植物組織培養(yǎng)試驗(參考版)
2025-07-03 04:42本頁面
【正文】 株試管苗，最后統(tǒng)計成活率？。移栽好的營養(yǎng)缽排在迷霧苗床內(nèi)或排在溫室內(nèi)，開始保持空氣相對濕度80%以上，以后逐步降低溫度至自然條件，大約20天后進(jìn)行正常管理，待新葉長以后，可在葉面噴施營養(yǎng)液作為補(bǔ)充營養(yǎng)，幼苗在營養(yǎng)缽內(nèi)生長兩個月后，即可移入露地苗輔中。第三步：經(jīng)鍛煉過的幼苗，移入裝有馴化基質(zhì)的營養(yǎng)缽內(nèi)，營養(yǎng)土的成分：泥炭或蛭石3份，珍珠巖1份混合均勻。四、方法和步驟：第一步：移栽前，打開培養(yǎng)瓶的瓶蓋紙，放在溫室內(nèi)給以四萬Lux以下的光照，溫度20攝氏度左右，進(jìn)行煉苗7~10天。三、說明：當(dāng)葡萄無菌苗長到高5~10cm時即可移栽入土，由于在室內(nèi)人工光照下培養(yǎng)的試管苗十分幼嫩，因此要成功的大量移栽試管苗，必須掌握以下幾個環(huán)節(jié)：，要求節(jié)間短而粗壯、葉片大而濃綠，展葉四片以上，沒有水漬壯葉，具有三條以上的根，根尖為黃白色，不發(fā)黑。目的要求：學(xué)習(xí)試管苗的移栽方法，提高試管苗的成活率。五、作業(yè)：定時觀察：胚狀體和愈傷組織的分化情況。誘導(dǎo)培養(yǎng)：將培養(yǎng)瓶置于溫度25~30%，光強(qiáng)1500~2000Lux,每天光照相館0小時的培養(yǎng)室中，誘導(dǎo)形成體胚或愈傷組織。培養(yǎng)基準(zhǔn)備：采用MS培養(yǎng)基 + 2，4D +KIN + IAA4mg/L + 蔗糖38%。本實驗在培養(yǎng)前先采集處于該時期的花蕾利用醋酸洋紅壓片法進(jìn)行鏡檢，選取適宜的花粉發(fā)育時期。利用花藥組織進(jìn)行單倍體育種對多年生果樹和觀賞樹木而言比一、二年生植物具有特殊的意義，因為多年生木本植物的品種幾乎都是雜合體，加之又多為異花授粉，難以純化，通過這一途徑獲得得單倍體后再使之加倍，就能得到純合二倍體，從而為準(zhǔn)確研究性狀遺傳規(guī)律和雜種優(yōu)勢的利用打下基礎(chǔ)。各種滅菌、接種、培養(yǎng)用具和器皿等。園藝植物的花藥培養(yǎng)一、目的要求：學(xué)習(xí)園藝植物花藥的采集、滅菌、接種、培養(yǎng)等一整套花藥培養(yǎng)的具體方法。試述利用莖尖培養(yǎng)為什么能夠脫除病毒。五、作業(yè)：每人接種莖尖4個，要求二個剝至帶2~3個葉原基的生長點(diǎn)。（4）培養(yǎng)：接種的莖尖置于培養(yǎng)室內(nèi)培養(yǎng)，溫度25攝氏度177。生長點(diǎn)剝離方法：在解剖鏡下，一手用鑷子夾住無菌的莖尖，一手用較細(xì)的解剖針剝掉生長點(diǎn)外圍的葉片，直至達(dá)到晶瑩發(fā)亮的光滑頂為止，然后用解剖刀仔細(xì)切取所需莖尖，隨即接種在預(yù)先配制好的培養(yǎng)基上。四、方法和步驟（以葡萄為例）：（1）選擇品種性狀典型的，生長健壯無病蟲的葡萄植株，取其已萌動的頂芽或腋芽，或剪下3~5cm生長的莖頂端，剝?nèi)ゴ笕~片，先在流水中沖流2~3小時，吸干水分，再在70%乙醇中浸半分鐘，%升汞滴加1~2滴吐溫~20的溶液中滅菌5分鐘，用無菌水沖洗3~5次。莖尖培養(yǎng)根據(jù)其目的不同，取材的大小有較大的差異，較小的僅為十至幾十微米的莖尖分生組織，較大的可利用幾十毫米的莖尖甚至更大的芽，但一般講莖尖愈?。ㄐ〉?0——100微米的生度點(diǎn)）培養(yǎng)難度就越大，有的需要一年或更長的時間才能成苗，莖尖越大培養(yǎng)越易獲得成功。