【正文】 最后，此外還要感謝王依濤和實(shí)驗(yàn)組的其他成員。突變，2005，17(1):27—28.[25] 李德紅，潘瑞熾. 水楊酸在植物體內(nèi)的作用[J]. 植物生理學(xué)通訊， 1995，31(2):144149.[26] 孟春曉，高政權(quán). 外源赤霉素對(duì)雨生紅球藻中蝦青素積累的影響[J]. 水產(chǎn)科學(xué)，2007， 26 (5) : 249 254.[27] 孟春曉， 高政權(quán). 外源脫落酸(ABA)對(duì)雨生紅球藻中蝦青素積累的影響[J]. 黑龍江畜牧獸醫(yī)，2007(7) : 68 69.[28] 高政權(quán)，孟春曉. 外源乙烯利對(duì)雨生紅球藻中蝦青素積累的影響[J]. 食品科學(xué)，2007，28(10) : 376 380.[29] 高政權(quán)，孟春曉，劉濤. 6芐氨基嘌呤對(duì)雨生紅球藻中蝦青素積累的影響[J] . 水利漁業(yè)，2007，27(6):21 23,26.[30] 高政權(quán)， 孟春曉，車(chē)青. 添加萘乙酸(NAA)對(duì)雨生紅球藻中蝦青素積累的影響[J]. 黑龍江畜牧獸醫(yī)，2007(11):59 62.[31] 高政權(quán)，孟春曉，刁英英. 施用水楊酸對(duì)雨生紅球藻中蝦青素積累的影響[J]. 水產(chǎn)科學(xué)， 2007，26(7):377 380.[32] 孟春曉，高政權(quán)，等 赤霉素對(duì)鹽藻生物量與物質(zhì)積累的影響[J]. 江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué)，2010(5) : 345347.[33] 孟春曉. 雨生紅球藻中蝦青素合成關(guān)鍵酶基因的順式作用元件研究[D]. 青島: 中國(guó)科學(xué)院研究生院(海洋研究所)， 2005[34] 曾正兵,，郭金耀，楊曉玲. NAA對(duì)鹽藻生長(zhǎng)與物質(zhì)積累的影響[J]. 江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué)，2008（1）:182184致 謝致 謝衷心感謝孟春曉、高政權(quán)老師對(duì)我的精心指導(dǎo)，他們的言傳身教和治學(xué)嚴(yán)謹(jǐn)?shù)目蒲袘B(tài)度、熱情誠(chéng)懇的待人態(tài)度將會(huì)對(duì)我今后的學(xué)習(xí)和工作產(chǎn)生深遠(yuǎn)的影響。參考文獻(xiàn)參考文獻(xiàn)[1] 陳峰， 姜悅. 微藻生物技術(shù)[M] . 北京：中國(guó)輕工業(yè)出版社，1999,14 16.[2] 朱秀靈，車(chē)振明，等. β－胡蘿卜素的生理功能及其提取技術(shù)的研究進(jìn)展[J]. 廣州食品工業(yè)科技，2004(20):158162[3] 蔡明剛，王杉霖. 利用雨生紅球藻生產(chǎn)蝦青素的研究進(jìn)展[J]. 臺(tái)灣海峽 2003，2（4）:537542[4] 顏秀花，王正武，王仲妮. β胡蘿卜素的應(yīng)用及研究進(jìn)展[J]. 食品與藥品，2007（6）：5861[5] 曾強(qiáng)松，童海寶，徐靜安. 三孢布拉霉發(fā)酵生產(chǎn)β胡蘿卜素的工藝研究[J]. 工業(yè)微生物，2002，32（4）：710 [6] 廖春麗，余曉斌，劉海麗. 響應(yīng)面法優(yōu)化β胡蘿卜素液體發(fā)酵培養(yǎng)基[J]. 食品與生物技術(shù)學(xué)報(bào)，2007，26（3）：9599[7] 李臣，阮榕生. 紅酵母的性質(zhì)及其應(yīng)用研究[J]. 農(nóng)產(chǎn)品加工，2006（5）：2023[8] 趙萌萌，王衛(wèi)衛(wèi)，侯小娟. 螺旋藻突變株MS3β胡蘿卜素提取的研究[J]. 蘭州交通大學(xué)學(xué)報(bào)，2006，25（4）：131133[9] 江志琴，朱心強(qiáng). 高劑量β 胡蘿卜素對(duì)大量吸煙者肺癌的不利影響[J]. 國(guó)外醫(yī)學(xué): 衛(wèi)生學(xué)分冊(cè)， 2005， 32 ( 5 ): 265 – 269[10] 李蕾， 蔭士安. 影響蔬菜中β胡蘿卜素轉(zhuǎn)化為維生素A的因素[J]. 