動(dòng)物重要病原菌功能基因組與分子致病機(jī)理分析報(bào)告doc(參考版)
2025-07-20 18:07本頁面
【正文】 。1）建立基因組多態(tài)性數(shù)據(jù)庫、流行菌株菌種庫，總結(jié)結(jié)核分枝桿菌、副豬嗜血桿菌和豬鏈球菌在我國流行的基因型與血清型的動(dòng)態(tài)變化規(guī)律，及結(jié)核菌在人和牛之間的傳播規(guī)律與機(jī)制；2）初步揭示結(jié)核分枝桿菌重要DNA復(fù)制修復(fù)基因的功能；3）獲得豬鏈球菌蛋白質(zhì)互作網(wǎng)絡(luò)，驗(yàn)證23個(gè)與重要子網(wǎng)絡(luò)，發(fā)現(xiàn)2－3個(gè)新基因病解讀其功能，預(yù)測12個(gè)潛在的藥物新靶標(biāo)；4）臨床樣本驗(yàn)證蛋白質(zhì)乙?；瘜?xì)菌耐藥性與毒力的影響；5）確定抑制劑的作用類型；獲得12種免疫原性強(qiáng)的糖鏈；6）初步闡明結(jié)核分枝桿菌感染及轉(zhuǎn)歸的機(jī)制；7）總結(jié)分枝桿菌免疫逃逸和慢性炎癥的發(fā)生機(jī)制，豬鏈球菌和副豬嗜血桿菌的免疫應(yīng)答與炎癥發(fā)生機(jī)制。6）以實(shí)驗(yàn)動(dòng)物為模型研究結(jié)核分枝桿菌感染、發(fā)病、發(fā)生發(fā)展與轉(zhuǎn)歸的機(jī)制。2）結(jié)核分枝桿菌重要DNA復(fù)制修復(fù)基因突變菌株在不同生長條件下的差異表達(dá)分析；3）繪制豬鏈球菌全局性蛋白質(zhì)相互作用網(wǎng)絡(luò)，進(jìn)一步鑒定重要互作蛋白的功能，預(yù)測和鑒定與生長、代謝、毒力相關(guān)的新功能基因及蛋白質(zhì)；4）研究蛋白質(zhì)乙?；瘜ε７种U菌毒力和藥物作用機(jī)理的影響。2）完成豬鏈球菌互作蛋白的基因測序分析，鑒定500個(gè)左右蛋白互作關(guān)系，完成1015個(gè)互作蛋白的共沉淀和功能分析；得到結(jié)核分枝桿菌DNA復(fù)制修復(fù)基因敲除菌株及超量表達(dá)菌株；建立牛分枝桿菌蛋白質(zhì)乙?；瘜?xì)菌耐藥性的關(guān)聯(lián)性及立蛋白質(zhì)乙酰化與細(xì)菌毒力的關(guān)聯(lián)性；3）獲得關(guān)鍵基因及多糖鏈的免疫原性的數(shù)據(jù)；完成58個(gè)酶底物類似物的合成；獲得部分底物類似物的活性數(shù)據(jù)；4）初步闡明豬鏈球菌、副豬嗜血桿菌與豬圓環(huán)病毒2型等病原的協(xié)同致病機(jī)制；5）揭示病原菌在樹突狀細(xì)胞內(nèi)存活的調(diào)節(jié)機(jī)制；牛分枝桿菌及其抗原引起自噬的分子機(jī)制；確定810個(gè)豬鏈球菌胞外分子與宿主細(xì)胞互作及對信號(hào)傳導(dǎo)通路的影響；闡明部分豬鏈球菌免疫刺激分子的作用機(jī)理；確定部分副豬嗜血桿菌毒素分子的致病作用；6）發(fā)表SCI論文1520篇，申請/獲得專利45項(xiàng)。1）獲得150株左右分枝桿菌，并完成分型鑒定，同時(shí)獲得基因組的完成圖及注釋信息。4）比較豬鏈球菌、副豬嗜血桿菌與其它病原混合感染后對宿主免疫系統(tǒng)的影響及致病力的變化。第四年1）繼續(xù)獲得三種細(xì)菌流行病學(xué)樣本，進(jìn)行細(xì)菌分離鑒定，分型，流行環(huán)節(jié)調(diào)研與跟蹤，耐藥性、毒力和基因組序列變異的分析；2）對鑒定的豬鏈球菌相互作用共轉(zhuǎn)化子質(zhì)粒進(jìn)行大規(guī)模測序，并對發(fā)現(xiàn)的部分重要互作蛋白進(jìn)行共沉淀和功能分析，編制蛋白網(wǎng)絡(luò)處理軟件系統(tǒng)；完成結(jié)核分枝桿菌重要DNA復(fù)制修復(fù)基因敲除菌株及超量表達(dá)菌株的構(gòu)建；研究乙?；瘜λ幬镒饔脵C(jī)理和對牛分枝桿菌毒力的影響。1）獲得160株左右分枝桿菌，并完成分型鑒定；對所收集菌株進(jìn)行全基因組掃描，每個(gè)菌株獲得50倍覆蓋率的序列；獲得320株左右副豬嗜血桿菌分離株，完成分型鑒定工作；獲得320株左右豬鏈球菌分離株，完成分型鑒定和毒力因子表型鑒定工作。