酶標(biāo)儀的工作原理與基本結(jié)構(gòu)(文件)
【正文】 的比色皿為標(biāo)準(zhǔn)比色皿。在其他條件不變的情況下，％。不透光的兩壁被磨成毛沙面或其他不透光面，以示區(qū)別。使用時(shí)，溶液不要放得太滿，以防液體溢出。四、光電檢測(cè)器前面已經(jīng)述及，光電檢測(cè)器是用來將光能轉(zhuǎn)換成電能的器件。如硒光電池、硅光電池等，其中硒光電池應(yīng)用較廣，它的結(jié)果如圖10所示。這一阻擋層既能夠阻止硒半導(dǎo)體中的空穴向金屬膜中擴(kuò)散，也能夠阻止金屬膜中的電子向硒半導(dǎo)體中擴(kuò)散。這種現(xiàn)象由于是在物體內(nèi)部產(chǎn)生的，有時(shí)也把它叫做“內(nèi)光電效應(yīng)”。應(yīng)用起來很方便。圖11 硒光電池和人眼對(duì)不同波長(zhǎng)光的感應(yīng)曲線在普通室內(nèi)照明的條件下，硒光電池產(chǎn)生的光電流有幾十至幾百微安。當(dāng)光電流非常微弱或沒有時(shí)，說明光電池已經(jīng)失效。如果光電池已經(jīng)疲勞，最簡(jiǎn)單的恢復(fù)辦法是把它置于暗處一段時(shí)間，使其慢慢恢復(fù)靈敏度。常用的光電池除了硒光電池外，還有硅光電池。如有的工作在300～1100nm，有的工作在500～1000nm，還有的工作在380～780nm。一般光電池的靈敏度為幾百微安/流明。顏色的深淺與相應(yīng)的抗原或抗體的量成正比。這樣，便可根據(jù)所生成的顏色的深淺，來分析抗原或抗體的含量。現(xiàn)介紹3種最常用的方法。（2）加受檢標(biāo)本使之與固相抗體接觸反應(yīng)一段時(shí)間，讓標(biāo)本中的抗原與固相抗體結(jié)合，形成固相抗原抗體復(fù)合物。此時(shí)，固相載體上帶有的酶量就代表標(biāo)本中受檢抗原的量。本法只適用于二價(jià)或二價(jià)以上大分子抗原的檢出和定量分析，而不能用于半抗原等小分子的測(cè)定。然后洗滌除去未結(jié)合的抗原及雜質(zhì)。（3）加酶標(biāo)抗免疫球蛋白（酶標(biāo)抗體），它與固相復(fù)合物中的抗體相結(jié)合，從而使該抗體間接地標(biāo)記上酶。以測(cè)定抗原為例，受檢抗原和酶標(biāo)抗原競(jìng)爭(zhēng)與固相抗體結(jié)合，因此，結(jié)合于固相的酶標(biāo)抗原量與受檢抗原的量成正比，其示意圖如圖12所示。若受檢標(biāo)本中無抗原，則酶標(biāo)抗原能順利地與固相抗體結(jié)合。然后洗滌。待測(cè)管越淡，表示標(biāo)本中抗原量越多。圖13 酶標(biāo)檢測(cè)儀工作原理圖光源燈發(fā)出的光線經(jīng)過濾光片或單色器后，成為一束單色光束。最后由顯示器和打印機(jī)將測(cè)試結(jié)果顯示、打印出來。每個(gè)小孔可以盛放零點(diǎn)幾毫升的溶液。圖14是一種酶標(biāo)儀的光路系統(tǒng)。酶標(biāo)儀有單通道和多通道兩種類型，單通道又分為自動(dòng)型和手動(dòng)型兩種。多通道酶標(biāo)儀一般都是自動(dòng)型的，它設(shè)有多個(gè)光束和多個(gè)光電檢測(cè)器。酶標(biāo)儀的其他部分的結(jié)構(gòu)，與光電比色計(jì)和小型生化分析儀基本相同。不要做金錢、權(quán)利的奴隸；應(yīng)學(xué)會(huì)做“金錢、權(quán)利”的主人。壓力不是有人比你努力，而是那些比你牛幾倍的人依然比你努力。最值得欣賞的風(fēng)景，是自己奮斗的足跡。贈(zèng)語； 如果我們做與不做都會(huì)有人笑，如果做不好與做得好還會(huì)有人笑，那么我們索性就做得更好，來給人笑吧！ 現(xiàn)在你不玩命的學(xué)，以后命玩你。在機(jī)械驅(qū)動(dòng)裝置的作用下，樣品被8個(gè)一排、8個(gè)一排檢測(cè)。