【正文】 的區(qū)域內(nèi)發(fā)生同源重組的原理，用含有正 負(fù)篩選標(biāo)記的打靶載體，對(duì)胚胎干細(xì)胞中的特定基因?qū)嵤按虬?”；2. 之后將 “中靶 ”的胚胎干細(xì)胞移植回小鼠囊胚 ( 受精卵分裂至 8個(gè)細(xì)胞左右即為囊胚 , 此時(shí)受精卵只分裂不分化 ) , 移植進(jìn)去的中靶胚胎干細(xì)胞鉆入囊胚胚層 , 與囊胚一起分化發(fā)育成相應(yīng)的組織和器官；3. 最后誕生出具有基因功能缺陷的 “嵌合鼠 ”。目 錄 研究者既可以將 siRNA導(dǎo)入特定細(xì)胞，在 細(xì)胞水平上研究基因的功能； 也可以通過(guò)轉(zhuǎn)基因的方法，在動(dòng)物體內(nèi)實(shí)現(xiàn)特異、穩(wěn)定、長(zhǎng)期地抑制靶基因的表達(dá)，從而在 整體水平 上研究基因的功能。同時(shí) , ENU的突變效率非常高 , 可以達(dá)到 %, 是其他突變手段的 10倍左右。結(jié)合基因功能獲得和失活技術(shù)，從正反兩方面對(duì)基因。 24 三月 202310:57:13 上午 10:57:13三月 211楚塞三湘接，荊門(mén)九派通。 2023/3/24 10:57:1310:57:1324 March 20231一個(gè)人即使已登上頂峰，也仍要自強(qiáng)不息。 10:57:1310:57:1310:573/24/2023 10:57:13 AM1成功就是日復(fù)一日那一點(diǎn)點(diǎn)小小努力的積累。 有許多技術(shù)可用來(lái)分析基因的表達(dá)，如何根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康暮蜅l件選擇最佳的實(shí)驗(yàn)方法是關(guān)鍵。ENU是一種化學(xué)誘變劑 , 它通過(guò)對(duì)基因組 DNA堿基的烷基化修飾 , 誘導(dǎo) DNA在復(fù)制時(shí)發(fā)生錯(cuò)配而產(chǎn)生突變。 目前利用 RNAi能夠在短時(shí)間內(nèi)高效特異地抑制靶基因表達(dá)的特點(diǎn)研究基因的功能已成為功能基因組學(xué)的熱點(diǎn)之一。216。（一）用轉(zhuǎn)基因技術(shù)獲得基因功能目 錄 轉(zhuǎn)基因動(dòng)物（ transgenic animal） 是指應(yīng)用轉(zhuǎn)基因技術(shù)培育出的攜帶外源基因，并能穩(wěn)定遺傳的動(dòng)物。目 錄常用蛋白 質(zhì) 互作網(wǎng) 絡(luò) 數(shù)據(jù) 庫(kù)目 錄三、復(fù)雜疾病的生物信息學(xué)研究策略 包括信息提取、分析和建模 癌癥、糖尿病、高血壓等復(fù)雜疾病對(duì)人類(lèi)健康影響巨大，這類(lèi)疾病的發(fā)病機(jī)制一般與多種遺傳或非遺傳因素，以及它們之間的相互作用有關(guān)，不能通過(guò)單基因、單通路、單層次的變化解釋。要想全面系統(tǒng)地解析這些復(fù)雜的生物網(wǎng)絡(luò)需要大量相關(guān)數(shù)據(jù)的積累，現(xiàn)代基因芯片、蛋白質(zhì)芯片等大規(guī)模數(shù)據(jù)采集技術(shù)大大加快了這一進(jìn)程。2．雙向電泳結(jié)合質(zhì)譜普遍用于蛋白質(zhì)表達(dá)譜的分析和鑒定目 錄第二節(jié) 生物信息學(xué)在預(yù)測(cè)基因功能中的應(yīng)用 Bioinformatics Application in Predicting Gene Function目 錄一、利用生物信息學(xué)方法進(jìn)行基因功能注釋(一）通過(guò)序列比對(duì)預(yù)測(cè)基因功能 序列比對(duì)是生物信息學(xué)最基本的分析技術(shù)之一，最常用的方法是將目的 DNA或蛋白質(zhì)序列與已知的 DNA和蛋白質(zhì)序列數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行比對(duì)，搜索到與目的序列高度同源的功能已知的基因或蛋白質(zhì)，用這些基因和蛋白質(zhì)預(yù)測(cè)目的基因和蛋白質(zhì)的功能。 