2）完成近2000個(gè)豬鏈球菌ORF的克隆，進(jìn)行文庫雙雜交篩選；得到豬鏈球菌蛋白質(zhì)表達(dá)文庫，獲得2030個(gè)表達(dá)純化的豬鏈球菌蛋白質(zhì)；完成結(jié)核分枝桿菌DNA代謝蛋白質(zhì)亞網(wǎng)絡(luò)的構(gòu)建，得到23個(gè)重要DNA復(fù)制修復(fù)基因；完成牛分枝桿菌蛋白質(zhì)乙酰化去乙?；┳V和乙酰化位點(diǎn)鑒定；3）建立酶活性測定方法，完成關(guān)鍵基因的酶特性分析；得到關(guān)鍵基因的3D結(jié)構(gòu)；完成5個(gè)糖基轉(zhuǎn)移酶基因的克隆與表達(dá)；4）建立豬鏈球菌、副豬嗜血桿菌突破血腦屏障的細(xì)胞模型；5）了解結(jié)核病發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)歸過程中炎性因子的變化規(guī)律；篩選35種牛分枝桿菌免疫應(yīng)答或逃逸新蛋白；純化5060個(gè)豬鏈球菌表面蛋白和分泌蛋白，并以部分重組蛋白為誘餌篩選出宿主的相互作用蛋白；表達(dá)和純化得到可以刺激宿主細(xì)胞產(chǎn)生炎性因子的蛋白質(zhì)，并提取非蛋白組份；完成SILAC實(shí)驗(yàn)并驗(yàn)證其結(jié)果；鑒定5個(gè)副豬嗜血桿菌毒素分子，表達(dá)純化毒素蛋白；6）發(fā)表SCI論文1215篇，申請專利23項(xiàng)。4）建立豬鏈球菌、副豬嗜血桿菌突破血腦屏障細(xì)胞模型；研究這兩種細(xì)菌主要毒力因子與宿主細(xì)胞互作；5）研究結(jié)核病發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)歸過程中炎性相關(guān)因子的變化；篩選和鑒定牛分枝桿菌的免疫應(yīng)答與免疫逃避相關(guān)蛋白；構(gòu)建豬鏈球菌表面蛋白和分泌蛋白的重組表達(dá)文庫，并以部分細(xì)菌蛋白為誘餌篩選宿主的相互作用蛋白；重組表達(dá)所鑒定到的蛋白組份并提取相應(yīng)的非蛋白組份；確定與豬鏈球菌感染相關(guān)的宿主免疫細(xì)胞信號(hào)通路；鑒定副豬嗜血桿菌毒素分子。第二年1）獲得三種細(xì)菌流行病學(xué)樣本，進(jìn)行細(xì)菌分離鑒定，分型，流行環(huán)節(jié)調(diào)研與跟蹤，耐藥性、毒力和基因組序列變異的分析；2）構(gòu)建篩選用細(xì)菌雙雜交重組質(zhì)粒，豬鏈球菌文庫的雙雜交篩選和基因的大規(guī)模表達(dá)分析及純化；進(jìn)一步完善結(jié)核分枝桿菌DNA代謝蛋白質(zhì)亞網(wǎng)絡(luò)的構(gòu)建，并對該網(wǎng)絡(luò)進(jìn)行系統(tǒng)分析；搜尋牛分枝桿菌乙?；鞍滓约癿bSir2的底物蛋白，并進(jìn)行乙?；鞍准捌湟阴；稽c(diǎn)的確認(rèn)。3）結(jié)核分枝桿菌：研究人結(jié)核分枝桿菌對牛的致病性；篩選牛分枝桿菌強(qiáng)弱株的差異蛋白；結(jié)核分枝桿菌DNA代謝蛋白質(zhì)亞網(wǎng)絡(luò)的構(gòu)建；表達(dá)純化并鑒定去乙?；竚bSir2；4）豬鏈球菌：細(xì)菌雙雜交載體和表達(dá)載體改造及豬鏈球菌ORF組克??；構(gòu)建豬鏈球菌表面蛋白和分泌蛋白的重組表達(dá)文庫；從病原菌胞外分子蛋白質(zhì)、多糖等）中篩選可誘導(dǎo)宿主細(xì)胞炎性因子釋放的組份；利用SILAC技術(shù)鑒定出病原菌感染過程中宿主細(xì)胞內(nèi)磷酸化水平改變蛋白；5）分析副豬嗜血桿菌強(qiáng)弱毒株的差異。因此，五個(gè)課題緊密聯(lián)系，相互支持，共同服務(wù)于工程總體目標(biāo)的實(shí)現(xiàn)。課題2和課題3分別通過病原菌基因、蛋白質(zhì)和表面多糖的結(jié)構(gòu)、功能及相互作用的研究，闡明三種病原菌的重要基因、蛋白質(zhì)和多糖的結(jié)構(gòu)、功能及其調(diào)控網(wǎng)路，同時(shí)為課題4和課題5的研究提供重要的功能基因、蛋白質(zhì)和表面多糖。課題設(shè)置的思路：緊密圍繞細(xì)菌性傳染病的三要素病原菌、宿主和環(huán)境及其相互作用關(guān)系開展研究。4）
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