手動(dòng)型靠手移動(dòng)微孔板來進(jìn)行測(cè)量。圖14 一種酶標(biāo)儀光路系統(tǒng)一般酶標(biāo)儀的光束既可以設(shè)計(jì)成從上到下通過比色液，也可以設(shè)計(jì)成從下到上通過比色。酶標(biāo)儀既可以使用和分光光度計(jì)相同的單色器，也可以使用干涉濾光片來獲得單色光。但對(duì)于非自動(dòng)型的酶標(biāo)儀，它是用手工來移動(dòng)微孔板的，可以省去X、Y方向的機(jī)械驅(qū)動(dòng)機(jī)構(gòu)及其電路，這樣的儀器體積更小，結(jié)構(gòu)也更簡(jiǎn)單。光電檢測(cè)器將投射到其上面的光信號(hào)的強(qiáng)弱變成電信號(hào)的大小。實(shí)際上，酶標(biāo)儀就是一臺(tái)變相的光電比色計(jì)或分光光度計(jì)，其基本工作原理與主要結(jié)構(gòu)和光電比色計(jì)幾乎相同。參考管中由于結(jié)合的酶標(biāo)抗原量最多，故顏色最深。這樣，受檢標(biāo)本中抗原量越高，則由于這些抗原與固相抗體結(jié)合，競(jìng)爭(zhēng)性地占去了酶標(biāo)抗原與固相抗體結(jié)合的機(jī)會(huì)，使酶標(biāo)抗原與固相抗體的結(jié)合量越少。然后洗滌。（4）加底物顯色，顏色深度代表標(biāo)本中受檢抗體量。經(jīng)洗滌后，固相載體上只留下特異性抗體。其原理為利用酶標(biāo)記的抗體來檢測(cè)已與固相抗原結(jié)合的受檢抗體。夾心式復(fù)合物中的酶催化底物變?yōu)橛猩a(chǎn)物。（3）加酶標(biāo)抗體，使固相免疫復(fù)合物上的抗原與酶標(biāo)抗體結(jié)合。具體操作步驟如下：圖10 雙抗體夾心法測(cè)抗原示意圖（1）將特異性抗體與固相載體聯(lián)結(jié)，形成固相抗體。在這種測(cè)定方法中有3個(gè)必要的試劑：固相的抗原或抗體、酶標(biāo)記的抗原或抗體和酶反應(yīng)的底物。當(dāng)加入底物后，能使底物顯色。酶標(biāo)抗原或抗體與此結(jié)合形成酶標(biāo)記的免疫復(fù)合物。除了光譜靈敏范圍之外，光電檢測(cè)元件的另一個(gè)重要指標(biāo)是積分靈敏度，簡(jiǎn)稱靈敏度。它幾乎無疲勞現(xiàn)象，是很受歡迎的一種新型光電池。光電池的優(yōu)點(diǎn)是結(jié)實(shí)、便宜、使用方便，不需外接電源就可以直接送到微安表或檢流計(jì)上去顯示。因此，光電池不要連續(xù)使用過久。方法是先將表置于100μA或50μA檔，有正表棒接硒光電池的正極——背面鋁片，負(fù)表棒接負(fù)極——正面集電環(huán)。硒光電池的工作范圍在380～750nm，包含了整個(gè)可見光范圍。所產(chǎn)生的光電流與入射光強(qiáng)成正比。因此，在金屬膜電極上便積累了較多的電子。然后，再在硒上濺鍍一層半透明的金屬薄膜（如銀或氧化鎘等），作為另一極。光電檢測(cè)器必須滿足以下3個(gè)條件：（1）光電轉(zhuǎn)換須滿足恒定的函數(shù)關(guān)系；（2）波長(zhǎng)響應(yīng)范圍寬；（3）靈敏度高，響應(yīng)速度快，產(chǎn)生的電信號(hào)易于檢測(cè)和放大，噪聲低。若有液體溢出，一定要把其外表的水分擦干。因?yàn)橥腹夥较驌Q向后，其透光性可能會(huì)發(fā)生改變。比色皿的內(nèi)壁和透光外壁都應(yīng)注意清潔，不能用硬質(zhì)纖維或用手去摸。在同一測(cè)定中所使用的所有比色皿的光徑（內(nèi)徑）必須一致。氣體比色皿需加有蓋子。在可見光范圍內(nèi)，比色皿常用無色光學(xué)玻璃或塑料制成；在紫外區(qū)，常用石英玻璃來制作。另外還有一種濾光片叫中性濾光片，可以用它
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