其中 基因表達(dá)譜（ expression prifile）分析 是目前基因芯片應(yīng)用最多的一個(gè)方面，主要采用 cDNA芯片，基因表達(dá)譜芯片便于對(duì)不同狀態(tài)（如生理和病理?xiàng)l件）下的基因表達(dá)譜進(jìn)行比較，揭示 轉(zhuǎn)錄組（ transcriptome） 差異表達(dá)的規(guī)律，對(duì)探索發(fā)病機(jī)制、評(píng)價(jià)治療效果、篩選藥物靶標(biāo)具有重要意義。其中抗體對(duì)于蛋白質(zhì)靶點(diǎn)的特異性、種間交叉反應(yīng)、檢測(cè)系統(tǒng)的靈敏性以及細(xì)胞或組織的固定類(lèi)型是該方法的關(guān)鍵因素。目 錄216。是一種基于雜交原理分析 mRNA的方法，既可對(duì)mRNA進(jìn)行定量分析又可研究其結(jié)構(gòu)特征，靈敏度和特異性都很高。 目 錄核糖核酸酶保護(hù)實(shí)驗(yàn)原理示意圖目 錄216。常用于 mRNA的定量分析 216。216。（一）基因芯片和高通量測(cè)序技術(shù)可在基因水平高通量地分析基因表達(dá)目 錄2. 高通量測(cè)序技術(shù)是新一代基因表達(dá)譜分析方法 高通量測(cè)序技術(shù)可以一次對(duì)幾十萬(wàn)到幾百萬(wàn)個(gè)DNA分子片段進(jìn)行序列測(cè)定，從而快速獲得轉(zhuǎn)錄組或基因組的全貌 , 又被稱(chēng)為 深度測(cè)序 (deep sequencing)。局部比對(duì)搜索工具 BLAST是進(jìn)行序列比對(duì)的基本工具，它允許用戶(hù)選擇一條查詢(xún)序列與一個(gè)數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行比對(duì)，找到數(shù)據(jù)庫(kù)中與輸入的查詢(xún)序列相匹配的項(xiàng)。目前人們已經(jīng)利用生物技術(shù)和信息技術(shù)建立了各種生物網(wǎng)絡(luò)數(shù)據(jù)庫(kù)和網(wǎng)站，可為研究者提供基因調(diào)控、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、代謝途徑、蛋白質(zhì)相互作用等方面的信息。 以系統(tǒng)的觀點(diǎn)解釋復(fù)雜疾病中遺傳與環(huán)境的關(guān)系、描述復(fù)雜疾病中基因的特征、分析疾病基因型與表現(xiàn)型之間的關(guān)系，已成為生物信息學(xué)研究復(fù)雜疾病的基本觀點(diǎn)，針對(duì)復(fù)雜疾病的研究模式，也開(kāi)始從傳統(tǒng)的 “序列→ 結(jié)構(gòu) → 功能 ”向 “相互作用 → 網(wǎng)絡(luò) → 功能 ”轉(zhuǎn)變。 其基本制作過(guò)程包括：轉(zhuǎn)基因表達(dá)載體的構(gòu)建，外源基因的導(dǎo)入，轉(zhuǎn)基因動(dòng)物的獲得和鑒定，轉(zhuǎn)基因動(dòng)物品系的建立以及外源基因表達(dá)的鑒定。該技術(shù)的巧妙之處在于把胚胎干細(xì)胞技術(shù)和 DNA同源重組技術(shù) “結(jié)合 ”起來(lái)，實(shí)現(xiàn)對(duì)染色體上某一基因的定向修飾和改造，從而深入地了解基因的功能。