db51t1210-20xx馬鈴薯x病毒檢驗(yàn)鑒定技術(shù)規(guī)程doc(參考版)
2025-07-18 11:32本頁面
【正文】 X。電泳緩沖液1TAE適量，100 V，電泳30 min。L的溴酚藍(lán)上樣緩沖液混勻，以及2 181。L）11414 反應(yīng)程序 反應(yīng)程序?yàn)椋?4 ℃ 3 min；94 ℃ 30 sec，59 ℃ 30 sec，72 ℃ 30 sec，30次循環(huán)；72 ℃ 10 min；4 ℃保存?！?PCR反應(yīng) 反應(yīng)體系?！?馬鈴薯X病毒RT反應(yīng)體系反應(yīng)物模板RNAP2RNasinRT Ehancer5 RT bufferdNTPMMLV無RNA酶的ddH2O加入量（181。L無RNA酶的雙蒸水，室溫放置2 min，12000 rpm離心2 min，得到RNA溶液。將吸附柱放入一個(gè)新的RNasefree離心管中，向膜中央加入50 181。L漂洗液RW，12000 rpm離心1 min，棄廢液，將吸附柱放回收集管中，重復(fù)漂洗一次。L去蛋白液RW1，12000 rpm離心1 min，棄廢液，將吸附柱放回收集管中。混勻，得到的溶液和沉淀一起轉(zhuǎn)入CR吸附柱中，12000 rpm離心1 min,棄掉收集管中的廢液，將吸附柱放回收集管中。L），渦旋劇烈震蕩5 min使其混勻。稱取50 mg ～100 mg的馬鈴薯葉片或莖桿（薯塊需經(jīng)發(fā)芽后切取幼芽），在液氮中迅速研磨成粉末狀， mL的EP管中，加入500 181?！?結(jié)果測定和記錄用酶聯(lián)檢測儀測定并記錄光密度值（OD值）?！?終止反應(yīng)顯色后在每孔中加入50 μL 終止液?！?顯色每孔加入100μL底物溶液。置于保濕容器中室溫孵育2 h。洗板完成后將酶聯(lián)板倒置于吸水紙上，吸干反應(yīng)孔中殘留液體。 洗板在每個(gè)反應(yīng)孔加滿洗滌液，迅速倒出，再加滿洗滌液，靜置3 min后將洗滌液迅速倒出。設(shè)置陽性對照、馬鈴薯健康組織研磨液陰性對照和包被緩沖液空白對照。剩余樣品于20℃冰箱保存?zhèn)洳?，在制樣時(shí)應(yīng)注意防止樣品的交叉污染。洗板完成后將酶聯(lián)板倒置于吸水紙上，吸干反應(yīng)孔中殘留液體。BB附 錄 B （資料性附錄）馬鈴薯X病毒DASELISA檢驗(yàn)程序 包被抗體 包被向酶聯(lián)反應(yīng)板每孔加入100 μL用包被緩沖液稀釋的PVX捕捉抗體，將酶聯(lián)反應(yīng)板置于保濕容器中，室溫孵育4 h 或4 ℃冰箱過夜。馬鈴薯X病毒是一種危害嚴(yán)重的病毒，也是傳播最為廣泛的一種病毒，遍布全世界馬鈴薯種植區(qū)，可引起10%以上的減產(chǎn)，田間常與其他病毒混和感染導(dǎo)致馬鈴薯的毀滅性減產(chǎn)。在自然條件下主要靠植株不同部位之間直接接觸和帶病種薯傳播。AA附 錄 A （資料性附錄）馬鈴薯X病毒基本信息 分類馬鈴薯
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