【正文】 目前，側(cè)耳屬、木耳屬種間原生質(zhì)體融合已有成功范例 。 (3)雜種細(xì)胞的選擇 融合后可能形成同源融合體、異源融合體或未經(jīng)融合的原生質(zhì)體，從大量的混合體中選擇出雜種細(xì)胞的方法有 3種： ①利用雜種及親本的原生質(zhì)體對某種營養(yǎng)成分反應(yīng)不同的營養(yǎng)選擇法； ②利用親本的營養(yǎng)缺陷型或在抗藥性上的互補(bǔ)進(jìn)行鑒定的互補(bǔ)選擇法； ③對異核體進(jìn)行早期識別，然后分別培養(yǎng)、定位觀察的異核體分別培養(yǎng)法。電融合是在兩個貼近的原生質(zhì)體間的無蛋白質(zhì)的脂質(zhì)區(qū)，經(jīng)過電脈沖的作用而被擊穿，從而導(dǎo)致兩個原生質(zhì)體的融合。 PEG質(zhì)量濃度為 5 000g／ mL，加入 30％ CaCl2溶液。其主要步驟有： (1)原生質(zhì)體分離培養(yǎng) 選擇生長旺盛且較為幼嫩的菌絲體， 破壁酶 常選用蝸牛酶、纖維素酶、溶壁酶、幾丁質(zhì)酶等，并注意酶處理的溫度、時間等。 2．原生質(zhì)體融合 原生質(zhì)體融合是將兩種親株細(xì)胞經(jīng)脫壁后取得原生質(zhì)體，并使之融合、再生，從而獲得雜種。食用菌基因工程起步較晚，有許多問題尚待解決，如適宜載體的構(gòu)建、轉(zhuǎn)化體系的建立等。在育種中，只有從大量個體中篩得合乎目標(biāo)的個體后才能利用。 (3)載體傳遞 體外重組的 DNA分子引入受體細(xì)胞。其主要步驟為： (1)準(zhǔn)備材料 用理化方法取得供體細(xì)胞的“目的”基因，取得可運載“目的”基因的載體如細(xì)菌質(zhì)粒，取得專一性強(qiáng)、能分別將供體 DNA及載體 DNA切斷的工具酶。下面主要介紹基因工程及細(xì)胞工程中的原生質(zhì)體融合。 (三 )雜交育種的步驟 親本菌株 分離單孢 配對雜交 雜種鑒定 初篩 復(fù)篩、擴(kuò)大試驗、示范推廣 用單孢分離或平板稀釋的方法獲得單孢 將各擔(dān)孢子萌發(fā)的單核菌絲在平板上分別兩兩配對 通過標(biāo)記鑒別雜種 小型栽培試驗淘汰差的菌株 更精確的試驗選出優(yōu)良菌株 四、 遺傳工程 遺傳工程包括狹義及廣義兩種。具有優(yōu)勢的雜種，常呈高活性酶區(qū)帶或出現(xiàn)雙親不具備的同工酶新區(qū)帶。現(xiàn)已廣泛采用酯酶、過氧化物酶、漆酶和超氧化物歧化酶等同工酶譜鑒定雜種，通過比較親本和雜種的酶譜，可確定子代是否為真正雜交種。近年來，已應(yīng)用多元分析法測定若干與產(chǎn)量有關(guān)的數(shù)量性狀選配強(qiáng)優(yōu)組合，也有人采用同工酶來鑒定親本遺傳差異或測定不同菌株若干經(jīng)濟(jì)性狀的遺傳相似性選配強(qiáng)優(yōu)組合，以提高預(yù)見性、準(zhǔn)確性，節(jié)省人力、物力，縮短育種進(jìn)程。 親本的選配是雜交育種的雜種后代出現(xiàn)理想性狀組合的關(guān)鍵。即當(dāng)一條單核菌絲與一條雙核菌絲接觸時，一個可親和的核會遷移至單核菌絲內(nèi)，形成一條新的含有兩個異核的雙核菌絲，這就是 布勒現(xiàn)象 。 (二 )雜交育種需注意的基本問題 (1)單 單交配方式 在食用菌育種中，當(dāng)兩條可親和的單核菌絲接觸發(fā)生質(zhì)配后，兩個異核共處在一個共同的細(xì)胞質(zhì)中，隨后發(fā)生鎖狀聯(lián)合形成雙核菌絲，雙核菌絲經(jīng)核配、減數(shù)分裂后再形成新的子代。食用菌可利用菌絲的無性繁殖，把雜一代菌株的優(yōu)勢固定下來，從而獲得一個新的優(yōu)良品種。優(yōu)點：雜交優(yōu)勢；可預(yù)見性。 (3)染色體畸變 某些強(qiáng)烈的理化因子如 X射線、亞硝酸等可造成 DNA分子的大損傷，導(dǎo)致染色體結(jié)構(gòu)和數(shù)目發(fā)生變化。 (2)移碼突變 由于 DNA分子中的一個或少數(shù)幾個核苷酸的增加或缺失，造成這一對核苷酸以后的全部遺傳密碼發(fā)生轉(zhuǎn)錄或轉(zhuǎn)譯錯誤的突變。從突變發(fā)生的原因看，可分為自發(fā)突變和誘發(fā)突變。突變包括染色體畸變和基因突變，尤以后者常見。人工誘變育種可提高突變頻率，創(chuàng)造自然界原來所沒有的性狀，且操作簡便，周期短，現(xiàn)已受到食用菌研究者的普遍重視。 (5)擴(kuò)大試驗 品比試驗選出的菌株與當(dāng)?shù)氐闹髟跃赀M(jìn)行更大規(guī)模的栽培試驗，對各指標(biāo)加以驗證并選出優(yōu)良菌株。 (3)生理性能測定 為提高選種效率，將不同編號菌株兩兩配對進(jìn)行拮抗試驗，觀察是否有拮抗線，淘汰編號不同但基因型相同的重復(fù)菌株，同時在平板上進(jìn)行菌絲生長速度的測定，分析溫度等因子對試驗的影響。 (1)收集品種資源 首先根據(jù)選種目標(biāo)，盡可能多地收集足夠數(shù)量的有代表性的野生菌株及栽培菌株，并注意菌株的地域性差異以及性狀差異。孢絲褐色，不分枝。內(nèi)包被煙灰色，無格，近球形；嘴部呈闊圓錐形，直徑 23cm，表面有放射狀縱溝，基部凹陷。 Puffballs (Lycoperdon spp.) in an immature white stage. Puffballs of Lycoperdon spp. in the mature, brown stage (about 3 cm diameter) A single puffball, Lycoperdon perlatum, ? 尖頂?shù)匦?[Geastrum triples（ Jungh.） Fisch.] 菌蕾球形，徑 34cm，有突出的嘴部。孢子青黃色，球形， ，表面光滑。常見種如下： ? 梨形馬勃（ Lycoperdon pyriforme Schaeff.）擔(dān)子果群生至散生，梨形或近梨形，高 35cm，粗 ，不育的基部較發(fā)達(dá)，以白色根狀菌索固定于基物上。成熟后其內(nèi)部全部變?yōu)榍嗪稚?、黑褐色或黑色的粉末，即其孢子；在其間亦常混有孢絲。最主要的種類概述于下： ? 短裙竹蓀 ［ Dictyophora duplicata（ Bosc） Fischer］ 短裙竹蓀 紅鬼筆 Phallus rubicundus(Bosc)Fr. ? 白鬼筆 （ Phallus impudicus L.） 二、馬勃目 擔(dān)子果多呈球形、近球形或其他形狀，無柄或有柄；基部有白色、根狀菌索；或有不孕的基部。 一、鬼筆目 （臭角菌） ? 擔(dān)子果生于地下或地面，近球形、卵形或洋梨形，成熟時包被開裂，孢托伸長，外露，包被遺留于孢托下部成為菌托。其中可食與藥用的種類頗多。 ? 本綱擔(dān)子果大部分生于地下，成熟時露出地面；有些生在地面；也有些永久生在地下。有些種類的孢體和孢子到成熟時分解，另一些種類的孢子和孢體則持久而不分解。大多可食，少數(shù)有毒。孢子黃色，光滑，近棱形，成堆時青褐色。 ? 香菇屬（ Lentinus）擔(dān)子果木生，半肉質(zhì)至革質(zhì)，堅韌，干時收縮，濕潤時恢復(fù)原狀。毒素為毒肽和毒傘肽。 ? 豹斑毒傘 [豹斑鵝膏，Amanita pantherina（ Fr.）Seer.]是最常見的 1種，含毒蠅堿。 蘑菇 ? 毒傘屬（鵝膏屬，Amanita）生于土地上，肉質(zhì)，速腐性，菌蓋傘形，具有菌環(huán)和菌托，菌柄易與菌蓋分離，菌褶離生，孢子印白色，孢子無色。本屬生于地上，許多種可供食用。有菌環(huán)，菌褶離生，初期白色或淡色，后變?yōu)樽虾稚蚝谏? 幼子實層封閉 子實體發(fā)育，菌蓋擴(kuò)展內(nèi)菌幕撕裂形成菌環(huán)，外菌幕撕裂形成菌托 發(fā)育中的子實層具內(nèi)外菌幕 菌環(huán) ：傘菌子實體長大，內(nèi)菌幕破裂，殘留在菌柄上的內(nèi)菌幕發(fā)育成菌環(huán) 菌托 ：傘菌子實體長大，外菌幕破裂后大部分殘留于菌柄基部的外菌幕發(fā)育成菌托 ? 本目種類繁多，今舉最常見的幾種略述于下。