國(guó)外醫(yī)學(xué):衛(wèi)生學(xué)分冊(cè)，2005，32 ( 1 ) : 27 30[11] ChidambaraMurthy K. N， Vanitha A.， Rajesha J et al. Invivo antioxidant activity of carotenoids from Dunaliella salina — a green microalga [J]. Life Sciences, 2005: 76 ( 12 ) : 1381 1390[12] 王春波， 藍(lán)孝貞， 張魯平，等. 鹽藻β胡蘿卜素對(duì)實(shí)驗(yàn)性動(dòng)脈粥樣硬化預(yù)防作用的研究[J]. 中國(guó)海洋藥物，1998， (1) : 7 12[13] 陳雪紅，劉先榮，張柱海，等. 鹽藻β胡蘿卜素促進(jìn)學(xué)習(xí)和記憶的作用[J]. 中國(guó)海洋藥物雜志，2006，25 ( 2) : 48 52[14] 馬建國(guó)， 薛開(kāi)先，吳建中，等. 鹽藻β胡蘿卜素抗突變效應(yīng)[J]. 中國(guó)藥理學(xué)報(bào)， 1998，19 (3) : 282 284[15] 趙素娟，王淑惠，鄧雪，等. 鹽藻素抗突變作用的初探[J]. 衛(wèi)生毒理學(xué)雜志， 2003， 17 (1) : 65 66[16] 張福，馬若欣，呂愛(ài)玲，等. 極端嗜鹽綠色杜氏藻生物學(xué)特性研究(一) [J] . 海湖鹽與化工，2005，34 (1) ∶26 – 27[17] 林廣鳳. 鹽生杜氏藻的生物學(xué)特性及其開(kāi)發(fā)應(yīng)用[J] . 齊魯漁業(yè)，2006 ，23 (11):710[18] PULZ O. Photobioreactors: production systems for phototrophic microorganisms [J], Appl. Microbiol. Biotechnol. 2001, 57 ( 3 ) : 287293.[19] BOROWITZKA L J, BOROWIT ZKA M A. Commercial production of βcarotene by Dunalella salina in open ponds [J]. Bull Mar. Sci, 1990, 47( 3) : 244252.[20] BOROWITZKA M A. Commercial production of microalgae: pond, tanks, tubes and fermenters[J]. J . Biotechnol , 1999, 70 ( 13 ) : 313321.[21] BOROWITZKA M A. The mass culture of Dunaliella salina [M] . Bangkok, Thailand: FAO Network of Agriculture Centers in Asia, 1990: 6380.[22] BENAMOTZA. Production of βcarotene and vitamine by the halotolerant algae Dunaliella[C] AHAWAYA, ZABROSHYO. Ma. rine Biotechnology. New York: Plenum Press. 1993: 411 417.[23] BOROWIT ZKA M A. Closed algal photobi or eactors: design considerations for largescale systems [J] . J. Mar. Biotechnol. , 1996, 4 ( 2) : 185 191.[24] 黃小娟，沈洛夫， 姜建國(guó)，等. 鹵代物對(duì)鹽藻生長(zhǎng)抑制實(shí)驗(yàn)的聯(lián)合效應(yīng)的觀察[J]. 癌變較低濃度的水楊酸對(duì)鹽藻色素（主要是β胡蘿卜素）的積累具有一定的促進(jìn)作用，本實(shí)驗(yàn)中1mg/L的水楊酸促進(jìn)作用最明顯，可以明顯加快色素的積累進(jìn)程。第四章 結(jié)論第四章 結(jié)論，低濃度（1mg/L）的水楊酸對(duì)鹽藻的生長(zhǎng)具有一定的促進(jìn)作用；高濃度（5mg/L、10mg/L）的水楊酸前期對(duì)細(xì)胞的生長(zhǎng)具有一定的促進(jìn)作用，后期具有明顯的致死作用。