酶標儀的工作原理與基本結(jié)構(gòu)(參考版)
2025-06-21 01:31本頁面
【正文】 壓力不是有人比你努力，而是那些比你牛幾倍的人依然比你努力。最值得欣賞的風(fēng)景，是自己奮斗的足跡。不要做金錢、權(quán)利的奴隸；應(yīng)學(xué)會做“金錢、權(quán)利”的主人。贈語； 如果我們做與不做都會有人笑，如果做不好與做得好還會有人笑，那么我們索性就做得更好，來給人笑吧！ 現(xiàn)在你不玩命的學(xué)，以后命玩你。酶標儀的其他部分的結(jié)構(gòu)，與光電比色計和小型生化分析儀基本相同。在機械驅(qū)動裝置的作用下，樣品被8個一排、8個一排檢測。多通道酶標儀一般都是自動型的，它設(shè)有多個光束和多個光電檢測器。手動型靠手移動微孔板來進行測量。酶標儀有單通道和多通道兩種類型，單通道又分為自動型和手動型兩種。圖14 一種酶標儀光路系統(tǒng)一般酶標儀的光束既可以設(shè)計成從上到下通過比色液，也可以設(shè)計成從下到上通過比色。圖14是一種酶標儀的光路系統(tǒng)。酶標儀既可以使用和分光光度計相同的單色器，也可以使用干涉濾光片來獲得單色光。每個小孔可以盛放零點幾毫升的溶液。但對于非自動型的酶標儀，它是用手工來移動微孔板的，可以省去X、Y方向的機械驅(qū)動機構(gòu)及其電路，這樣的儀器體積更小，結(jié)構(gòu)也更簡單。最后由顯示器和打印機將測試結(jié)果顯示、打印出來。光電檢測器將投射到其上面的光信號的強弱變成電信號的大小。圖13 酶標檢測儀工作原理圖光源燈發(fā)出的光線經(jīng)過濾光片或單色器后，成為一束單色光束。實際上，酶標儀就是一臺變相的光電比色計或分光光度計，其基本工作原理與主要結(jié)構(gòu)和光電比色計幾乎相同。待測管越淡，表示標本中抗原量越多。參考管中由于結(jié)合的酶標抗原量最多，故顏色最深。然后洗滌。這樣，受檢標本中抗原量越高，則由于這些抗原與固相抗體結(jié)合，競爭性地占去了酶標抗原與固相抗體結(jié)合的機會，使酶標抗原與固相抗體的結(jié)合量越少。若受檢標本中無抗原，則酶標抗原能順利地與固相抗體結(jié)合。然后洗滌。以測定抗原為例，受檢抗原和酶標抗原競爭與固相抗體結(jié)合，因此，結(jié)合于固相的酶標抗原量與受檢抗原的量成正比，其示意圖如圖12所示。（4）加底物顯色，顏色深度代表標本中受檢抗體量。（3）加酶標抗免疫球蛋白（酶標抗體），它與固相復(fù)合物中的抗體相結(jié)合，從而使該抗體間接地標記上酶。經(jīng)洗滌后，固相載體上只留下特異性抗體。然后洗滌除去未結(jié)合的抗原及雜質(zhì)。其原理為利用酶標記的抗體來檢測已與固相抗原結(jié)合的受檢抗體。本法只適用于二價或二價以上大分子抗原的檢出和定量分析，而不能用于半抗原等小分子的測定。夾心式復(fù)合物中的酶催化底物變?yōu)橛猩a(chǎn)物。此時，固相載體上帶有的酶量就代表標本中受檢抗原的量。（3）加酶標抗體，使固相免疫復(fù)合物上的抗原與酶標抗體結(jié)合。（2）加受檢標本使之與固相抗體接觸反應(yīng)一段時間，讓標本中的抗原與固相抗體結(jié)合，形成固相抗原抗體復(fù)合物。具體操作步驟如下：圖10 雙抗體夾心法測抗原示意圖（1）將特異性抗體與固相載體聯(lián)結(jié)，形成固相抗體。現(xiàn)介紹3種最常用的方法。在這種測定方法中有3個必要的試劑：固相的抗原或抗體、酶標記的抗原或抗體和酶反應(yīng)的底物。這樣，便可根據(jù)所生成的顏色的深淺，來分析抗原或抗體的含量。當加入底物后，能使底物顯色。顏色的深淺與相應(yīng)的抗原或抗體的量成正比。酶標抗原或抗體與此結(jié)合形成酶標記的免疫復(fù)合物。一般光電池的靈敏度為幾百微安/流明。除了光譜靈敏范圍之外，光電檢測元件的另一個重要指標是積分靈敏度，簡稱靈敏度。如有的工作在300～1100nm，有的工作在500～1000nm，還有的工作在380～780nm。它幾乎無疲勞現(xiàn)象，是很受歡迎的一種新型光電池。常用的光電池除了硒光電池外，還有硅光電池。光電池的優(yōu)點是結(jié)實、便宜、使用方便，不需外接電源就可以直接送到微安表或檢流計上去顯示。如果光電池已經(jīng)疲勞，最簡單的恢復(fù)辦法是把它置于暗處一段時間，使其慢慢恢復(fù)靈敏度。因此，光電池不要連續(xù)使用過久。當光電流非常微弱或沒有時，說明光電池已經(jīng)失效。方法是先將表置于100μA或50μA檔，有正表棒接硒光電池的正極——背面鋁片，負表棒接負極——正面集電環(huán)。圖11 硒光電池和人眼對不同波長光的感應(yīng)曲線在普通室內(nèi)照明的條件下，硒光電池產(chǎn)生的光電流有幾十至幾百微安。硒光電池的工作范圍在380～750nm，包含了整個可見光范圍。應(yīng)用起來很方便。所產(chǎn)生的光電流與入射光強成正比。這種現(xiàn)象由于是在物體內(nèi)部產(chǎn)生的，有時也把它叫做“內(nèi)光電效應(yīng)”。因此，在金屬膜電極上便積累了較多的電子。這一阻擋層既能夠阻止硒半導(dǎo)體中的空穴向金屬膜中擴散，也能夠阻止金屬膜中的電子向硒半導(dǎo)體中擴散。然后，再在硒上濺鍍一層半透明的金屬薄膜（如銀或氧化鎘等），作為另一極。如硒光電池、硅光電池等，其中硒光電池應(yīng)用較廣，它的結(jié)果如圖10所示。光電檢測器必須滿足以下3個條件：（1）光電轉(zhuǎn)換須滿足恒定的函數(shù)關(guān)系；（2）波長響應(yīng)范圍寬；（3）靈敏度高，響應(yīng)速度快，產(chǎn)生的電信號易于檢測和放大，噪聲低。四、光電檢測器前面已經(jīng)述及，光電檢測器是用來將光能轉(zhuǎn)換成電能的器件。若有液體溢出，一定要把其外表的水分擦干。使用時，溶液不要放得太滿，以防液體溢出。因為透光方向換向后，其透光性可能會發(fā)生改變。不透光的兩壁被磨成毛沙面或其他不透光面，以示區(qū)別。比色皿的內(nèi)壁和透光外壁都應(yīng)注意清潔，不能用硬質(zhì)纖維或用手去摸。在其他條件不變的情況下，％。在同一測定中所使用的所有比色皿的光徑（內(nèi)徑）必須一致。盡管可以做成各種形狀和尺寸，但國際上規(guī)定，液層厚度為10mm的比色皿為標準比色皿。氣體比色皿需加有蓋子。此外，還有流動比色皿、微量比色皿、可拆卸比色皿等，如圖9所示
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