1. RNA干涉技術(shù)可用來(lái)研究基因的功能目 錄RNAi的作用機(jī)制： 外源 dsRNA可直接被導(dǎo)入細(xì)胞，或者通過(guò)轉(zhuǎn)基因、病毒感染等方式進(jìn)入細(xì)胞，并整合到基因組中獲得表達(dá)；各種來(lái)源的 dsRNA被核酸酶 RNaseⅢ 家族中，特異識(shí)別 dsRNA的 Dicer酶，以一種 ATP依賴(lài)的方式逐步切割成長(zhǎng)約 21~23nt的雙鏈 小干擾 RNA(small interference RNA， siRNA)； siRNA識(shí)別 mRNA鏈上的同源區(qū)域之后，結(jié)合一個(gè)核酶復(fù)合物形成 RNA誘導(dǎo)的沉默復(fù)合體（RNAinduce silencing plex， RISC）； RISC定位到靶 mRNA轉(zhuǎn)錄本上，并在距離 siRNA 3’端 12個(gè)堿基的位置切割 mRNA。216。 生物信息學(xué) 具有方便快捷和經(jīng)濟(jì)的優(yōu)點(diǎn)，如何應(yīng)用生物信息學(xué)技術(shù)充分利用已知數(shù)據(jù)和生物學(xué)知識(shí)，得到與目的基因功能有關(guān)的重要信息，預(yù)測(cè)基因的功能，進(jìn)而制定實(shí)驗(yàn)室研究方案，是現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)研究人員必備的技能。 三月 2110:57:1310:57Mar2124Mar211世間成事，不求其絕對(duì)圓滿(mǎn)，留一份不足，可得無(wú)限完美。 10:57:13 上午 10:57 上午 10:57:13三月 21MOMODA POWERPOINTLorem ipsum dolor sit, eleifend nulla ac, fringilla purus. Nulla iaculis tempor felis amet, consectetur adipiscing elit. Fusce id urna blanditut cursus. 感謝您的下載觀看專(zhuān)家告訴。 三月 21三月 2110:57:1310:57:13March 24, 20231意志堅(jiān)強(qiáng)的人能把世界放在手中像泥塊一樣任意揉捏。采用不同技術(shù)建立的模式生物是研究基因功能必不可少的工具，各種方法都具有各自的特點(diǎn)和局限性。216。 目前多采用 RNA聚合酶 Ⅲ 啟動(dòng)子構(gòu)建 siRNA的表達(dá)載體或表達(dá)框架，常用的 RNA聚合酶 Ⅲ 的啟動(dòng)子有人、鼠 U6啟動(dòng)子、人 H1啟動(dòng)子。除基因敲入外，基因打靶還包括基因敲除、點(diǎn)突變、缺失突變、染色體組大片段刪除等。2. 利用轉(zhuǎn)基因技術(shù)建立的疾病動(dòng)物模型具有遺傳背景清楚、遺傳物質(zhì)改變簡(jiǎn)單、更自然更接近疾病的真實(shí)癥狀等優(yōu)點(diǎn)。② 生物信息分析及多層次信息的融合：即從不同層次對(duì)疾病的遺傳復(fù)雜性進(jìn)行分析，對(duì)不同遺傳網(wǎng)絡(luò)間的映射算法進(jìn)行研究，進(jìn)而將 SNPs、基因、蛋白質(zhì)等不同水平的信息進(jìn)行融合。一個(gè)基因的表達(dá)既影響其他的基因，又受其他基因的影響，基因之間相互促進(jìn)、相互抑制，構(gòu)成一個(gè)復(fù)雜的基因調(diào)控網(wǎng)絡(luò)。 目 錄程序 查詢(xún) 序列類(lèi) 型 數(shù)據(jù) 庫(kù)類(lèi) 型 注BLASTN DNA DNABLASTP 蛋白 質(zhì) 蛋白 質(zhì)