用的 RNA聚合酶 Ⅲ 的啟動子有人、鼠 U6啟動子、人 H1啟動子。 RNAi是機體的一種天然防御機制，具有防御病毒感染、入侵等功能。 近年來， 條件性基因打靶（ conditional gene targeting）系統(tǒng)的建立，使得對基因靶位時間和空間上的操作更加明確，效果更加精確可靠，已達到對任何基因在不同發(fā)育階段和不同器官、組織的選擇性敲除。常用的方法主要有基因敲除基因沉默二、采用功能失活策略鑒定基因的功能目 錄 基因敲除（ gene knockout） 屬于基因打靶技術的一種，其操作步驟和原理與基因打靶技術相同。除基因敲入外，基因打靶還包括基因敲除、點突變、缺失突變、染色體組大片段刪除等。基因敲入是基因打靶技術的一種，基因打靶技術是20世紀 80年代后半期發(fā)展起來的，一種按預期方式準確改造生物遺傳信息的實驗手段?？寺〈笃?DNA常應用酵母人工染色體 (YAC)、細菌人工染色體 (BAC)等，可獲得 200kb以上的大 DNA片段，能攜帶包含完整的基因或多個基因，以及基因的所有外顯子，和附近的染色體調控區(qū)，為目的基因提供與其在正常染色體上一致的環(huán)境，保證了轉基因在正常細胞中的時空表達?？烧{控的基因表達系統(tǒng)也是一種常用的方法：