植物組織培養(yǎng)中的褐變現(xiàn)象及其防止措施(參考版)
2025-06-27 03:34本頁面
【正文】 。[12] 姚麗娟,徐曉薇,林紹生,[J].北方園藝， 2006(4):162163．[5] 張小紅,[J] .陜西林業(yè)科技 ,2005,4.[6] 孫敬三,[M].北京:科學(xué)出版社1995.[7] 趙伶俐,[J].西北農(nóng)業(yè)學(xué)報,2006, 15(5).[1] 石碧,[M].北京:科學(xué)出版社2000.[2] 顧小平,[J].,19 (1).[3] [J].河南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報,1999,33(1).由于植物種甚至品種，由于基因型不同所產(chǎn)生的酚類物質(zhì)種類和量都有不同，而不同的酚類物質(zhì)對細(xì)胞的毒害作用機(jī)理不一樣且比較復(fù)雜，從而造成在培養(yǎng)過程中解決辦法的多樣化。測定褐變組織中具體多酚類物質(zhì)種類及其相關(guān)基因研究的報道極少。目前國內(nèi)植物組織培養(yǎng)關(guān)于褐變的研究文獻(xiàn)中，多數(shù)是針對具體材料進(jìn)行試驗性處理，處理的抗褐變物質(zhì)種類多樣，且各種試劑配比、濃度、及具體作用差別較大。有試驗表明，添加10%椰子水可提高洋蘭原球莖的存活率，減少褐變死亡現(xiàn)象[12]。把培養(yǎng)體切面浸入培養(yǎng)基中，減少了褐化發(fā)生的表面積，且較大組織切塊的創(chuàng)傷面積相對較小，有利于保持轉(zhuǎn)培初期切塊淺表層細(xì)胞或組織處于原來的生長發(fā)育狀態(tài)，從而減輕了因切面褐變帶來的毒害作用。 %左右[11]。PVP是酚類物質(zhì)的專一吸附劑，其對酚的結(jié)合強(qiáng)于酶蛋白的結(jié)合，因而可使酶從多酚 一酶復(fù)合物中結(jié)合出來，從而使酶的抑制消除。在培養(yǎng)基中加入吸附劑可以抑制褐變。還原性抗氧化劑在使用時應(yīng)注意保持其還原性，因此一般最好過濾除菌使用，而不與培養(yǎng)基一起高溫滅菌。也可在有抗氧化劑或增效劑的無菌溶液中切割材料后再接種，這類處理適用于外植體切割后快速氧化的材料。目前在培養(yǎng)基中一般單獨或組合添加VC、VE、β胡蘿卜素、硫代硫酸鈉、巰基乙醇、酒石酸、檸檬酸、亞硫酸鹽、植酸、二硫蘇糖醇等。對于培養(yǎng)過程中多酚類物質(zhì)不斷合成的材料在培養(yǎng)中要進(jìn)行轉(zhuǎn)移外植體到新鮮培養(yǎng)基中，一般轉(zhuǎn)移周期在2周左右。組織培養(yǎng)的一些材料產(chǎn)生水解型多酚，這類外植體在培養(yǎng)過程中會由于多酚類物質(zhì)分泌到培養(yǎng)基中使培養(yǎng)基的顏色加深，并進(jìn)一步氧化為醌類物質(zhì)，而多酚類物質(zhì)及相應(yīng)的醌類物質(zhì)會抑制多種酶的活性，從而阻礙外植體對營養(yǎng)物質(zhì)的主動吸收和轉(zhuǎn)化。隨著pH增高，多酚被氧化的作用增強(qiáng)。易發(fā)生褐變的外植體，可先于低溫(4～20℃)預(yù)培養(yǎng)數(shù)小時，也可于黑暗或弱光照下預(yù)培養(yǎng)數(shù)日后再轉(zhuǎn)入正常培養(yǎng)條件下培養(yǎng)。培養(yǎng)早期的培養(yǎng)
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