二、材料用具：超凈工作臺、雙筒解剖鏡、剪刀、鑷子、解剖針、解剖刀、廣口瓶、燒杯、培養(yǎng)皿、酒精燈、升汞、酒精、吐溫——無菌水、培養(yǎng)基、記號筆、紗布、酒精棉球、溫室盆栽葡萄、菊花的側(cè)芽、不結(jié)球白菜的側(cè)芽等材料。數(shù)據(jù)處理與分析以下為一些數(shù)據(jù)記錄公式：啟動率＝未污染外植體啟動數(shù)/未污染外植體總數(shù)100％污染率＝接種污染數(shù)/接種總數(shù)100%死亡率＝未污染死亡數(shù)/未污染總數(shù)100％褐化率＝未污染褐化數(shù)/未污染總數(shù)100％愈傷組織誘導(dǎo)率＝產(chǎn)生愈傷組織的塊數(shù)/接種的總塊數(shù)100％其中，有部分外植體并未完全褐化，也長出部分愈傷組織，對于此種外植體，記錄數(shù)據(jù)時，既將其當(dāng)成褐化外植體同時也當(dāng)成產(chǎn)生愈傷的外植體。 試驗觀察與統(tǒng)計2176。另一部分直接放在24176。C下,暗培養(yǎng)15天左右，再進(jìn)行光暗交替培養(yǎng)。C177。葉片的培養(yǎng)條件分兩部分進(jìn)行培養(yǎng)，從而尋找哪種培養(yǎng)條件適合葉片愈傷組織的誘導(dǎo)，以下為兩中對比：a2176。溫度24176。 培養(yǎng)條件葉片正面朝上將一部分反面用解剖刀處理過的小葉片接種在培養(yǎng)基上，反面接觸培養(yǎng)基，而正面朝上接入培養(yǎng)基；另一部分反面沒有用解剖刀劃過傷口的葉片也接種在同樣的培養(yǎng)基上，進(jìn)行比較；接種好后即可將它們放在培養(yǎng)室中培養(yǎng)架上培養(yǎng)。葉片接種進(jìn)行兩種接種方法的對比：a莖段的接種莖段也全部采取斜插入培養(yǎng)基的接種方法進(jìn)行接種。芽的接種芽全部采取斜插入培養(yǎng)基的接種方法進(jìn)行接種。滅菌流程先用75%酒精浸泡20s，然后用無菌水清洗一次，倒去無菌水后，%升汞+12滴吐溫滅菌，滅菌過程中不斷搖動廣口瓶使外植體充分接觸滅菌劑，然后，倒出滅菌劑，用無菌水清洗外植體56次，直到外植體上沒有泡沫即可。滅菌時間75%酒精滅菌時間30s，%升汞滅菌時間為3min、5min、6min這三個梯度。滅菌試劑選用75%酒精+%升汞這一組合進(jìn)行滅菌。滅菌前應(yīng)先用毛筆蘸取吐溫或者洗潔精來回刷洗其正反兩面，應(yīng)輕輕刷洗，洗潔精或者吐溫的量不能太多，加1滴既可，加入過多會使葉片出現(xiàn)類似于被折疊后產(chǎn)生的變色以及變薄現(xiàn)象，可能原因是過量的清潔劑會使葉片細(xì)胞受到一定損傷。cb滅菌試劑金銀花幼嫩莖段的滅菌滅菌前莖段預(yù)處理：由于樹型金銀花莖段均為中空結(jié)構(gòu)，且表面披一層較致密絨毛，故在取材時不應(yīng)將材料剪的過短，防止外界細(xì)菌以及真菌通過中空管道直接進(jìn)入莖段內(nèi)部，從而導(dǎo)致滅菌不徹底，另外，由于表面披絨毛，容易沾染微生物，且在滅菌過程中滅菌劑不能很好的與精短表面接觸，故在滅菌處理前可用毛筆蘸取少許洗潔精或者吐溫來回輕輕刷洗其表面絨毛，減少其染菌幾率。②75%酒精+30%次氯酸鈉先用75%酒精浸泡30s，然后用無菌水清洗一次，倒去無菌水后，再用30%升汞+1～2滴吐溫滅菌，滅菌過程中不斷搖動廣口瓶使外植體充分接觸滅菌劑，然后，倒出滅菌劑，用無菌水清洗外植體56次，直到外
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