熒光分析法ppt課件(2)(參考版)
2025-05-06 05:22本頁面
【正文】 習(xí)題： ? ，在去活化過程有哪些方式？ 分子熒光是如何發(fā)生的？ ， 激發(fā)光波長若選擇在 320nm， 拉曼光波長 360nm；若選在 350nm， 拉曼 光波長為 400nm， 熒光波長為 448nm， 則測定時選 擇激發(fā)光波長應(yīng)為 nm， 熒光波長應(yīng)為 nm。 ? 熟悉內(nèi)容： ⒈ 分子從激發(fā)態(tài)返回基態(tài)的各種途徑； ⒉ 熒光壽命與熒光效率； ⒊ 熒光定量分析法 。 例：見書 224～ 225頁 第二節(jié) 熒光定量分析方法 一、熒光強度與物質(zhì)濃度的關(guān)系 I0 I F ① 在 ECl≤ 時， F = K C,溶液的熒光強度與溶 液中熒光物質(zhì)的濃度呈線性關(guān)系； ②在 ECl＞ ，溶液的熒光強度與溶液中熒光物 質(zhì)的濃度不呈線性關(guān)系； ③熒光分析法的測定靈敏度高。 ⑹散射光 散射光對熒光測定有干擾，尤其是波長比入 射光波長更長的拉曼光。 ④當物質(zhì)中存在能與熒光分子發(fā)生能量轉(zhuǎn)移的 物質(zhì)時，有時也使體系的熒光強度下降。 ③ 自猝滅： 當熒光物質(zhì)的濃度較大時，會產(chǎn)生 激發(fā)態(tài)的熒光分子與基態(tài)的熒光分子碰撞從而 使熒光猝滅。 氧是最常見的碰撞猝滅劑，因此在較嚴格的熒光實驗室 中，需要除氧。 ①動態(tài)猝滅：被激發(fā)的熒光分子與猝滅劑發(fā)生碰撞，使熒 光分子以無輻射形式躍遷回到基態(tài)而使熒光猝滅。 ⑷ 熒光猝滅 熒光猝滅： 熒光分子與溶劑或其它溶質(zhì)分子之間相互 作用，使熒光強度減弱的作用。 如：在 pH7～ 12的溶液中，苯胺以分子形式存 在，產(chǎn)生藍色熒光； 當 pH＜ pH＞ 13時，苯胺以陽離子、 陰離子形式存在，均無熒光。 因此，選擇低溫條件進行熒光檢測將有利于 提高分析的靈敏度。 ⑵ 溫度的影響 由于當溫度降低時，溶劑的粘度增大，溶劑 的弛豫作用大大減小，熒光發(fā)射幾率增加；當溫 度升高時，碰撞頻率增加，外轉(zhuǎn)換的去激發(fā)幾率 增加，熒光發(fā)射幾率變小。 ⑴溶劑效應(yīng) ①溶劑的極性： 溶劑的極性增大， π → π ＊ 躍遷的能量減小，紅移。 ③順反異構(gòu)體的熒光性 f? f?聯(lián)苯 芴 = = ㈡ 環(huán)境因素 熒光分子所處的溶液環(huán)境對其熒光發(fā)射有直接的影響。 ②本來不發(fā)生熒光或熒光較弱的物質(zhì)與金屬離子形成 配位化合物后，如果剛性共平面性增加，則可以產(chǎn)生 熒光或增強熒光。 如 :－ NH2, － OH, － OCH3, － NHCH3和 － N(CH3)2等， ②吸電子基團， 使熒光減弱 如 :－ Cl, － Br, － I, － NHCOCH3, － NO2和 － COOH等。 ⑶ 取代基效應(yīng) 苯環(huán)上的取代基會引起最大吸收波長的位移 及相應(yīng)熒光峰的改變。 ④最簡單的雜環(huán)化合物（吡啶、呋喃、噻吩、吡 咯）等不產(chǎn)生熒光。 ②含脂肪族和脂環(huán)族羰基結(jié)構(gòu)的化合物也會發(fā)射熒 光，但這類化合物的數(shù)量比芳香族少。 π ＊ → π 躍遷的量子效率高，是由于 π → π ＊ 躍遷的摩爾吸
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