這與曾正兵[34]等關(guān)于NAA對(duì)鹽藻生長(zhǎng)與物質(zhì)積累的影響的研究相符合，其研究表明隨著萘乙酸濃度的遞增，總可溶性蛋白的含量呈現(xiàn)先上升后下降的趨勢(shì)。對(duì)照組的可溶性蛋白含量在18天之前呈上升趨勢(shì)，18天達(dá)到最大值，而后逐步下降，這是由于營(yíng)養(yǎng)鹽饑餓等一系列生存條件限制。 蛋白標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的制作表3 0~100μg/mL牛血清白蛋白溶液所對(duì)應(yīng)的OD值A(chǔ)5950蛋白質(zhì)含量（μg/mL）020406080100圖9 牛血清白蛋白標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn) 鹽藻總可溶性蛋白 總可溶性蛋白含量的測(cè)定圖10 鹽藻總可溶性蛋白含量變化趨勢(shì) 總可溶性蛋白含量的討論由圖10可知，5mg/L處理組在第36天時(shí)期可溶性蛋白的含量有一個(gè)上升的過(guò)程，而后呈下降趨勢(shì)。根據(jù)上述推測(cè)，外源植物激素或生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑也可以促進(jìn)鹽藻積累天然β胡蘿卜素。而通過(guò)比較已獲得的鹽藻cbr基因和雨生紅球藻的β胡蘿卜素酮化酶基因539。有研究表明，某些高等植物激素能夠顯著促進(jìn)雨生紅球藻中蝦青素的積累[2631]，如5mg/L的水楊酸能有效促進(jìn)雨生紅球藻積累蝦青素（營(yíng)養(yǎng)鹽饑餓，25℃，5000lx，24h連續(xù)光照培養(yǎng)），第21天時(shí)，蝦青素的含量達(dá)到最高，%。在一定的范圍內(nèi)，低濃度的水楊酸對(duì)鹽藻細(xì)胞生長(zhǎng)具有一定的促進(jìn)作用，即鹽藻細(xì)胞的生物量比較多，同時(shí)低濃度的水楊酸還能促進(jìn)細(xì)胞產(chǎn)生色素，所以色素總量比較大。6天以后，由于鹽藻細(xì)胞大量死亡，從而導(dǎo)致色素的含量急劇下降；對(duì)照組和1mg/L處理組的色素在誘導(dǎo)前18天都是逐漸上升的，18天到達(dá)最大值。 鹽藻色素含量圖8 鹽藻色素含量變化趨勢(shì) 色素含量的討論由圖8可以看出，對(duì)照組和處理組的色素（主要是β胡蘿卜素）含量都是先升后降的，5和10mg/L處理組在第6天達(dá)到最大值，這是由于水楊酸對(duì)鹽藻細(xì)胞生長(zhǎng)具有一定的促進(jìn)作用，使鹽藻細(xì)胞大量分裂，數(shù)目上升。其研究表明低濃度的赤霉素對(duì)鹽藻的生長(zhǎng)具有一定的促進(jìn)作用，較高濃度的赤霉素對(duì)鹽藻生長(zhǎng)的影響是先促進(jìn)細(xì)胞分裂后抑制鹽藻生長(zhǎng)，變化趨勢(shì)是先升后降。高濃度的水楊酸在誘導(dǎo)前期對(duì)鹽藻細(xì)胞的生長(zhǎng)有促進(jìn)作用，在誘導(dǎo)后期有明顯的致死作用。從培養(yǎng)6天往后就發(fā)生了變化，對(duì)照組和1mg/L的水楊酸處理組在誘導(dǎo)培養(yǎng)6～15天過(guò)程中藻細(xì)胞密度都是上升的，15天時(shí)達(dá)到高峰，而后又逐步下降，1mg/L處理組的上升趨勢(shì)明顯高于處理組，說(shuō)明在一定范圍內(nèi)，低濃度的水楊酸對(duì)鹽藻的生長(zhǎng)有促進(jìn)作用。通過(guò)鏡檢發(fā)現(xiàn)藻細(xì)胞經(jīng)過(guò)18天誘導(dǎo)藻細(xì)胞的顏色由綠色變?yōu)辄S綠色（圖6）。（4）比色：取上清液1mL，加入4mL考馬斯亮藍(lán)G250，充分混勻，靜置2min，以1mLPBS和4mL考考馬斯亮藍(lán)G250的混合物為對(duì)照，在595nm測(cè)量相應(yīng)的吸光度值，并記錄實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。破壁過(guò)程中需要冰浴保護(hù)，防止超聲波破壁儀工作中產(chǎn)生的高溫對(duì)藻細(xì)胞的灼傷。表2 牛血清白蛋白(BSA)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)加樣過(guò)程 試管號(hào)123456BSA原液（mL）0蒸餾水（mL）0BSA濃度（μg/mL）020406080100 (2) 鹽藻總可溶性蛋